Aerobic Stability Triplicate silos

Aerobic Stability Triplicate silos from each treatment opened on the final day of ensiling were subsampled and the samples combined to obtain 400 g of silage (3 replicates per treatment). These samples were placed into separate 4-L insulated containers, covered with 2 layers of cheesecloth, and stored at 20°C for 21 d. Two Dallas Thermochron iButtons (Embedded Data Systems, Lawrenceburg, KY) were embedded in the lower and middle layers of the silage mass in each container and in the silo storage room to record temperature every 15 min. Ambient temperature and the temperature in each container were monitored simultaneously for 21 d. The contents of each container were thoroughly mixed and sampled after 3, 7, 14, and 21 d of aerobic exposure (AE) for chemical, microbial, and molecular analyses. Aerobic stability, defined by Teller et al. (2012) as the number of hours the temperature of silage exposed to air exceeded baseline room temperature by 2°C, was determined.
Chemical Analysis Both the unfermented forage and the silage samples collected on d 90 from each mini silo were analyzed for water-soluble carbohydrates (WSC), ammonia nitrogen (NH3–N), and starch, as described by Zahiroddini et al. (2004). Volatile fatty acids and lactate were determined by the methods of Kudo et al. (1987) using a Hewlett-Packard model 5890A Series Plus II gas liquid chromatograph (column: 30-m nitrotereftalic ester of polyethylene glycol fused silica capillary, 0.32 mm i.d., and 1.0 m film thickness; Phenomenex, Torrance, CA). Total N was determined by elemental analysis (Dumas Nitrogen) using a NA1500 Nitrogen/Carbon analyzer (Carlo Erba Instruments, Milan, Italy). Crude protein was calculated as N × 6.25. The forage and silage samples were analyzed for DM by drying at 105°C in forceddraft oven for 24 h, for OM by ashing 1 g of dried sample in a muffle furnace at 550°C for 5 h, and for NDF and ADF using an Ankom 200 system (Ankom Technology Corporation, Fairport, NY) with the addition of sodium sulfite and α-amylase for NDF but
Saccharomyces as a corn silage inoculant ◊
without α-amylase for ADF. Nitrogen in ADF residues (ADF insoluble nitrogen and ADIN) was measured by combustion as described above. For pH measurement, fresh forage or silage (15 g) from each mini silo at each sampling date was mixed with 135 mL of deionized water, blended for 30 s, and filtered through 2 layers of cheesecloth. The pH of the filtrate was measured with a Symphony pH meter (VWR International, Mississauga, ON).
Microbial Analysis For microbial analyses, forage or silage (10 g) was added to 90 mL of sterile 70 mM potassium phosphate buffer (pH 7.0) and agitated for 60 s at 260 rpm in a Stomacher 400 Circulator (Seward Stomacher, London, UK). The suspension was serially diluted and spread in triplicate onto semiselective lactobacilli media amended with 200 mg/mL of cycloheximide (de Man, Rogosa, and Sharpe [MRS]; Dalynn Biologicals, Calgary, Canada) for enumeration of Lactic Acid bacteria (LAB), onto nutrient agar amended with 200 mg/ mL of cycloheximide (Dalynn Biologicals) for the enumeration of total bacteria, and onto Sabouraud’s dextrose agar (SDA; Dalynn Biologicals) with 100 mg/mL of tetracycline and chloramphenicol for the enumeration of yeasts and other fungi. Lactobacilli MRS agar and NA plates were incubated aerobically at 37°C for 48 h, and SDA plates were incubated at ambient temperature for 72 h. Colonies were counted from plates containing a minimum of 30 and a maximum of 300 colonies. Numbers of yeasts and filamentous fungi (i.e., molds) were differentiated based on colony appearance and morphology.
In Situ Determination of Ruminal Degradability Samples of the 90-d silage (500 g) collected from silos of each treatment were pooled and frozen (–40°C). Frozen silage samples were freeze-dried, ground through a 4-mm screen, and weighed (5 g per bag) into monofilament polyester bags (8 to 10 cm and 51-μm pore size; Sefar America Inc., Depew, NY). Triplicate polyester bags for each sampling time point were incubated in the rumen of 3 ruminally fistulated cows for 2, 6, 12, 24, 48, 72, or 96 h (3 replicate bags per animal). Bags from each time point were placed into a large mesh retaining sack (20 to 30 cm and 3 to 5 mm pore size) to ease retrieval. These cows were fed a total mixed ration consisting of 85% barley silage, 12% dry-rolled barley, and 3% of a standard beef feedlot vitamin premix and mineral supplement (DM basis). Upon removal from the rumen, bags were washed as described by Zahiroddini et al. (2004). Bags that had not been incubated in the
rumen also were included in the washing procedure to estimate loss of soluble material from bags. This experiment was approved by the Animal Care Committee of Lethbridge Research Centre with the animals used in this study cared for and managed according to the guidelines of the Canadian Council on Animal Care (2009).
In Vitro Measures of Ruminal Fermentation of Corn Silage Ruminal contents were collected 1 h before the morning feeding from 3 Jersey heifers fed the diet listed above. Anaerobic conditions were maintained during transport and processing of ruminal contents in the barn and in the laboratory. Ruminal fluid (2 L) and solids (500 g) were homogenized by three 15-s pulses in a blender continuously flushed with O2–free CO2. The homogenate was strained through 4 layers of cheesecloth, and the filtrate was mixed with prewarmed buffer at 39°C (McDougall, 1948) at 1:2 (vol/ vol). Microbial protein production was estimated on the basis of incorporation of 15N from 15N-enriched ammonium sulfate (98 atom % 15N; Sigma Chemical Co, St Louis, MO) included in the inoculum at 0.5 g/L. For measurement of gas production, each of the 4 silages (500 mg) ground through a 1-mm screen was weighed into 135-mL serum vials. All vials were warmed to 39°C and flushed with O2–free CO2 before addition of 40 mL of inocula. Vials were immediately sealed and placed on a rotary shaker platform (140 rpm) in an incubator at 39°C. Vials containing silage and blanks (containing only inoculum) were prepared in triplicate for each time point. The vials for the 0-h incubation were placed on ice immediately following addition of inoculum. The volume of gas produced from each vial was measured at 3, 6, 9, 12, 24, and 48 h, using a water displacement apparatus. Two runs with 3 replicate vials in each run were performed. Triplicate vials at 9 and 48 h of the incubation were retrieved and the whole culture in each vial was processed for 15N analysis to estimate microbial protein synthesis as described by Wang et al. (2000).
Molecular Analysis Deoxyribonucleic Acid Extraction. From each sampling time, 30-g silage samples from each mini silo were frozen (–80°C), lyophilized, and ground through a 4-mm screen. Subsamples (5 g) were then ball milled and DNA was extracted according to Yu and Morrison (2004) with a slight modification to facilitate DNA extraction from fungi. Briefly, DNA was extracted from 0.3 g of the ball-milled corn silage using a bead-beating step (3 min at maximum speed); nucleic acids were precipitated with ammonium acetate and isopropanol

