3. Results and discussion3.1. Effic

3. Results and discussion
3.1. Efficient single-step affinity purification of Con A over developed Con A aptamer-affinity chromatography

The conventional methods of Con A isolation and purification are multistep procedures involving protein precipitation, dialysis, size exclusion and other purification steps to get pure and concentrated Con A. Affinity purification is usually performed as last stage purification over carbohydrate-based affinity matrices. Since carbohydrates act as ligands to all the lectins, there is a possibility that other lectins may also enrich and cross contaminate the affinity purified preparation of Con A. To overcome these limitations, we have developed an aptamer-based method as a standalone platform to isolate and purify Con A.

The developed aptamer-affinity chromatography consists of a Con A aptamer (aptabody) functionalized stationary phase that act as affinity matrix for selective retention of Con A (Fig. 1). The Con A aptabody is a 41 nt ssDNA aptamer modified at its terminal end with amine moiety [−H2N−(CH2)6] to enable its site-selective immobilization on activated gel matrix. The hexamer C6 linkage at the end of aptamer provides structural flexibility to Con A aptabody and therefore ensures maximal target binding. Coupling efficiency of Con A-aptabody on NHS activated agarose resin was calculated using UV absorption measurement to estimate the final concentration of aptabody in coupled agarose resin, which was calculated to be 5 mM. Coupling efficiency of Con A aptabody over NHS activated agarose resin was 80%. The remaining unreached active sites on agarose were then quenched with 1 M Tris-buffer.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

3. ผลลัพธ์ และสนทนา3.1 ฟอกอย่างมีประสิทธิภาพขั้นตอนเดียวของความสัมพันธ์ของ A คอนเหนือพัฒนาคอน A ความสัมพันธ์ aptamer chromatographyวิธีธรรมดา A แอร์แยกและทำให้บริสุทธิ์เป็น multistep กระบวนที่เกี่ยวข้องกับโปรตีนฝน หน่วย แยกขนาด และอื่น ๆ ขั้นตอนฟอกไปฟอกความสัมพันธ์คอนอ.บริสุทธิ์ และเข้มข้นมักจะดำเนินการเป็นขั้นตอนสุดท้ายฟอกผ่านเมทริกซ์ความสัมพันธ์ใช้คาร์โบไฮเดรต เนื่องจากคาร์โบไฮเดรตทำหน้าที่เป็น ligands จะ lectins ทั้งหมด มีความเป็นไปได้ว่า อาจยังมีบริการอื่น ๆ lectins และเตรียมความสัมพันธ์ที่บริสุทธิ์ของคอนปนเปื้อนข้าม เพื่อเอาชนะข้อจำกัดเหล่านี้ เราได้พัฒนาวิธีการใช้ aptamer เป็นแบบสแตนด์อโลนเพื่อแยก และบริสุทธิ์คอนอ.Chromatography aptamer-ความสัมพันธ์พัฒนาประกอบด้วยคอน A aptamer (aptabody) functionalized เครื่องเขียนตอนหนึ่งที่ทำหน้าที่เป็นเมทริกซ์ความสัมพันธ์สำหรับใช้รักษาคอน (Fig. 1) Aptabody คอน A จะเป็น 41 nt ssDNA aptamer เวลาสิ้นสุดของเทอร์มินัลกับ amine moiety [−H2N− (CH2) 6] ให้ตรึงโปที่ไซต์งานในเมตริกซ์เจเปิด Hexamer เชื่อมโยง C6 ท้าย aptamer มีโครงสร้างยืดหยุ่นตุ๋น aptabody การ และใจผูกเป้าหมายสูงสุดดังนั้น Coupling ของ aptabody A คอนบน agarose NHS ใช้ยางถูกคำนวณใช้วัดการดูดซึมรังสียูวีเพื่อประเมินความเข้มข้นสุดท้ายของ aptabody ใน agarose ควบคู่ยาง ซึ่งมีคำนวณเป็น 5 มม. Coupling ของ aptabody A คอนผ่าน agarose NHS ใช้ยางถูก 80% ไซต์ใช้งาน unreached เหลือบน agarose ถูกแล้ว quenched กับ M 1 ทริสเรทติ้งบัฟเฟอร์

