A single colony of recombinant P. p

A single colony of recombinant P. pastoris GS115 carrying
pJT3 or pPIC9K from an MD plate was precultured in
20mL buffered minimal medium (BMG) (13.4 g L1 YNB
without amino acids, 4104 g L1 biotin, 10 g L1 glycerol
and 100mM potassium phosphate, pH 6.0) at 30 1C for 24 h
in a shaking incubator (OD600nm6–8). Cells were harvested,
pellets resuspended in 100mL BMM and grown at
30 1C for 7 days in a shaking incubator. Absolute methanol
was added at intervals of 24 h to a final concentration of
0.5% to maintain gene expression. Culture aliquots (1 mL)
were collected daily and cells were removed by centrifugation
at 8000 g for 15 min. The supernatant was assayed for
lipase activity as described above

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

โคโลนีเดี่ยวของ recombinant P. pastoris GS115 ดำเนินpJT3 หรือ pPIC9K จากแผ่น MD ถูก precultured ในปริมาณ 20mL buffered กลางน้อยที่สุด (BMG) (13.4 g L 1 YNBไม่ มีกรดอะมิโน 4 10 4 g L 1 ไบโอติน กลีเซอร 10 g L 1และ 100 มม.โพแทสเซียม ฟอสเฟต pH 6.0) ที่ 1C 30 ใน 24 ชมในแบบงก ๆ บ่มเพาะวิสาหกิจ (OD600nm 6 – 8) เซลล์เก็บเกี่ยวผลผลิตขี้ resuspended ใน 100mL BMM และเติบโตที่30 C 1 7 วันในการบ่มเพาะวิสาหกิจงก ๆ เมทานอลแน่นอนเพิ่มในช่วงเวลา 24 ชมเพื่อความเข้มข้นสุดท้ายของ0.5% การรักษายีน วัฒนธรรม aliquots (1 มล)ถูกรวบรวมไว้ทุกวัน และเซลล์ถูกลบ โดย centrifugationที่ g 8000 สำหรับ 15 นาที Supernatant ถูก assayed สำหรับกิจกรรมของเอนไซม์ไลเปสที่อธิบายข้างต้น

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

อาณานิคมเดียวของ recombinant พี pastoris GS115 แบก
pJT3 หรือ pPIC9K จากแผ่น MD ถูก precultured ใน
20 มลบัฟเฟอร์กลางน้อยที่สุด (บีเอ็มจี) (13.4 กรัม L 1 YNB
โดยไม่มีกรดอะมิโนที่ 4? 10? 4 กรัม L 1 ไบโอติน 10 กรัม L 1
กลีเซอรอลและโพแทสเซียมฟอสเฟต100 มมค่า pH 6.0) วันที่ 30 1C เวลา 24
ชั่วโมงในศูนย์บ่มเพาะสั่น(OD600nm? 6-8) เซลล์ที่ถูกเก็บเกี่ยวเม็ด resuspended ใน 100mL BMM และเติบโตที่ 30 1C เป็นเวลา 7 วันในศูนย์บ่มเพาะสั่น แอบโซลูทเมทานอลถูกเพิ่มเข้ามาในช่วงเวลา 24 ชั่วโมงจะมีความเข้มข้นสุดท้ายของ 0.5% ในการรักษาการแสดงออกของยีน aliquots วัฒนธรรม (1 มิลลิลิตร) ที่ถูกเก็บรวบรวมในชีวิตประจำวันและเซลล์ที่ถูกถอดออกโดยการหมุนเหวี่ยงที่ 8,000 กรัมเป็นเวลา 15 นาที สารละลายได้รับการวิเคราะห์สำหรับกิจกรรมเอนไซม์ไลเปสที่อธิบายข้างต้น

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

อาณานิคมเดียวของหน้า pastoris gs115 พก
pjt3 หรือ ppic9k จาก MD แผ่นรีคอมบิแนนท์ 1949 ในหลอดนี้น้อยที่สุด ( BMG )
) ( 13.4 g l  1 ynb
ไม่มีกรดอะมิโน 4  10  4 G L  1 ม 10 กรัมต่อลิตร  1
, กลีเซอรอลและโพแทสเซียมฟอสเฟต , อ 6.0 ) ที่อุณหภูมิ 30 c 24 H
ในเขย่าเครื่องฟักไข่ ( od600nm  6 – 8 ) เซลล์ถูก harvested
เม็ด resuspended ใน BMM 100ml และโตที่
30 ใน 7 วัน ในการเขย่าตู้ฟักไข่ แน่นอนเมทานอล
เพิ่มในช่วงเวลา 24 ชั่วโมงกับความเข้มข้นสุดท้าย
0.5% เพื่อรักษา การแสดงออกของยีน เฉยๆ วัฒนธรรม ( 1 มล. )
เก็บทุกวัน และเซลล์ที่ถูกกำจัดโดย 3
8 , 000 กรัม เป็นเวลา 15 นาที โดยนำซีรั่มสำหรับ
ไลเปสตามที่อธิบายไว้ข้างต้น