Aerobic Stability Triplicate silos from each treatment opened on the final day of ensiling were subsampled and the samples combined to obtain 400 g of silage (3 replicates per treatment). These samples were placed into separate 4-L insulated containers, covered with 2 layers of cheesecloth, and stored at 20°C for 21 d. Two Dallas Thermochron iButtons (Embedded Data Systems, Lawrenceburg, KY) were embedded in the lower and middle layers of the silage mass in each container and in the silo storage room to record temperature every 15 min. Ambient temperature and the temperature in each container were monitored simultaneously for 21 d. The contents of each container were thoroughly mixed and sampled after 3, 7, 14, and 21 d of aerobic exposure (AE) for chemical, microbial, and molecular analyses. Aerobic stability, defined by Teller et al. (2012) as the number of hours the temperature of silage exposed to air exceeded baseline room temperature by 2°C, was determined.
Chemical Analysis Both the unfermented forage and the silage samples collected on d 90 from each mini silo were analyzed for water-soluble carbohydrates (WSC), ammonia nitrogen (NH3–N), and starch, as described by Zahiroddini et al. (2004). Volatile fatty acids and lactate were determined by the methods of Kudo et al. (1987) using a Hewlett-Packard model 5890A Series Plus II gas liquid chromatograph (column: 30-m nitrotereftalic ester of polyethylene glycol fused silica capillary, 0.32 mm i.d., and 1.0 m film thickness; Phenomenex, Torrance, CA). Total N was determined by elemental analysis (Dumas Nitrogen) using a NA1500 Nitrogen/Carbon analyzer (Carlo Erba Instruments, Milan, Italy). Crude protein was calculated as N × 6.25. The forage and silage samples were analyzed for DM by drying at 105°C in forceddraft oven for 24 h, for OM by ashing 1 g of dried sample in a muffle furnace at 550°C for 5 h, and for NDF and ADF using an Ankom 200 system (Ankom Technology Corporation, Fairport, NY) with the addition of sodium sulfite and α-amylase for NDF but 
Saccharomyces as a corn silage inoculant ◊
without α-amylase for ADF. Nitrogen in ADF residues (ADF insoluble nitrogen and ADIN) was measured by combustion as described above. For pH measurement, fresh forage or silage (15 g) from each mini silo at each sampling date was mixed with 135 mL of deionized water, blended for 30 s, and filtered through 2 layers of cheesecloth. The pH of the filtrate was measured with a Symphony pH meter (VWR International, Mississauga, ON).
Microbial Analysis For microbial analyses, forage or silage (10 g) was added to 90 mL of sterile 70 mM potassium phosphate buffer (pH 7.0) and agitated for 60 s at 260 rpm in a Stomacher 400 Circulator (Seward Stomacher, London, UK). The suspension was serially diluted and spread in triplicate onto semiselective lactobacilli media amended with 200 mg/mL of cycloheximide (de Man, Rogosa, and Sharpe [MRS]; Dalynn Biologicals, Calgary, Canada) for enumeration of Lactic Acid bacteria (LAB), onto nutrient agar amended with 200 mg/ mL of cycloheximide (Dalynn Biologicals) for the enumeration of total bacteria, and onto Sabouraud’s dextrose agar (SDA; Dalynn Biologicals) with 100 mg/mL of tetracycline and chloramphenicol for the enumeration of yeasts and other fungi. Lactobacilli MRS agar and NA plates were incubated aerobically at 37°C for 48 h, and SDA plates were incubated at ambient temperature for 72 h. Colonies were counted from plates containing a minimum of 30 and a maximum of 300 colonies. Numbers of yeasts and filamentous fungi (i.e., molds) were differentiated based on colony appearance and morphology.
In Situ Determination of Ruminal Degradability Samples of the 90-d silage (500 g) collected from silos of each treatment were pooled and frozen (–40°C). Frozen silage samples were freeze-dried, ground through a 4-mm screen, and weighed (5 g per bag) into monofilament polyester bags (8 to 10 cm and 51-μm pore size; Sefar America Inc., Depew, NY). Triplicate polyester bags for each sampling time point were incubated in the rumen of 3 ruminally fistulated cows for 2, 6, 12, 24, 48, 72, or 96 h (3 replicate bags per animal). Bags from each time point were placed into a large mesh retaining sack (20 to 30 cm and 3 to 5 mm pore size) to ease retrieval. These cows were fed a total mixed ration consisting of 85% barley silage, 12% dry-rolled barley, and 3% of a standard beef feedlot vitamin premix and mineral supplement (DM basis). Upon removal from the rumen, bags were washed as described by Zahiroddini et al. (2004). Bags that had not been incubated in the 
rumen also were included in the washing procedure to estimate loss of soluble material from bags. This experiment was approved by the Animal Care Committee of Lethbridge Research Centre with the animals used in this study cared for and managed according to the guidelines of the Canadian Council on Animal Care (2009).
In Vitro Measures of Ruminal Fermentation of Corn Silage Ruminal contents were collected 1 h before the morning feeding from 3 Jersey heifers fed the diet listed above. Anaerobic conditions were maintained during transport and processing of ruminal contents in the barn and in the laboratory. Ruminal fluid (2 L) and solids (500 g) were homogenized by three 15-s pulses in a blender continuously flushed with O2–free CO2. The homogenate was strained through 4 layers of cheesecloth, and the filtrate was mixed with prewarmed buffer at 39°C (McDougall, 1948) at 1:2 (vol/ vol). Microbial protein production was estimated on the basis of incorporation of 15N from 15N-enriched ammonium sulfate (98 atom % 15N; Sigma Chemical Co, St Louis, MO) included in the inoculum at 0.5 g/L. For measurement of gas production, each of the 4 silages (500 mg) ground through a 1-mm screen was weighed into 135-mL serum vials. All vials were warmed to 39°C and flushed with O2–free CO2 before addition of 40 mL of inocula. Vials were immediately sealed and placed on a rotary shaker platform (140 rpm) in an incubator at 39°C. Vials containing silage and blanks (containing only inoculum) were prepared in triplicate for each time point. The vials for the 0-h incubation were placed on ice immediately following addition of inoculum. The volume of gas produced from each vial was measured at 3, 6, 9, 12, 24, and 48 h, using a water displacement apparatus. Two runs with 3 replicate vials in each run were performed. Triplicate vials at 9 and 48 h of the incubation were retrieved and the whole culture in each vial was processed for 15N analysis to estimate microbial protein synthesis as described by Wang et al. (2000).
Molecular Analysis Deoxyribonucleic Acid Extraction. From each sampling time, 30-g silage samples from each mini silo were frozen (–80°C), lyophilized, and ground through a 4-mm screen. Subsamples (5 g) were then ball milled and DNA was extracted according to Yu and Morrison (2004) with a slight modification to facilitate DNA extraction from fungi. Briefly, DNA was extracted from 0.3 g of the ball-milled corn silage using a bead-beating step (3 min at maximum speed); nucleic acids were precipitated with ammonium acetate and isopropanol

