2.2. Synthesis of 4-nitrobenzaldehy

2.2. Synthesis of 4-nitrobenzaldehyde semicarbazone (used as internal standard)
1.0 g (9.0 mmol) of semicarbazide hydrochloride and 5 g of sodium acetate were dissolved in 50 ml of a mixture of water and dimethyl sulfoxide (95:5, v/v). 0.5 g (3.3 mmol) of 4-nitrobenzaldehyde was added to this solution in small portions. After stirring for 60 min at room temperature, the semicarbazone, a yellow precipitate, was filtered off, washed thoroughly with water–DMSO (95:5, v/v) to remove the excess of semicarbazide and dried in vacuo. The product was examined by mass spectrometry and 1H-NMR.

2.3. LC–MS–MS analysis
The LC–MS–MS system consisted of an Agilent Series 1100 HPLC system (Agilent Technologies, Waldbronn, Germany) connected to a PE Sciex API 365 triple quadrupole mass spectrometer (PE Sciex Instruments, Thornhill, Canada) equipped with an Ion Sprayer (pneumatically assisted electrospray) interface. The column used was an Inertsil® ODS-3, 150×3 mm I.D., 5 μm (GL Sciences, Tokyo, Japan) connected to an Inertsil® ODS-3 pre-column, 10×3 mm I.D., 5 μm. A mixture of methanol and water (50:50, v/v) with 10 mM ammonium acetate was used as mobile phase at a flow rate of 0.5 ml min−1 and at a temperature of 25°C. The solvent flow was split in a ratio of 1:50 prior to MS detection.

MS detection was performed in the positive ion mode using multiple reaction monitoring (MRM). The precursor/product ion combinations are listed in Table 1. The dwell time for each fragmentation pathway was 300 ms. The electrospray voltage was set to 5600 V and the collision energy to 15 eV. Nitrogen was used as collision gas.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.2 การสังเคราะห์ 4 nitrobenzaldehyde semicarbazone (ใช้เป็นมาตรฐานภายใน)
1.0 กรัม (9.0 มิลลิโมล) ของไฮโดรคลอไร semicarbazide และ 5 กรัมของโซเดียมอะซิเตทที่ถูกกลืนหายไปใน 50 มล. ส่วนผสมของน้ำและ dimethyl sulfoxide (95:5, v / v) . 0.5 กรัม (3.3 มิลลิโมล) ของ 4 nitrobenzaldehyde ถูกเพิ่มเข้ามาเพื่อแก้ปัญหานี้ในส่วนเล็ก หลังจากที่กวนเป็นเวลา 60 นาทีที่อุณหภูมิห้อง semicarbazone,ตะกอนสีเหลืองถูกกรองออกล้างให้สะอาดด้วยน้ำ DMSO (95:5, v / v) เพื่อเอา​​ส่วนเกินของ semicarbazide และแห้งในสุญญากาศ ผลิตภัณฑ์ที่ได้รับการตรวจสอบโดยมวลสารและ 1H-NMR.

2.3 การวิเคราะห์, lc-ms-MS
ระบบ LC-ms-MS ประกอบด้วยชุด agilent 1100 ระบบ HPLC (เทคโนโลยี agilent, Waldbronn,เยอรมนี) เชื่อมต่อกับ PE ที่ sciex API 365 สามสเปกโตรมิเตอร์มวล quadrupole (PE sciex เครื่องมือ Thornhill แคนาดา) พร้อมกับเครื่องพ่นสารเคมีไอออน (electrospray ช่วยอัตโนมัติ) อินเตอร์เฟซ คอลัมน์ที่ใช้เป็น inertsil ® ODS-3, 150 × 3 มม. ID, 5 ไมโครเมตร (วิทยาศาสตร์ gl, โตเกียวประเทศญี่ปุ่น) ที่เชื่อมต่อกับ inertsil ® ODS-3 ก่อนคอลัมน์ 10 × 3 มม. ID, 5 ไมโครเมตร ส่วนผสมของเมทานอลและน้ำ (50:50v / v) ที่มี 10 มิลลิเมตรแอมโมเนียมอะซิเตทที่ใช้เป็นเฟสเคลื่อนที่ที่อัตราการไหล 0.5 มล. 1 นาทีและที่อุณหภูมิ 25 องศาเซลเซียส การไหลของตัวทำละลายถูกแบ่งออกในอัตราส่วน 01:50 ก่อนที่จะมีการตรวจสอบมิลลิวินาที.

การตรวจสอบได้ดำเนินการมิลลิวินาทีในโหมดไอออนบวกโดยใช้การตรวจสอบหลายปฏิกิริยา (MRM) ปูชนียบุคคล / ผลิตภัณฑ์ชุดไอออนมีการระบุไว้ในตารางที่ 1อาศัยเวลาสำหรับแต่ละเส้นทางการกระจายตัวเป็น 300 มิลลิวินาที แรงดันไฟฟ้า electrospray ถูกกำหนดให้ 5600 วีและพลังงานการชนกันถึง 15 EV ไนโตรเจนที่ใช้เป็นก๊าซชน

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.2 การสังเคราะห์ semicarbazone 4-nitrobenzaldehyde (ใช้เป็นมาตรฐานภายใน)
1.0 g (mmol 9.0) ของ semicarbazide ไฮโดรคลอไรด์และ 5 กรัมของโซเดียม acetate ถูกละลายใน 50 ml ผสมระหว่างน้ำและ dimethyl sulfoxide (95:5, v/v) มีเพิ่ม 0.5 g (3.3 mmol) ของ 4 nitrobenzaldehyde โซลูชันนี้เราะ หลังจากกวนใน 60 นาทีที่อุณหภูมิห้อง semicarbazone precipitate เหลือง ถูกกรองออก ล้างสะอาด ด้วย water–DMSO (95:5, v/v) เพื่อลบส่วนที่เกินของ semicarbazide และแห้งใน vacuo มีการตรวจสอบผลิตภัณฑ์ โดยรเมทและ 1H-NMR นั้น

