Melanin content was determined by t

Melanin content was determined by the method of Whittaker [12]. Cells were harvested with 0.5% trypsin and suspended in PBS for cell counting. The cell pellet was extracted with 5% trichloroacetic acid three times, with ether-alcohol
(1:3) twice and with absolute ether once. The air-dried residue was dissolved in 3 ml of 0.85 M KOH and was heated for 10 min at 100°C. Optical density of the solution at 400 nm was measured. Tyrosinase activity was assayed by the
modified method of Steinberg and Whittaker [13]. The cell pellet was disrupted in 0.5% sodium deoxycholate (DOC) for 30 min at 4°C. The reaction mixture containing the cell lysate and 0.04% L-3,4-dihydroxyphenyl-alanine (L-DOPA)
(Wako Pure Chemical Industries, Japan) in 0.1 M sodium phosphate buffer, pH 6.8 [14], was incubated for 10 min at 37°C. The change in optical density at 475 nm during the first few minutes was measured while it was in the linear phase. Correction for DOPA autoxidation was performed and specific activity was expressed as AOD at 475 nm/min per mg protein. Protein content was estimated by the method of Lowry et al. [15] with the standard protein solution of bovine serum albumin (BSA).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

เมลานินเนื้อหาที่ถูกกำหนด โดยวิธีการของ Whittaker [12] เซลล์เก็บเกี่ยวกับทริปซิน 0.5% และระงับการตรวจนับเซลล์ใน PBS เม็ดเซลล์ถูกสกัด ด้วยกรด 5% trichloroacetic สามครั้ง กับแอลกอฮอล์อีเทอร์(1:3) สองครั้ง และแน่นอนอีเทอร์ครั้ง สารตกค้าง air-dried ถูกละลายใน ml 3 0.85 เมตรเกาะ และถูกความร้อนใน 10 นาทีที่ 100 องศาเซลเซียส ความหนาแน่นออปติคัลของโซลูชันที่ 400 nm ที่วัด กิจกรรม tyrosinase ได้ assayed โดยวิธีแก้ไขของ Steinberg และ Whittaker [13] เม็ดเซลล์ถูกระหว่างสองวันใน 0.5% โซเดียม deoxycholate (DOC) สำหรับ 30 นาทีที่ 4 องศาเซลเซียส ส่วนผสมของปฏิกิริยาที่ประกอบด้วยเซลล์ lysate และ 0.04% L-3, 4-dihydroxyphenyl-อะลานีน (L-DOPA)(Wako อุตสาหกรรมเคมีบริสุทธิ์ ญี่ปุ่น) ใน 0.1 M โซเดียมฟอสเฟตบัฟเฟอร์ pH 6.8 [14], ที่ incubated ใน 10 นาทีที่ 37 องศาเซลเซียส การเปลี่ยนแปลงความหนาแน่นออปติคัลที่ 475 nm ในช่วงสองสามนาทีแรกที่วัดขณะที่ในเฟสเชิงเส้น ทำการแก้ไขสำหรับ DOPA autoxidation และกิจกรรมที่แสดงเป็น AOD ที่ 475 nm/min ต่อมิลลิกรัมโปรตีน โปรตีนถูกประเมิน โดยวิธีการของ Lowry et al. [15] ด้วยโซลูชั่นของโปรตีนมาตรฐานของวัว serum albumin (บีเอสเอ)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

