3. Results and discussionAfter mult

3. Results and discussion
After multiple preliminary tests with several hydrophilic stationary phases, a Waters Spherisorb S5NH2 column was selected for the separation. Chromatographic conditions were optimized with respect to mobile phase composition by varying the percentage of organic modifier from 20% to 90% and the pH value of aqueous buffer solution between 3.0 and 7.0. Optimal conditions for the separation were observed with an isocratic elution containing 50% acetonitrile and 50% phosphate buffer (10 mM) at pH 4.75. At this pH, the analytes were eluted out in the order of creatinine (with pKa values of 4.8 and 9.2 in water), uric acid (pKa value of 5.75 in water) and ascorbic acid (with a pKa value of 4.1 and 11.6 in water) as presented in Fig. 1. This elution order indicates that besides partition of the analytes between a water-enriched layer on the surface of the polar stationary phase and the mobile phase, hydrogen-bond formation and the ionic attraction/repulsion between analytes and the amino functional group on the stationary phase also plays a significant role in the HILIC separation (Alpert,
1990; Ares & Bernal, 2012; Zuo et al., 2011, 2014). The retention times of creatinine, uric acid and ascorbic acid were: 3.09 ± 0.01, 4.67 ± 0.01 and 5.30 ± 0.01 min, respectively, which were determined from 21 consecutive injections during an analysis of a series of standard solutions and milk samples. The relative standard deviation (RSD) values of the retention times were smaller than 0.6%, and the precision in the peak area was better than 3.0% for eight consecutive injections of the same milk sample, demonstrating that the analytical method developed was very stable and had high reproducibility.
3. Results and discussion
After multiple preliminary tests with several hydrophilic stationary phases, a Waters Spherisorb S5NH2 column was selected for the separation. Chromatographic conditions were optimized with respect to mobile phase composition by varying the percentage of organic modifier from 20% to 90% and the pH value of aqueous buffer solution between 3.0 and 7.0. Optimal conditions for the separation were observed with an isocratic elution containing 50% acetonitrile and 50% phosphate buffer (10 mM) at pH 4.75. At this pH, the analytes were eluted out in the order of creatinine (with pKa values of 4.8 and 9.2 in water), uric acid (pKa value of 5.75 in water) and ascorbic acid (with a pKa value of 4.1 and 11.6 in water) as presented in Fig. 1. This elution order indicates that besides partition of the analytes between a water-enriched layer on the surface of the polar stationary phase and the mobile phase, hydrogen-bond formation and the ionic attraction/repulsion between analytes and the amino functional group on the stationary phase also plays a significant role in the HILIC separation (Alpert,
1990; Ares & Bernal, 2012; Zuo et al., 2011, 2014). The retention times of creatinine, uric acid and ascorbic acid were: 3.09 ± 0.01, 4.67 ± 0.01 and 5.30 ± 0.01 min, respectively, which were determined from 21 consecutive injections during an analysis of a series of standard solutions and milk samples. The relative standard deviation (RSD) values of the retention times were smaller than 0.6%, and the precision in the peak area was better than 3.0% for eight consecutive injections of the same milk sample, demonstrating that the analytical method developed was very stable and had high reproducibility.