0/5000

จาก: -

เป็น: -

ผลลัพธ์ (ไทย) 1: [สำเนา]

คัดลอก!

ยุ้งฉาง Triplicate เสถียรภาพแอโรบิกจากแต่ละทรีทเม้นต์ที่เปิดในวันสุดท้ายของ ensiling ได้ subsampled และรวมตัวอย่างเพื่อให้ได้ 400 กรัมของไซเลจต่อ (3 เหมือนกับต่อรักษา) ตัวอย่างเหล่านี้มีอยู่ในภาชนะบรรจุฉนวนแยก 4 L ปกคลุม ด้วยชั้น 2 ของ cheesecloth และเก็บไว้ที่ 20° C สำหรับ 21 d IButtons Thermochron ดัลลัสสอง (ระบบข้อมูลฝังตัว Lawrenceburg, KY) ถูกฝังอยู่ในชั้นกลาง และล่างของไซเลจต่อมวล ในแต่ละตู้คอนเทนเนอร์ และตู้เก็บไซโลบันทึกอุณหภูมิทุก 15 นาทีอุณหภูมิและอุณหภูมิในภาชนะแต่ละถูกตรวจสอบพร้อมกันสำหรับ 21 d เนื้อหาของแต่ละภาชนะถูกผสมอย่างละเอียด และตัวอย่างหลังที่ 3, 7, 14 และ d 21 ของแอโรบิกแสง (AE) การวิเคราะห์ทางเคมี จุลินทรีย์ และโมเลกุล มีกำหนดเสถียรภาพแอโรบิก กำหนดโดยเบิก et al. (2012) เป็นจำนวนของชั่วโมงที่อุณหภูมิของไซเลจต่อสัมผัสอากาศเกินพื้นฐานห้องอุณหภูมิ 2° Cเคมีวิเคราะห์ทั้ง unfermented อาหารสัตว์และตัวอย่างไซเลจต่อที่รวบรวมเกี่ยวกับ d 90 จากไซโลแต่ละมินิได้วิเคราะห์คาร์โบไฮเดรตที่ละลายใน (WSC), ไนโตรเจนแอมโมเนีย (NH3 – N), และ แป้ง ตามที่อธิบายไว้โดย Zahiroddini et al. (2004) กรดไขมันระเหยและ lactate ถูกกำหนด โดยวิธีการของ Kudo et al. (1987) ใช้ Hewlett-Packard รุ่น 5890A II พร้อมชุดแก๊สเหลว chromatograph (คอลัมน์: เอสเอ็ม 30 nitrotereftalic แรงก้า fused polyethylene glycol ประชาชน 0.32 มม. และความหนา ของฟิล์ม 1.0 m Phenomenex รันซ์ CA) N ทั้งหมดที่ถูกกำหนด โดยธาตุวิเคราะห์ (ดูมาสไนโตรเจน) ใช้วิเคราะห์ไนโตรเจน/คาร์บอนของ NA1500 (เครื่องมือ Carlo Erba มิลาน อิตาลี) มีคำนวณโปรตีนหยาบเป็น N × 6.25 มีวิเคราะห์ตัวอย่างอาหารสัตว์และไซเลจต่อสำหรับ DM โดยการอบแห้งที่ 105° C ในเตาอบ forceddraft สำหรับ 24 ชม การออมโดย ashing g 1 ของตัวอย่างแห้งในเตาเป็นเตาที่ 550° C 5 h และ NDF และ ADF ที่เป็นระบบ Ankom 200 (บริษัทเทคโนโลยี Ankom, Fairport, NY) ด้วยการเพิ่มโซเดียมซัลไฟต์และα-amylase สำหรับ NDF แต่ Saccharomyces เป็นเป็นข้าวโพดไซเลจต่อ inoculant ◊โดยα-amylase ใน ADF ไนโตรเจนในตก ADF (ADF ไนโตรเจนละลายและ ADIN) ถูกวัด โดยการเผาไหม้ที่อธิบายข้างต้น สำหรับวัดค่า pH อาหารสัตว์สด หรือไซเลจต่อ (15 g) จากไซโลมินิแต่ละที่แต่ละวันสุ่มตัวอย่างถูกผสมกับ 135 mL น้ำ deionized ผสมสำหรับ 30 s และกรองผ่านชั้นที่ 2 ของ cheesecloth PH ของสารกรองถูกวัด ด้วยเครื่องวัดค่า pH การซิมโฟนี (VWR International, Mississauga, ON)จุลินทรีย์วิเคราะห์การวิเคราะห์จุลินทรีย์ อาหารสัตว์ หรือไซเลจต่อ (10 g) ถูกเพิ่ม 90 mL 70 มม.ใส่โพแทสเซียมฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (pH 7.0) และนั้นกระตุ้นทำ 60 s ที่ 260 รอบต่อนาทีในการหมุนเวียน 400 แผงประดับหน้าอก (เวิร์ดแผงประดับหน้าอก ลอนดอน สหราชอาณาจักร) การระงับ serially ผสม และแพร่กระจายใน triplicate บน semiselective lactobacilli สื่อแก้ไขกับ 200 mg/mL ของ cycloheximide (เดอแมน Rogosa และ Sharpe [นาง]; Dalynn Biologicals คัลการี แคนาดา) สำหรับการแจงนับ ของแบคทีเรียกรดแลกติก (LAB), ไปแก้ไขกับ 200 mg/mL ของ cycloheximide (Dalynn Biologicals) สำหรับการแจงนับของแบคทีเรียรวม agar ธาตุอาหาร และ บนของ Sabouraud agar ขึ้น (SDA Dalynn Biologicals) กับ 100 mg/mL เตตราไซคลีนและ chloramphenicol สำหรับการแจงนับของ yeasts และเชื้อราอื่น ๆ Lactobacilli MRS agar และแผ่นนามี incubated aerobically ที่ 37° C สำหรับ 48 h และแผ่น SDA ได้ incubated ที่อุณหภูมิสำหรับอาณานิคม 72 h. นับได้จากแผ่นที่ประกอบด้วยอย่างน้อย 30 และสูงสุดของอาณานิคม 300 จำนวน yeasts และ filamentous เชื้อรา (เช่น แม่พิมพ์) แตกต่างกันตามลักษณะโคโลนีและสัณฐานวิทยาในซิกำหนดของ Ruminal Degradability ตัวอย่าง 90 d ไซเลจต่อ (500 g) รวบรวมจากยุ้งฉางของแต่ละทรีทเม้นต์ทางถูกพู และแช่แข็ง (–40 ° C) ตัวอย่างไซเลจต่อแช่แข็งถูกพื้นดินผ่านหน้าจอขนาด 4 มม. กรอบ และน้ำหนัก (5 กรัมต่อถุง) ในถุงโพลีเอสเตอร์สายรัด (8-10 ซม.