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

3. ผลการอภิปรายและ
3.1 ที่มีประสิทธิภาพขั้นตอนเดียวฟอกความสัมพันธ์ของนักโทษกว่าที่พัฒนาคอนโค aptamer-ความสัมพันธ์วิธีการทั่วไปของการต่อต้านการแยกและการทำให้บริสุทธิ์ขั้นตอนหลายขั้นตอนที่เกี่ยวข้องกับการตกตะกอนโปรตีนฟอกไตยกเว้นขนาดและขั้นตอนการทำให้บริสุทธิ์อื่นๆ ที่จะได้รับคอนบริสุทธิ์และมีความเข้มข้นเอ Affinity การทำให้บริสุทธิ์จะดำเนินการมักจะเป็นขั้นตอนสุดท้ายบริสุทธิ์มากกว่าคาร์โบไฮเดรตตามความสัมพันธ์ของการฝึกอบรม ตั้งแต่คาร์โบไฮเดรตทำหน้าที่เป็นแกนด์ทุกเลคตินที่มีความเป็นไปได้ว่าเลคตินอื่น ๆ นอกจากนี้ยังอาจเสริมสร้างและข้ามปนเปื้อนความสัมพันธ์เตรียมบริสุทธิ์คอน A. เพื่อเอาชนะข้อ จำกัด เหล่านี้เราได้มีการพัฒนาวิธีการ aptamer ที่ใช้เป็นแพลตฟอร์มแบบสแตนด์อโลนที่จะแยก และชำระ Con เอที่พัฒนาaptamer-สัมพันธ์ที่ใกล้ชิดประกอบด้วยโคต่อต้าน aptamer (aptabody) ฟังก์ชันเฟสที่ทำหน้าที่เป็นเมทริกซ์สำหรับการเก็บรักษาความสัมพันธ์เลือก Con A (รูปที่ 1). คอน aptabody เป็น 41 เอ็นที ssDNA aptamer การแก้ไขที่ปลายขั้วกับครึ่งหนึ่ง amine [-H2N- (CH2) 6] เพื่อช่วยให้การตรึงเว็บไซต์การคัดเลือกในวันที่เมทริกซ์เจลที่เปิดใช้งาน เชื่อมโยง C6 hexamer ในตอนท้ายของ aptamer ให้ความยืดหยุ่นโครงสร้างเพื่อต่อต้าน aptabody และดังนั้นจึงทำให้มั่นใจเป้าหมายสูงสุดที่มีผลผูกพัน ประสิทธิภาพการมีเพศสัมพันธ์ของ A-Con aptabody บนพลุกพล่านเปิดใช้งานเรซิน agarose ที่คำนวณโดยใช้การวัดการดูดกลืนรังสียูวีที่จะประเมินความเข้มข้นสุดท้ายของ aptabody ในเรซิน agarose คู่ซึ่งได้รับการคำนวณให้เป็น 5 มิลลิ ข้อต่อประสิทธิภาพในการต่อต้าน aptabody มากกว่าพลุกพล่านเปิดใช้งานเรซิน agarose เป็น 80% ส่วนที่เหลืออีกไม่ถึงเว็บไซต์ที่ใช้งานบน agarose ถูกดับแล้ว 1 M Tris บัฟเฟอร์

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

3 . ผลและการอภิปราย
3.1 . ที่มีประสิทธิภาพในขั้นตอนเดียวสามารถฟอกโกงกว่าพัฒนาโกง aptamer ขี้รังแค

วิธีแบบดั้งเดิมของการแยกและการทำให้บริสุทธิ์ multistep โกงเป็นขั้นตอนที่เกี่ยวข้องกับโปรตีนตกตะกอน ฟอกเลือด ยกเว้นขนาดและขั้นตอนอื่น ๆที่จะได้รับบริสุทธิ์บริสุทธิ์และเข้มข้นด้วย .กลุ่มผลิตมักจะแสดงเป็นขั้นตอนสุดท้ายที่บริสุทธิ์มากกว่าคาร์โบไฮเดรตจากความสัมพันธ์เมทริกซ์ เนื่องจากคาร์โบไฮเดรตเป็นลิแกนด์กับเลคตินทั้งหมด มีความเป็นไปได้ว่า เหล็ก อื่น ๆนอกจากนี้ยังอาจเพิ่ม และข้ามปนเปื้อน affinity บริสุทธิ์การเตรียม con . ที่จะเอาชนะข้อจำกัดเหล่านี้