Fatty acid composition of isolated

Fatty acid composition of isolated lipid droplets and young adult
nematodeswas determined by gas chromatography/mass spectrometry
(GC/MS) as previously described [30,31]. Separation of the TAG and
phospholipid fractions used a two-solvent TLC protocol. Lipids were extracted
by adding 5 ml of ice-cold chloroform:methanol (1:1) and incubating
overnight at 20 °C with occasional shaking. A solution of 0.2 M
H3PO4 and 1 M KCl was added to samples, which resulted in phase
separation of the organic and aqueous phase. The organic phase was
removed and dried under argon, then resuspended in chloroform.
Samples were loaded in triplicate, and TLC plates were developed two
thirds of the way up the plate in the first solvent system: chloroform:
methanol:water:acetic acid (65:43:3:2.5), dried, and then the second
solvent system hexane:diethylether:acetic acid (80:20:2) was developed
to the top of the plate. Lipids were visualized under UV light
after spraying the platewith 0.005% primuline, and spots corresponding
to TAG and themajor phospholipidswere scraped, spikedwith a known
standard (15:0), and transesterified for GC/MS analysis to determine
the fatty acid composition as well as to determine the relative levels of
TAG, phosphatidylethanolamine (PE), and phosphatidylcholine (PC)
fractions. At least three biological replicates were used for TLC analysis.
Significancewas determined by t-test calculation using GraphPad Prism
5 software.
2.5. Cholesterol assay
Cholesterol

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

องค์ประกอบของกรดไขมันและแยกไขมันพบ nematodeswas ผู้ใหญ่
ยังกำหนดโดยวิธีแก๊สโครมาโตกราฟี / แมสสเปกโทรเมทรี
( GC / MS ) ตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ 30,31 [ ] การแยกของแท็กและ
เศษส่วนปใช้ตัวทำละลายมี 2 ขั้นตอน ไขมันสกัด
โดยการเพิ่ม 5 ml ของน้ำแข็งเย็น : เมทานอลคลอโรฟอร์ม ( 1 : 1 ) และการแช่ค้างคืนที่ 20 ° C
เขย่าเป็นครั้งคราวสารละลาย HCl 0.2 M
1 M KCl และเติมตัวอย่าง ซึ่งส่งผลให้เกิดการแยกเฟส
ของอินทรีย์และเฟสน้ำ . ระยะอินทรีย์คือ
ลบออกและแห้งภายใต้อาร์กอน จากนั้น resuspended ในคลอโรฟอร์ม
จำนวนโหลดทั้งสามใบ และมีแผ่นถูกพัฒนาสอง
ในสามของทางจานแรกในระบบตัวทำละลายคลอโรฟอร์ม : เมทานอล : น้ำ :
: กรดน้ำส้ม ( 65:43:3:2.5 )แห้งแล้ว 2
: ระบบตัวทำละลายเฮกเซนไดเ ธิลอีเทอร์ : กรดน้ำส้ม ( 80:20:2 ) พัฒนา
ไปด้านบนของจาน ไขมันถูกมองเห็นได้ที่
แสงหลังการฉีดพ่นในกรณีที่ 0.005% primuline และจุดที่สำคัญ phospholipidswere
ติดแท็กและขูด spikedwith รู้จัก
มาตรฐาน ( 15:0 ) และ transesterified สำหรับ GC / MS การวิเคราะห์เพื่อตรวจสอบ
ส่วนกรดไขมันรวมทั้งเพื่อกำหนดระดับของญาติ
แท็ก phosphatidylethanolamine ( PE ) และฟอสฟาติดิลโคลีน ( PC )
เศษส่วน แบบชีวภาพอย่างน้อยสามวิเคราะห์ TLC .
significancewas กำหนดโดยการคำนวณ t-test โดยใช้ซอฟต์แวร์ปริซึม graphpad 5
.
2.5 โดย
คอเลสเตอรอลคอเลสเตอรอล