และขนาด 51 μm รูขุมขน Sefar อเมริกา Inc., Depew, NY) Triplicate ถุงโพลีเอสเตอร์แต่ละครั้งสุ่มตัวอย่างจุดที่ incubated ในการต่อของวัว ruminally fistulated 3 สำหรับ 2, 6, 12, 24, 48, 72, 96 h (3 replicate ถุงต่อสัตว์) กระเป๋าจากแต่ละจุดเวลาถูกวางลงในตาข่ายขนาดใหญ่ที่รักษากระสอบ (20-30 ซม. และ 3-5 มม.รูขุมขนขนาด) เพื่อความสะดวกเรียก วัวเหล่านี้ได้รับอาหารผสมทั้งหมดประกอบด้วยไซเลจต่อข้าวบาร์เลย์ 85%, 12% รีดแห้งข้าวบาร์เลย์ และ 3% เป็นเนื้อมาตรฐาน feedlot วิตามิน premix และแร่ธาตุเสริม (DM พื้นฐาน) เมื่อเอาออกจากการต่อ กระเป๋าถูกล้างตามที่อธิบายไว้โดย Zahiroddini et al. (2004) กระเป๋าที่ไม่ได้รับ incubated ในการ ต่อยังรวมอยู่ในขั้นตอนการซักผ้าการประเมินการสูญเสียวัสดุละลายจากถุง การทดลองนี้ได้รับการอนุมัติ โดยสัตว์ดูแลกรรมการของเลศูนย์วิจัยกับสัตว์ที่ใช้ในการศึกษานี้ดูแลเอาใจใส่ และการบริหารจัดการตามแนวทางของสภาแคนาดาในสัตว์ดูแล (2009)ในเครื่องวัดของ Ruminal หมักของข้าวโพดไซเลจต่อ Ruminal เนื้อหาถูกเก็บ 1 h ก่อนเช้าอาหารจาก 3 ชุด heifers เลี้ยงอาหารข้าง เงื่อนไขไม่ใช้ถูกเก็บรักษาในระหว่างการขนส่งและประมวลผลของ ruminal เนื้อหา ในยุ้งข้าว และ ในห้องปฏิบัติการ Ruminal น้ำมัน (2 ลิตร) และของแข็ง (500 g) ถูก homogenized เป็นกลุ่ม โดยสาม 15 s กะพริบในเบลนเดอร์ที่ล้างอย่างต่อเนื่องกับ CO2 O2 – ฟรี Homogenate ถูกย้ำผ่านชั้นที่ 4 ของ cheesecloth และสารกรองถูกผสมกับบัฟเฟอร์ prewarmed ที่ 39° C (McDougall, 1948) 1:2 (vol / vol) ถูกประเมินการผลิตจุลินทรีย์โปรตีนตามประสาน 15N จากอุดมไป 15N แอมโมเนียซัลเฟต (98 อะตอม% 15N บริษัทเคมีซิก St Louis, MO) รวม inoculum ที่ 0.5 g/l สำหรับวัดแก๊ส ล่าง silages 4 (500 มิลลิกรัม) ผ่านทางหน้าจอ 1 มม.แต่ละถูกหนักเข้า vials 135 mL เซรั่ม ทั้งหมด vials ถูก warmed 39° c และล้าง ด้วย CO2 O2 – ฟรีก่อนเพิ่ม 40 mL ของ inocula Vials ทันทีถูกปิดสนิท และวางไว้บนแพลตฟอร์มโรตารี่เชคเกอร์ (140 รอบต่อนาที) ในการบ่มเพาะวิสาหกิจที่ 39 องศาเซลเซียส มีเตรียม vials ประกอบด้วยไซเลจต่อและช่องว่าง (ประกอบด้วยเฉพาะ inoculum) ใน triplicate แต่ละจุดเวลา Vials สำหรับบ่ม 0 h ถูกวางไว้บนน้ำแข็งต่อแห่ง inoculum ปริมาตรของก๊าซที่ผลิตจากแต่ละคอนแทคถูกวัดที่ 3, 6, 9, 12, 24 และ h 48 การใช้อุปกรณ์แทนที่น้ำ รันสองกับ 3 vials replicate ในการรันแต่ละดำเนินการ Triplicate vials ที่ h 9 และ 48 ของคณะทันตแพทยศาสตร์ที่ถูกเรียกใช้ และประมวลผลทั้งวัฒนธรรมในแต่ละคอนแทค 15N วิเคราะห์ประเมินสังเคราะห์จุลินทรีย์โปรตีนตามที่อธิบายไว้โดย Wang et al. (2000)วิเคราะห์ระดับโมเลกุลกรด Deoxyribonucleic สกัด จากแต่ละครั้งที่สุ่มตัวอย่าง ตัวอย่าง 30 g ไซเลจต่อจากไซโลแต่ละมินิถูกแช่แข็ง (–80 ° C), lyophilized และพื้นดินผ่านหน้าจอขนาด 4 mm Subsamples (5 กรัม) ถูก แล้วลูกปลาย และดีเอ็นเอที่สกัดตามยูและมอร์ริสัน (2004) มีการปรับเปลี่ยนเล็กน้อยเพื่อช่วยในการสกัดดีเอ็นเอจากเชื้อรา สั้น ๆ ดีเอ็นเอที่สกัดจาก 0.3 g ของไซเลจต่อข้าวโพดปลายลูกบอลใช้ลูกปัดทั้งขั้นตอน (3 นาทีที่ความเร็วสูงสุด); กรดนิวคลีอิกถูกตกตะกอน ด้วยแอมโมเนีย acetate และ isopropanol