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

3. ผลการอภิปรายและ
หลังจากการทดสอบเบื้องต้นหลายขั้นตอนหลายนิ่งน้ำคอลัมน์น้ำ Spherisorb S5NH2 ได้รับเลือกสำหรับการแยก เงื่อนไขโครมาถูกที่ดีที่สุดที่เกี่ยวกับองค์ประกอบของเฟสเคลื่อนที่ที่แตกต่างกันโดยร้อยละของการปรับปรุงอินทรีย์จาก 20% เป็น 90% และค่าพีเอชของสารละลายบัฟเฟอร์น้ำระหว่าง 3.0 และ 7.0 สภาวะที่เหมาะสมสำหรับการแยกถูกตั้งข้อสังเกตกับ isocratic ชะที่มี acetonitrile 50% และ 50% ฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (10 มิลลิเมตร) ที่ pH 4.75 ที่ pH นี้วิเคราะห์ที่ถูกชะออกมาในคำสั่งของครี (มีค่า pKa ของ 4.8 และ 9.2 ในน้ำ), กรดยูริค (ค่า pKa 5.75 ในน้ำ) และกรดแอสคอบิ (มีค่า pKa 4.1 และ 11.6 ในน้ำ ) ตามที่นำเสนอในรูป 1. เพื่อ elution นี้บ่งชี้ว่านอกเหนือจากพาร์ทิชันของวิเคราะห์ระหว่างชั้นน้ำที่อุดมไปบนพื้นผิวของเฟสขั้วโลกและเฟสเคลื่อนที่รูปแบบไฮโดรเจนพันธบัตรและสถานที่น่าสนใจไอออนิก / เขม่นระหว่างวิเคราะห์และกลุ่มอะมิโนที่ทำงานใน เฟสยังมีบทบาทสำคัญในการแยก HILIC (อัลเพิร์,
1990; Ares และ Bernal 2012; Zuo et al, 2011, 2014). เวลาการเก็บรักษา creatinine, กรดยูริคและวิตามินซีคือ 3.09 ± 0.01, 4.67 ± 0.01 และ 5.30 ± 0.01 นาทีตามลำดับซึ่งได้รับการพิจารณาจาก 21 ฉีดติดต่อกันระหว่างการวิเคราะห์ของซีรีส์ของการแก้ปัญหามาตรฐานและตัวอย่างนม ส่วนเบี่ยงเบนมาตรฐานสัมพัทธ์ (RSD) ค่าของเวลาการเก็บรักษามีขนาดเล็กกว่า 0.6% และในพื้นที่ที่มีความแม่นยำสูงสุดก็ยังดีกว่า 3.0% เป็นเวลาแปดฉีดติดต่อกันของกลุ่มตัวอย่างนมเดียวกันแสดงให้เห็นว่าวิธีการวิเคราะห์การพัฒนาเป็นอย่างมากที่มีเสถียรภาพและ มีการทำซ้ำสูง.
3 และการอภิปรายผล
การทดสอบเบื้องต้นหลังจากที่หลายขั้นตอนหลายนิ่งน้ำคอลัมน์น้ำ Spherisorb S5NH2 ได้รับเลือกสำหรับการแยก เงื่อนไขโครมาถูกที่ดีที่สุดที่เกี่ยวกับองค์ประกอบของเฟสเคลื่อนที่ที่แตกต่างกันโดยร้อยละของการปรับปรุงอินทรีย์จาก 20% เป็น 90% และค่าพีเอชของสารละลายบัฟเฟอร์น้ำระหว่าง 3.0 และ 7.0 สภาวะที่เหมาะสมสำหรับการแยกถูกตั้งข้อสังเกตกับ isocratic ชะที่มี acetonitrile 50% และ 50% ฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (10 มิลลิเมตร) ที่ pH 4.75 ที่ pH นี้วิเคราะห์ที่ถูกชะออกมาในคำสั่งของครี (มีค่า pKa ของ 4.8 และ 9.2 ในน้ำ), กรดยูริค (ค่า pKa 5.75 ในน้ำ) และกรดแอสคอบิ (มีค่า pKa 4.1 และ 11.6 ในน้ำ ) ตามที่นำเสนอในรูป 1. เพื่อ elution นี้บ่งชี้ว่านอกเหนือจากพาร์ทิชันของวิเคราะห์ระหว่างชั้นน้ำที่อุดมไปบนพื้นผิวของเฟสขั้วโลกและเฟสเคลื่อนที่รูปแบบไฮโดรเจนพันธบัตรและสถานที่น่าสนใจไอออนิก / เขม่นระหว่างวิเคราะห์และกลุ่มอะมิโนที่ทำงานใน เฟสยังมีบทบาทสำคัญในการแยก HILIC (อัลเพิร์,
1990; Ares และ Bernal 2012; Zuo et al, 2011, 2014). เวลาการเก็บรักษา creatinine, กรดยูริคและวิตามินซีคือ 3.09 ± 0.01, 4.67 ± 0.01 และ 5.30 ± 0.01 นาทีตามลำดับซึ่งได้รับการพิจารณาจาก 21 ฉีดติดต่อกันระหว่างการวิเคราะห์ของซีรีส์ของการแก้ปัญหามาตรฐานและตัวอย่างนม ส่วนเบี่ยงเบนมาตรฐานสัมพัทธ์ (RSD) ค่าของเวลาการเก็บรักษามีขนาดเล็กกว่า 0.6% และในพื้นที่ที่มีความแม่นยำสูงสุดก็ยังดีกว่า 3.0% เป็นเวลาแปดฉีดติดต่อกันของกลุ่มตัวอย่างนมเดียวกันแสดงให้เห็นว่าวิธีการวิเคราะห์การพัฒนาเป็นอย่างมากที่มีเสถียรภาพและ มีการทำซ้ำสูง