2.3 การวิเคราะห์ LC–MS–MS
ระบบ LC–MS–MS ประกอบด้วยระบบ HPLC Agilent ชุด 1100 (Agilent เทคโนโลยี Waldbronn เยอรมนี) เชื่อมต่อกับสเปกโตเป็น PE Sciex API 365 quadrupole ทริมวลรมิเตอร์ (เครื่องมือ Sciex PE, Thornhill แคนาดา) พร้อมอินเทอร์เฟซที่กระบอกฉีดไอออน (pneumatically ช่วยวิธีพ่นละอองไฟฟ้า) คอลัมน์ที่ใช้ได้ Inertsil ® ODS-3, 150 × 3 mm ประชาชน 5 μm (วิทยาศาสตร์ GL โตเกียว ญี่ปุ่น) เชื่อมต่อกับการ Inertsil ® ODS-3 ก่อนคอลัมน์ 10 × 3 mm ประชาชน 5 μm ส่วนผสมของเมทานอลและน้ำ (คนละครึ่ง v/v) มี 10 มม. acetate แอมโมเนียถูกใช้เป็นเฟสเคลื่อน ที่อัตราการไหลของ min−1 0.5 ml และอุณหภูมิ 25 องศาเซลเซียส ขั้นตอนตัวทำละลายถูกแบ่งในอัตราส่วน 1:50 ก่อนที่จะตรวจจับของ MS

ทำการตรวจสอบ MS ในโหมดไอออนบวกที่ใช้ปฏิกิริยาหลาย (MRM) ตรวจสอบ ชุดไอออนสารตั้งต้น/ผลิตภัณฑ์ที่อยู่ในตารางที่ 1 เวลา dwell สำหรับทางเดินการกระจายตัวของแต่ละคุณ 300 วิธีพ่นละอองไฟฟ้าแรงดันไฟฟ้าถูกตั้งค่าให้ 5600 V และชนพลังงาน 15 eV มีใช้ไนโตรเจนเป็นแก๊สชน

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.2 . การสังเคราะห์ของ 4 - nitrobenzaldehyde semicarbazone (ใช้เป็น ภายใน มาตรฐาน)
1.0 กรัม( 9.0 มิลลิโมล)ของมิคาร์บาไซด์ hydrochloride และ 5 G (เช่นอะคีเทตของคนละลายได้ใน 50 มล.ของที่ผสมผสานของน้ำและ dimethyl sulfoxide ( 95 : 5 , v / v ) 0.5 กรัม( 3.3 มิลลิโมล) 4 - nitrobenzaldehyde ถูกเพิ่มในโซลูชันนี้ในส่วนขนาดเล็ก หลังจากการคนสำหรับ 60 นาทีที่ อุณหภูมิ ห้อง semicarbazone ได้ตะกอนสีเหลืองเป็นที่กรองแล้วล้างออกด้วยน้ำสะอาดอย่างทั่วถึง - dmso ( 95 : 5 V / V )เพื่อลบส่วนเกินของเซมิคาร์บาไซด์และแห้งใน vacuo ผลิตภัณฑ์ ที่ได้รับการตรวจสอบโดย spectrometry และ 1 ชั่วโมง - nmr .

2.3 ระบบการวิเคราะห์
LC - มิลลิวินาที - MS LC - MS - มิลลิวินาทีประกอบด้วย, Agilent , 1100 hplc ระบบ Series ( Agilent เทคโนโลยี waldbronnเยอรมัน)เชื่อมต่อกับ PE sciex API 365 สำหรับสามท่าน quadrupole ควอดรูเปิลแมสสเปคโต( PE sciex ตราสารธอร์นฮิลล์ชะงักแคนาดา)ที่จัดให้บริการพร้อมด้วยไอออนกระบอกฉีด( electrospray ตำแหน่งใดก็เพียงแค่ความช่วยเหลือ)อินเตอร์เฟซ คอลัมน์ที่ใช้เป็น inertsil ®โชว์เฟอร์ ODS - 3 , 150 x 3 มม. I . D ., 5 μ m ( gl Sciences ,โตเกียว,ญี่ปุ่น)เชื่อมต่อกับ inertsil ® ODS ก่อน 3 คอลัมน์, 10 x 3 มม. I . D ., 5 μm. การผสมผสานของน้ำและโรงงานเมธานอล( 50 : 50v / v )พร้อมด้วย 10 เช่นอะคีเทต its ammonium มม.ได้เคยถูกใช้เป็นช่วงที่อัตราการไหลของน้ำที่ 0.5 มล.นาที 1 และที่ อุณหภูมิ 25 ° C การไหลของตัวทำละลายที่แยกตัวออกในอัตรา 1 : 50 ก่อนถึงการตรวจจับ Ms .การตรวจจับ

มิลลิวินาทีได้ดำเนินการอยู่ในโหมดไอออนในเชิงบวกที่ใช้การตรวจสอบปฏิกิริยาหลาย( mrm ) การรวมตัวกันไอออนดังขึ้นก่อน/ ผลิตภัณฑ์ ที่มีอยู่ในตาราง 1เวลาที่แช่ ภาพ สำหรับเส้นทางการแบ่งแยกออกเป็นชิ้นเล็กชิ้นน้อยแต่ละครั้งเป็น 300 น.ส. แรงดันไฟฟ้า electrospray ที่ถูกกำหนดให้ 5600 V และพลังงานที่เกิดอุบัติเหตุ 15 EV ไนโตรเจนถูกใช้เป็นก๊าซเกิดอุบัติเหตุ