การแปล กรุณารอสักครู่..

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:[สำเนา]

คัดลอก!

เสถียรภาพแอโรบิกไซโล Triplicate จากการรักษาแต่ละเปิดในวันสุดท้ายของการหมักถูก subsampled และตัวอย่างมารวมกันเพื่อให้ได้ 400 กรัมหมัก (3 ซ้ำต่อการรักษา) ตัวอย่างเหล่านี้ถูกวางไว้ในภาชนะฉนวน 4-L แยกปกคลุมไปด้วย 2 ชั้นผ้าและเก็บไว้ที่อุณหภูมิ 20 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 21 วัน สองดัลลัส Thermochron iButtons (ระบบข้อมูลฝังตัวลอว์, เคนตั๊กกี้) ถูกฝังอยู่ในชั้นล่างและกลางของมวลหมักในแต่ละภาชนะบรรจุและในห้องเก็บไซโลในการบันทึกอุณหภูมิทุก 15 นาที อุณหภูมิแวดล้อมและอุณหภูมิในแต่ละภาชนะที่ถูกตรวจสอบพร้อมกันเป็นเวลา 21 วัน เนื้อหาของแต่ละภาชนะที่ถูกผสมอย่างละเอียดและตัวอย่างหลังจากที่ 3, 7, 14, และ 21 วันของการเปิดรับแอโรบิก (AE) สำหรับสารเคมี, จุลินทรีย์และการวิเคราะห์โมเลกุล เสถียรภาพแอโรบิกที่กำหนดโดยหมอดู et al, (2012) เป็นจำนวนชั่วโมงอุณหภูมิของหมักสัมผัสกับอากาศที่อุณหภูมิห้องเกินพื้นฐาน 2 องศาเซลเซียสถูกกำหนด.
การวิเคราะห์ทางเคมีทั้งอาหารสัตว์และตัวอย่าง unfermented หมักเก็บ d 90 จากแต่ละไซโลขนาดเล็กสำหรับการวิเคราะห์น้ำ คาร์โบไฮเดรตที่ละลายน้ำได้ (WSC) ไนโตรเจนแอมโมเนีย (NH3-N) และแป้งตามที่อธิบาย Zahiroddini et al, (2004) กรดไขมันระเหยและให้น้ำนมที่ถูกกำหนดโดยวิธีการของ Kudo et al, (1987) โดยใช้ Hewlett-Packard รุ่น 5890A ซีรีส์พลัสครั้งที่สอง chromatograph ก๊าซเหลว (คอลัมน์: เอสเตอร์ nitrotereftalic 30 เมตรจากพลาสติกคอลฝอยผสมซิลิกา, 0.32 มมรหัสและ 1.0 เมตรความหนาของฟิล์ม; Phenomenex, ทอร์รันซ์) ไม่มีข้อความทั้งหมดถูกกำหนดโดยการวิเคราะห์ธาตุ (มัสไนโตรเจน) โดยใช้ NA1500 ไนโตรเจน / วิเคราะห์คาร์บอน (Carlo Erba เครื่องดนตรี, มิลาน, อิตาลี) โปรตีนที่คำนวณได้เป็นไม่มี× 6.25 อาหารสัตว์และตัวอย่างหมักวิเคราะห์สำหรับ DM โดยการอบแห้งที่ 105 ° C ในเตาอบ forceddraft เวลา 24 ชั่วโมงสำหรับ OM โดย Ashing 1 กรัมของตัวอย่างแห้งในเตาเผาที่ 550 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 5 ชั่วโมงและ NDF และ ADF ใช้ Ankom 200 ระบบ (Ankom เทคโนโลยีคอร์ปอเรชั่น Fairport นิวยอร์ก) ด้วยนอกเหนือจากซัลไฟต์โซเดียมและαอะไมเลสสำหรับ NDF แต่
Saccharomyces เป็นข้าวโพดหมักหัวเชื้อ◊
โดยไม่ต้องαอะไมเลสสำหรับ ADF ไนโตรเจนในสารตกค้าง ADF (ADF ไนโตรเจนที่ไม่ละลายน้ำและ ADIN) โดยวัดจากการเผาไหม้ตามที่อธิบายไว้ข้างต้น สำหรับการวัดค่า pH, หญ้าสดหรือหญ้าหมัก (15 กรัม) จากแต่ละไซโลขนาดเล็ก ณ วันที่สุ่มตัวอย่างในแต่ละผสมกับ 135 มิลลิลิตรน้ำปราศจากไอออนผสมสำหรับ 30 วินาทีและกรองผ่าน 2 ชั้นของผ้า พีเอชของกรองวัดด้วยเครื่องวัดค่า pH ซิมโฟนี (VWR นานาชาติ Mississauga, ON).
การวิเคราะห์จุลินทรีย์สำหรับการวิเคราะห์จุลินทรีย์อาหารสัตว์หรือหมัก (10 กรัม) ถูกบันทึกอยู่ใน 90 มิลลิลิตรของโพแทสเซียมหมัน 70 มิลลิฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (pH 7.0) และตื่นเต้นเป็นเวลา 60 วินาทีที่ 260 รอบต่อนาทีใน Stomacher 400 ปั่น (เอิร์ด Stomacher ลอนดอนสหราชอาณาจักร) ระงับถูกเจือจางลำดับและการแพร่กระจายในเพิ่มขึ้นสามเท่าลงบนสื่อแลคโต semiselective แก้ไขเพิ่มเติมกับ 200 มิลลิกรัม / มิลลิลิตร cycloheximide (เดผู้ชาย, Rogosa และชาร์ป [MRS]; Dalynn Biologicals, Calgary, Canada) สำหรับการแจงนับของแบคทีเรียกรดแลคติก (LAB) ลงบนอาหารเลี้ยงเชื้อสารอาหารที่มีการแก้ไขเพิ่มเติมกับ 200 มิลลิกรัม / มิลลิลิตร cycloheximide (Dalynn Biologicals) สำหรับการแจงนับของแบคทีเรียทั้งหมดและลงบนอาหารเลี้ยงเชื้อเดกซ์โทรส Sabouraud ของ (SDA; Dalynn Biologicals) 100 มก. / มล tetracycline และ chloramphenicol สำหรับการแจงนับของยีสต์และเชื้อราอื่น ๆ . แลคโต MRS วุ้นและแผ่น NA ถูกบ่มออกซิเจนที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 48 ชั่วโมงและแผ่น SDA ถูกบ่มที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 72 ชั่วโมง อาณานิคมนับจากแผ่นที่มีอย่างน้อย 30 และสูงสุดไม่เกิน 300 โคโลนี จำนวนยีสต์และเชื้อรา (เช่นแม่พิมพ์) มีความแตกต่างตามลักษณะอาณานิคมและสัณฐานวิทยา.