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

3 . ผลการทดสอบเบื้องต้นและการอภิปราย
หลังจากหลายหลายเฟสคงที่น้ำ , คอลัมน์ spherisorb s5nh2 น้ำถูกเลือกสำหรับการแยก เงื่อนไข และเหมาะสมกับการเคลื่อนที่ของเฟสที่ 2 ร้อยละของอินทรีย์จาก 20% ถึง 90% และค่าพีเอชของสารละลายสารละลายบัฟเฟอร์ระหว่าง 3.0 และ 7.0 .สภาวะที่เหมาะสมสำหรับการแยกสารที่มีชนิดที่มีไน Isocratic 50% และ 50% ฟอสเฟตบัฟเฟอร์ ( 10 มม. ) ที่ pH 4.75 . ที่ pH นี้ เป็นกรณีตัวอย่างในการสั่งซื้อของครีอะตินิน ( ที่มีคุณค่า pKa 4.8 ( ในน้ำ ) , กรดยูริค ( ค่า pKa ของที่มีในน้ำ ) และกรดแอสคอร์บิค ( ที่มีค่า pKa ของ 4.1 และ 11.6% ในน้ำ ) ที่แสดงในรูปที่ 1นี้ใช้เพื่อบ่งชี้ว่า นอกจากพาร์ทิชันของสารระหว่างน้ำอุดม ชั้น บนพื้นผิวของขั้วเครื่องเขียนเฟสและเฟสเคลื่อนที่ การสร้างพันธะไฮโดรเจน และไอออนดึงดูด / เขม่นระหว่างสารและหมู่ฟังก์ชันอะมิโนในเฟสอยู่กับที่ยังเล่นบทบาทสำคัญในการแยก hilic ( อัลเพิร์ด
1990 ; อาเรส & เบอร์นัล , 2012 ; จั่ว et al .2011 2014 ) ในช่วงเวลาของกรดยูริคและกรดแอสคอร์บิการ : 3.09 ± 0.01 , 0.01 และ 0.01 ± 4.67 ± 5.30 นาที ตามลำดับ ซึ่งพิจารณาจาก 21 ฉีดติดต่อกันในช่วงการวิเคราะห์ชุดของโซลูชั่นมาตรฐาน และตัวอย่างนม ความเบี่ยงเบนมาตรฐานสัมพัทธ์ ( RSD ) ค่าของการเก็บรักษาครั้งมีขนาดเล็กกว่า 0.6 %และแม่นยำในพื้นที่สูงสุดกว่า 3.0% สำหรับแปดฉีดติดต่อกันของตัวอย่างนมเดียวกัน แสดงให้เห็นว่าวิธีการวิเคราะห์ที่พัฒนาขึ้นมีเสถียรภาพมากและมีคาร์บอนสูง .
3 ผลการทดสอบเบื้องต้นและการอภิปราย
หลังจากหลายหลายเฟสคงที่น้ำ , คอลัมน์ spherisorb s5nh2 น้ำถูกเลือกสำหรับการแยกเงื่อนไข และเหมาะสมกับการเคลื่อนที่ของเฟสที่ 2 ร้อยละของอินทรีย์จาก 20% ถึง 90% และค่าพีเอชของสารละลายสารละลายบัฟเฟอร์ระหว่าง 3.0 และ 7.0 . สภาวะที่เหมาะสมสำหรับการแยกสารที่มีชนิดที่มีไน Isocratic 50% และ 50% ฟอสเฟตบัฟเฟอร์ ( 10 มม. ) ที่ pH 4.75 . ที่ pH นี้สารตัวอย่างที่เคยออกในคำสั่งของครีอะตินิน ( ที่มีคุณค่า pKa 4.8 ( ในน้ำ ) , กรดยูริค ( ค่า pKa ของที่มีในน้ำ ) และกรดแอสคอร์บิค ( ที่มีค่า pKa ของ 4.1 และ 11.6% ในน้ำ ) ที่แสดงในรูปที่ 1 นี้ใช้เพื่อบ่งชี้ว่า นอกจากพาร์ทิชันของสารระหว่างน้ำอุดม ชั้น บนพื้นผิวของขั้วเครื่องเขียนเฟสและเฟสเคลื่อนที่การเกิดพันธะไฮโดรเจน และไอออนดึงดูด / เขม่นระหว่างสารและหมู่ฟังก์ชันอะมิโนในเฟสอยู่กับที่ยังเล่นบทบาทสำคัญในการแยก hilic ( อัลเพิร์ด
1990 ; เป็น& เบอร์นัล , 2012 ; จั่ว et al . , 2011 , 2014 ) ในช่วงเวลาของกรดยูริคและกรดแอสคอร์บิการ : 3.09 ± 0.01 , 0.01 และ 0.01 ± 4.67 ± 5.30 นาที ตามลำดับซึ่งได้รับการพิจารณาจาก 21 ฉีดติดต่อกันในช่วงการวิเคราะห์ชุดของโซลูชั่นมาตรฐาน และตัวอย่างนม ความเบี่ยงเบนมาตรฐานสัมพัทธ์ ( RSD ) ค่าของการเก็บรักษาครั้งมีขนาดเล็กกว่า 0.6% และแม่นยำในพื้นที่สูงสุดกว่า 3.0% สำหรับแปดฉีดติดต่อกันของตัวอย่างนมเหมือนกันแสดงให้เห็นว่าวิธีการวิเคราะห์ที่พัฒนาขึ้นมีเสถียรภาพมากและมีความแม่นยําสูง