เนื้อหาเมลานินถูกกำหนดโดยวิธีการของ Whittaker [12] เซลล์ที่ถูกเก็บเกี่ยวกับ trypsin 0.5% และลอยอยู่ในพีบีเอสสำหรับการนับเซลล์ ตะกอนเซลล์ถูกสกัดด้วยกรดไตรคลอโร 5% สามครั้งด้วยแอลกอฮอล์อีเทอร์
(1: 3) ครั้งที่สองและครั้งเดียวอีเทอร์แน่นอน สารตกค้างอากาศแห้งก็เลือนหายไปใน 3 มิลลิลิตร 0.85 M KOH และถูกความร้อนเป็นเวลา 10 นาทีที่ 100 องศาเซลเซียส ความหนาแน่นของออปติคอลของการแก้ปัญหาที่ 400 นาโนเมตรวัด กิจกรรม Tyrosinase ได้รับการวิเคราะห์โดย
วิธีการแก้ไขของ Steinberg และ Whittaker [13] ตะกอนเซลล์ถูกรบกวนโซเดียม 0.5% Deoxycholate (DOC) เป็นเวลา 30 นาทีที่อุณหภูมิ 4 องศาเซลเซียส ผสมปฏิกิริยาที่มี lysate เซลล์และ 0.04% L-3,4-dihydroxyphenyl-อะลานีน (L-DOPA)
(Wako อุตสาหกรรมเคมีบริสุทธิ์ญี่ปุ่น) ใน 0.1 M โซเดียมฟอสเฟตบัฟเฟอร์ค่า pH 6.8 [14] ถูกบ่มเป็นเวลา 10 นาที ที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียส การเปลี่ยนแปลงในความหนาแน่นของแสงที่ 475 นาโนเมตรในช่วงไม่กี่นาทีแรกวัดในขณะที่มันอยู่ในขั้นตอนการเชิงเส้น การแก้ไขสำหรับปฏิกิริยาออกซิเดชัน DOPA ได้ดำเนินการและกิจกรรมที่เฉพาะเจาะจงได้รับการแสดงเป็น AOD ที่ 475 นาโนเมตร / นาทีต่อมิลลิกรัมโปรตีน ปริมาณโปรตีนได้รับการประเมินโดยวิธีการของ Lowry et al, [15] ด้วยโซลูชั่นโปรตีนอัลบูมิมาตรฐานของซีรั่มวัว (BSA)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ปริมาณเมลานินถูกกำหนดโดยวิธีการที่ถูก [ 12 ] เซลล์มีเก็บเกี่ยวกับทริป 0.5% และแขวนลอยใน PBS สำหรับการนับเซลล์ เซลล์เม็ดสกัด 5% กรดไตรคลอโรอะซิติกสามครั้งด้วยอีเทอร์ แอลกอฮอล์
( 1 : 3 ) สองครั้ง และแน่นอนกับอีเธอร์ครั้ง อากาศแห้งละลายกาก 3 มล. ของ 1.00 เมตรเกาะและก็ร้อนสำหรับ 10 นาทีที่ 100 องศาความหนาแน่นของแสงของสารละลายที่ 400 nm เป็นวัด กิจกรรม ไทโรซิเนสซีรั่มโดยวิธีของ Steinberg ที่ถูกดัดแปลงและ
[ 13 ] เซลล์เม็ดมีการหยุดชะงักในสารละลายดี กซีโชเลต ( DOC ) สำหรับ 30 นาทีที่ 4 ° C . ปฏิกิริยาผสมที่ประกอบด้วยเซลล์ lysate และ 0.04 % l-3,4-dihydroxyphenyl-alanine ( แอล - โดปา )
( Wako เพียว เคมีอุตสาหกรรม ญี่ปุ่น ) ใน 0.1 โมลาร์โซเดียมฟอสเฟตบัฟเฟอร์พีเอช 6.8 [ 14 ] ถูกบ่มเป็นเวลา 10 นาทีที่ 37 องศา การเปลี่ยนแปลงความหนาแน่นของแสงที่ 475 นาโนเมตรในช่วงไม่กี่นาทีแรกถูกวัดในขณะที่มันอยู่ในเฟสเชิงเส้น ด้วยการแก้ไขสำหรับอุตสาหกรรมและกิจกรรมที่เฉพาะเจาะจงจะแสดงเป็น AOD ที่ 475 nm / นาทีต่อมิลลิกรัมโปรตีน . ปริมาณโปรตีนประมาณโดยวิธีของโลว์รีย์ et al .[ 15 ] กับมาตรฐานสารละลายโปรตีนอัลบูมิน ( BSA )