ในการกำหนดแหล่งกำเนิดในกระเพาะรูเมนสลายตัวอย่างหมัก 90 d (500 กรัม) เก็บรวบรวมจากไซโลของการรักษาแต่ละถูกรวบรวมและแช่แข็ง (-40 ° C) ตัวอย่างหมักแช่แข็งก็แห้งพื้นดินผ่านหน้าจอขนาด 4 มิลลิเมตรและหนัก (5 กรัมต่อถุง) ลงในถุงโพลีเอสเตอร์ monofilament (8-10 ซม. และ 51 ไมครอนขนาดรูขุมขน; Sefar อเมริกาอิงค์, เดอพวิวนิวยอร์ก) ถุงโพลีเอสเตอร์เพิ่มขึ้นสามเท่าสำหรับแต่ละจุดเวลาการสุ่มตัวอย่างถูกบ่มในกระเพาะรูเมนของวัว 3 fistulated ruminally 2, 6, 12, 24, 48, 72 หรือ 96 ชั่วโมง (3 ถุงซ้ำต่อสัตว์) กระเป๋าจากแต่ละจุดเวลาที่ถูกวางลงในกระสอบรักษาตาข่ายขนาดใหญ่ (20-30 ซม. และ 3-5 มมขนาดรูขุมขน) เพื่อความสะดวกในการดึง วัวเหล่านี้ได้รับการเลี้ยงดูอาหารผสมเสร็จประกอบด้วยหมักข้าวบาร์เลย์ 85%, 12% ข้าวบาร์เลย์แห้งรีดและ 3% ของเนื้อวัวขุนมาตรฐานพรีมิกซ์วิตามินและแร่ธาตุอาหารเสริม (พื้นฐาน DM) เมื่อออกจากกระเพาะรูเมน, กระเป๋าถูกล้างตามที่อธิบาย Zahiroddini et al, (2004) กระเป๋าที่ไม่ได้รับการบ่มใน
กระเพาะรูเมนยังถูกรวมอยู่ในขั้นตอนการซักผ้าที่จะประเมินการสูญเสียของวัสดุที่ละลายน้ำจากถุง การทดลองนี้ได้รับการอนุมัติจากคณะกรรมการการดูแลสัตว์เลทศูนย์วิจัยกับสัตว์ที่ใช้ในการศึกษาครั้งนี้ได้รับการดูแลและการบริหารจัดการตามแนวทางของแคนาดาสภาการดูแลสัตว์ (2009).
ในหลอดทดลองมาตรการของการหมักในกระเพาะรูเมนของเนื้อหาข้าวโพดหมักในกระเพาะรูเมน ถูกเก็บ 1 ชั่วโมงก่อนอาหารเช้าจาก 3 สาวนิวเจอร์ซีย์ได้รับอาหารที่กล่าวข้างต้น สภาวะไร้ออกซิเจนได้รับการดูแลในระหว่างการขนส่งและการประมวลผลของเนื้อหาในกระเพาะรูเมนในยุ้งฉางและในห้องปฏิบัติการ ของเหลวในกระเพาะรูเมน (2 ลิตร) และของแข็ง (500 กรัม) กำลังหดหายสาม 15 ของพัลส์ในเครื่องปั่นล้างอย่างต่อเนื่องกับ CO2 O2 ฟรี homogenate เครียดถึง 4 ชั้นของผ้าและกรองผสมกับบัฟเฟอร์ prewarmed ที่ 39 ° C (McDougall, 1948) ที่ 1: 2 (ฉบับ / ปริมาตร) การผลิตโปรตีนจุลินทรีย์เป็นที่คาดกันบนพื้นฐานของการรวมตัวกันของ 15N จากแอมโมเนียมซัลเฟต 15N ที่อุดมด้วย (98% อะตอม 15N; ซิก Chemical Co, เซนต์หลุยส์, มิสซูรี่) รวมอยู่ในหัวเชื้อที่ 0.5 กรัม / ลิตร สำหรับการตรวจวัดของการผลิตก๊าซแต่ละ 4 หมัก (500 มก.) พื้นดินผ่านหน้าจอ 1 มิลลิเมตรชั่งน้ำหนักลงไปในซีรั่ม 135 มิลลิลิตรขวด ขวดทั้งหมดถูกอุ่น 39 องศาเซลเซียสและล้างด้วย CO2 O2 ฟรีก่อนที่นอกเหนือจาก 40 มิลลิลิตร inocula ถูกปิดผนึกขวดทันทีและวางไว้บนแพลตฟอร์มปั่นหมุน (140 รอบต่อนาที) ในศูนย์บ่มเพาะที่ 39 ° C ขวดที่มีช่องว่างและการหมัก (ที่มีเชื้อเท่านั้น) ได้จัดทำขึ้นเพิ่มขึ้นสามเท่าสำหรับแต่ละจุดเวลา ขวดสำหรับการบ่ม 0 ชั่วโมงถูกวางไว้บนน้ำแข็งทันทีหลังจากการเพิ่มขึ้นของเชื้อ ปริมาณของก๊าซที่ผลิตจากขวดแต่ละวัดที่ 3, 6, 9, 12, 24 และ 48 ชั่วโมงโดยใช้เครื่องมือกำจัดน้ำ ทั้งสองวิ่ง 3 ขวดซ้ำในการทำงานในแต่ละได้ดำเนินการ เพิ่มขึ้นสามเท่าขวดที่ 9 และ 48 ชั่วโมงของการบ่มถูกดึงและวัฒนธรรมทั้งในแต่ละขวดมีการประมวลผลสำหรับการวิเคราะห์ 15N ที่จะประเมินการสังเคราะห์โปรตีนของเชื้อจุลินทรีย์ตามที่อธิบายไว้โดย Wang et al, (2000).
การวิเคราะห์โมเลกุลดีเอ็นเอกรดสกัด จากการสุ่มตัวอย่างในแต่ละครั้งที่ 30 กรัมตัวอย่างจากแต่ละหมักไซโลขนาดเล็กถูกแช่แข็ง (-80 ° C) แห้งและพื้นดินผ่านหน้าจอ 4 มม subsamples (5 กรัม) มีลูกแล้วแป้งและ DNA ถูกสกัดตาม Yu และมอร์ริสัน (2004) ที่มีการปรับเปลี่ยนเล็กน้อยเพื่อความสะดวกในการสกัดดีเอ็นเอจากเชื้อรา สั้น ๆ , ดีเอ็นเอที่สกัดจาก 0.3 กรัมข้าวโพดลูกแป้งหมักโดยใช้ขั้นตอนลูกปัดเต้น (3 นาทีที่ความเร็วสูงสุด); กรดนิวคลีอิกถูกตกตะกอนด้วยแอมโมเนียมอะซิเตทและ isopropanol

การแปล กรุณารอสักครู่..

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:[สำเนา]

คัดลอก!

ทำสำเนาสามฉบับ จากการรักษาเสถียรภาพ
แอโรบิกอสแต่ละเปิดในวันสุดท้ายของการหมักเป็น subsampled และตัวอย่างรวมเพื่อให้ได้ 400 กรัม หมัก ( 3 ซ้ำต่อการรักษา ) ตัวอย่างเหล่านี้ถูกวางลงใน 4-l แยกภาชนะที่หุ้มฉนวน 2 ชั้น คลุมด้วยผ้า และเก็บรักษาที่อุณหภูมิ 20 ° C 21 D . สองดัลลัส thermochron ibuttons ( ข้อมูล lawrenceburg ฝังตัว , ระบบKY ) ถูกฝังอยู่ในชั้นล่างและกลางของมวลในแต่ละภาชนะหมักในไซโลและห้องเก็บบันทึกอุณหภูมิทุกๆ 15 นาที อุณหภูมิอากาศและอุณหภูมิในแต่ละภาชนะตรวจวัดพร้อมกันเป็นเวลา 21 วัน เนื้อหาของแต่ละภาชนะผสมอย่างละเอียด และตัวอย่างจาก 3 , 7 , 14 และ 21 วันการเต้นแอโรบิก ( เอ ) เคมี จุลินทรีย์และการวิเคราะห์โมเลกุล เสถียรภาพของแอโรบิก , กําหนดโดยหมอดู et al . ( 2012 ) เป็นจำนวนชั่วโมงที่อุณหภูมิหมักตากอากาศเกินอุณหภูมิพื้นฐาน 2 ° C , ตั้งใจ .
การวิเคราะห์ทางเคมีทั้ง unfermented อาหารสัตว์และอาหารสัตว์จำนวนบน D 90 จากขนาดเล็กแต่ละไซโลวิเคราะห์คาร์โบไฮเดรตที่ละลายน้ำ ( WSC ) , แอมโมเนียไนโตรเจน ( nh3 ( N ) แป้งตามที่อธิบายไว้โดย zahiroddini et al . ( 2004 ) กรดไขมันระเหยและถูกกำหนดโดยวิธีการของคุโด้ et al . ( 1987 ) โดยใช้รูปแบบ 5890a Hewlett Packard ชุด Plus II ของเหลว และก๊าซ Chromatograph ( คอลัมน์ : เอสเทอร์ nitrotereftalic 30-m เอทิลีนไกลคอลผสมซิลิกาหลอดเลือดฝอย 0.32 มม. และความหนาของฟิล์มสำหรับบัตร , M ; phenomenex Torrance , CA )ไนโตรเจนทั้งหมดถูกกำหนดโดยการวิเคราะห์ธาตุ ( ของไนโตรเจน ) โดยใช้ na1500 ไนโตรเจนคาร์บอน ( คาร์โล มาวิเคราะห์ใน มิลาน , อิตาลี ) โปรตีนมีค่าเป็น N × 6.25 . พืชอาหารและหญ้าหมักเพื่อนำไปศึกษา DM โดยการอบแห้งที่ 105 ° C ในเตาอบ forceddraft 24 H , โอม โดย 1 กรัมของตัวอย่างแบบแห้งในเตาเผาที่อุณหภูมิ 550 องศา C เป็นเวลา 5 ชั่วโมงและ NDF และ ADF ankom 200 ใช้ระบบเทคโนโลยี บริษัท ankom Fairport , นิวยอร์ก ) ด้วยการเพิ่มโซเดียมซัลไฟต์ และ แอลฟาอะไมเลสสำหรับ NDF และเป็นข้าวโพดหมักแต่

ไม่มี◊ Inoculant แอลฟาอะไมเลสสำหรับ ADF . ไนโตรเจนใน ADF ตกค้าง ( ADF ที่ไม่ละลายน้ำ ไนโตรเจน และ อาดีน ) วัดจากการเผาไหม้ตามที่อธิบายไว้ข้างต้น เครื่องวัดความเป็นกรดด่างพืชอาหารสัตว์สดหรือหมัก ( 15 กรัม ) จากขนาดเล็กแต่ละไซโลที่กลุ่มตัวอย่างแต่ละคนอาจผสมกับ 135 มล. คล้ายเนื้อเยื่อประสานน้ำผสมเป็นเวลา 30 วินาที และกรองผ่านผ้า 2 ชั้น . pH ของการวัดด้วยเครื่องวัด ซิมโฟนี ( บริษัท Imcopa International , Mississauga ) .
การวิเคราะห์จุลินทรีย์ โดยจุลินทรีย์พืชอาหารสัตว์หรือหญ้าหมัก ( 10 กรัม ) คือเพิ่ม 90 มล. ฆ่าเชื้อ 70 mm โพแทสเซียมฟอสเฟตบัฟเฟอร์ pH 7.0 ) และปั่นป่วน 60 s ที่ 260 รอบต่อนาทีในแผงประดับหน้าอก 400 ปั่น ( ซีเวิร์ดแผงประดับหน้าอกสหราชอาณาจักรลอนดอน ) ถูกระงับเป็นเจือจาง และกระจายทั้งสามใบไว้บนสื่อ Lactobacilli semiselective แก้ไขเพิ่มเติมกับ 200 มก. / มล. ร้อยเรียง ( เดอแมน rogosa และชาร์ป [ คุณนาย ] ; dalynn ทุกอย่าง , คาลการี ,แคนาดา ) สำหรับการแจกแจงของแบคทีเรียกรดแล็กติก ( Lab ) บน NUMB3RS แก้ไขเพิ่มเติม 200 mg / ml ( dalynn ร้อยเรียงทุกอย่าง ) เพื่อการแจงนับจุลินทรีย์ทั้งหมด และลง sabouraud ของ dextrose agar ( SDA ; dalynn ทุกอย่าง ) 100 มก. / มล. ของ tetracycline และ chloramphenicol เพื่อการแจงนับยีสต์และเชื้อราอื่น ๆ

การแปล กรุณารอสักครู่..

ภาษาอื่น ๆ

การสนับสนุนเครื่องมือแปลภาษา: กรีก, กันนาดา, กาลิเชียน, คลิงออน, คอร์สิกา, คาซัค, คาตาลัน, คินยารวันดา, คีร์กิซ, คุชราต, จอร์เจีย, จีน, จีนดั้งเดิม, ชวา, ชิเชวา, ซามัว, ซีบัวโน, ซุนดา, ซูลู, ญี่ปุ่น, ดัตช์, ตรวจหาภาษา, ตุรกี, ทมิฬ, ทาจิก, ทาทาร์, นอร์เวย์, บอสเนีย, บัลแกเรีย, บาสก์, ปัญจาป, ฝรั่งเศส, พาชตู, ฟริเชียน, ฟินแลนด์, ฟิลิปปินส์, ภาษาอินโดนีเซี, มองโกเลีย, มัลทีส, มาซีโดเนีย, มาราฐี, มาลากาซี, มาลายาลัม, มาเลย์, ม้ง, ยิดดิช, ยูเครน, รัสเซีย, ละติน, ลักเซมเบิร์ก, ลัตเวีย, ลาว, ลิทัวเนีย, สวาฮิลี, สวีเดน, สิงหล, สินธี, สเปน, สโลวัก, สโลวีเนีย, อังกฤษ, อัมฮาริก, อาร์เซอร์ไบจัน, อาร์เมเนีย, อาหรับ, อิกโบ, อิตาลี, อุยกูร์, อุสเบกิสถาน, อูรดู, ฮังการี, ฮัวซา, ฮาวาย, ฮินดี, ฮีบรู, เกลิกสกอต, เกาหลี, เขมร, เคิร์ด, เช็ก, เซอร์เบียน, เซโซโท, เดนมาร์ก, เตลูกู, เติร์กเมน, เนปาล, เบงกอล, เบลารุส, เปอร์เซีย, เมารี, เมียนมา (พม่า), เยอรมัน, เวลส์, เวียดนาม, เอสเปอแรนโต, เอสโทเนีย, เฮติครีโอล, แอฟริกา, แอลเบเนีย, โคซา, โครเอเชีย, โชนา, โซมาลี, โปรตุเกส, โปแลนด์, โยรูบา, โรมาเนีย, โอเดีย (โอริยา), ไทย, ไอซ์แลนด์, ไอร์แลนด์, การแปลภาษา.