Bacterial mutagenicity assay Salmon

Bacterial mutagenicity assay
Salmonella typhimurium strains TA98 and TA100 were ob-tained from the Tianjin Municipal Center for Disease ControlEnviron Sci Pollut Res
and Prevention in China. They were cultured in nutrient broth(BD Co., USA), and the density was confirmed by a bacterialviability count. Fresh overnight bacterial cultures were pre-pared and evaluated for strain characteristics according toMaron and Ames’s methods (1983), with slight modifications(McAdam et al. 2011; Mortelmans and Zeiger 2000). First,1 ml of liver homogenates (S9) prepared from male rats treat-ed with Aroclor 1254 purchased from the Chinese Center forDisease Control and Prevention, 6 ml of phosphate buffersolution (PBS) (0.2 M, pH 7.4), 0.4 ml of potassium chloride(1.65 M) and magnesium chloride (0.4 M), 1 ml of glucose-6-phosphate (0.05 M), and 1.6 ml of nicotine adenine dinucleo-tide phosphate (NADP, 0.025 M) were combined to producethe S9 mix. Then, 0.5 ml of the S9 mix, 100 μl of an overnightculture of testing strains, and 100 μl of the test PM dissolvedin DMSO were added to a test tube. The strains were exposedto various concentrations of PM solutions (50, 100, 125, 250,and 500 μg/plate). DMSO (50 μl/plate) was used as a solventcontrol. 2-Aminoanthracene (2 μg/plate), 2-nitrofluorene(4 μg/plate), and sodium azide (1 μg/plate) were all used aspositive controls. The mixture was shaken and incubated for20 min at 37 °C in the dark before the addition of 2 ml ofmolten top agar supplemented with 0.5 mM histidine/biotin.The contents in the tube were poured onto the minimal glu-cose agar. After the top agar hardened, the plates were incu-bated in the dark at 37 °C for 48 h. All tests were performedwith triplicate plates for each concentration. The mutagenicresponse reported was calculated as the slope (revertants/μgPM) of the linear portion of the dose-response curve fittedwith Poisson-weights to the data (Roemer et al. 2009).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

การศึกษาเชื้อแบคทีเรียทดสอบ ระดับสายพันธุ์ typhimurium TA98 และ TA100 มี ob tained จากศูนย์เทศบาลเทียนสำหรับโรค ControlEnviron วิทยาศาสตร์วิศวกรรม Pollut Resและป้องกันในประเทศจีน พวกอ่างในธาตุอาหารซุป (BD Co. สหรัฐอเมริกา), และความหนาแน่นได้รับการยืนยัน โดยนับ bacterialviability วัฒนธรรมแบคทีเรียสดค้างคืนล่วงหน้าถึง และประเมินลักษณะต้องใช้ตามวิธีของเอมส์ (1983), และ toMaron ด้วยการปรับเปลี่ยนเล็กน้อย (McAdam et al. 2011 Mortelmans ก Zeiger 2000) แรก ml 1 ของตับ homogenates (S9) พร้อมจากชายหนูรักษา ed 1254 Aroclor ซื้อจาก forDisease จีนศูนย์ควบคุม และป้องกัน ml 6 ของฟอสเฟต buffersolution (PBS) (0.2 M, pH 7.4), 0.4 ml (1.65 M) โพแทสเซียมคลอไรด์และแมกนีเซียมคลอไรด์ (0.4 M), 1 ml ของกลูโคส-6-ฟอสเฟต (0.05 M), และ 1.6 ml ของนิโคติน adenine dinucleo ไทด์ฟอสเฟต (NADP , 0.025 M) ได้รวมการผสม producethe S9 แล้ว 0.5 ml ของ S9 ผสม μl 100 ของการ overnightculture ของการทดสอบสายพันธุ์ และ μl 100 ของ PM dissolvedin DMSO มีเพิ่มหลอดทดสอบการทดสอบ สายพันธุ์มีความเข้มข้นต่าง ๆ ของโซลูชั่น PM exposedto (50, 100, 125, 250 และ จานละ 500 μg) DMSO (50 μl/จาน) ถูกใช้เป็นแบบ solventcontrol 2-Aminoanthracene (2 μg/แผ่น), 2-nitrofluorene(4 μg/plate) และโซเดียม azide (1 μg/จาน) ถูกใช้ควบคุม aspositive ส่วนผสมถูกเขย่า และ incubated for20 นาทีที่ 37 ° C ในมืดก่อนแห่ง 2 ml ofmolten agar ด้านเสริม ด้วย 0.5 mM histidine/ไบ โอติน เนื้อหาในท่อถูก poured agar cose glu น้อยลง หลังจาก agar ด้านแข็ง แผ่นที่ bated incu ในมืดที่ 37 ° C สำหรับ 48 h ทดสอบทั้งหมดมีแผ่น triplicate performedwith สำหรับแต่ละความเข้มข้น Mutagenicresponse รายงานถูกคำนวณเป็น (revertants μgPM) ความชันของเส้นตรงส่วนของ fittedwith โค้งตอบสนองยาปัวน้ำหนักข้อมูล (Roemer et al. 2009)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

สารก่อกลายพันธุ์ในแบคทีเรีย Salmonella Typhimurium ~ -
ก่อกลายพันธุ์และมี tained OB จากเทียนจินเทศบาลศูนย์โรค controlenviron วิทย์ pollut RES
และการป้องกันในประเทศจีน พวกเขาถูกเลี้ยงใน broth สารอาหาร ( BD Co . , USA ) , ความหนาแน่น และได้รับการยืนยันโดย bacterialviability นับสดค้างคืนแบคทีเรียวัฒนธรรมอยู่ก่อน และประเมินลักษณะสายพันธุ์ ตามสบาย tomaron และวิธีเอมส์ ( 1983 ) ที่มีการปรับเปลี่ยนเล็กน้อย ( mcadam et al . 2011 ; mortelmans และเครื่องชี้แบบ 2000 ) อันดับแรก 1 มิลลิลิตร homogenates ตับ ( S9 ) ที่เตรียมจากหนูตัวผู้รักษาเอ็ดกับโรคลอหรือซื้อจากศูนย์จีน fordisease การควบคุมและการป้องกัน6 มิลลิลิตร ฟอสเฟตบัฟเฟอร์ โซลูชัน ( PBS ) ( 0.2 M pH 7.4 ) 0.4 มิลลิลิตรของโพแทสเซียมคลอไรด์ ( 1.65 เมตร ) และแมกนีเซียมคลอไรด์ ( 0.4 เมตร ) 1 ml glucose-6-phosphate ( 0.05 M ) และ 1.6 ml ของนิโคตินและ dinucleo ไทด์ ฟอสเฟต ( nadp 0.025 m ) เป็นรวม producethe S9 ผสม แล้ว 0.5 ml ของ S9 ผสม 100 μ L ของ overnightculture การทดสอบสายพันธุ์และ 100 μ l ทดสอบ PM dissolvedin DMSO ที่ถูกหลอดทดสอบ สายพันธุ์มีความเข้มข้นของโซลูชั่น exposedto ต่างๆ PM ( 50 , 100 , 125 , 250 และ 500 μกรัม / แผ่น ) DMSO ( 50 μ L / จาน ) ถูกใช้เป็น solventcontrol . 2-aminoanthracene ( 2 μกรัม / จาน ) 2-nitrofluorene ( 4 μกรัม / จาน ) และโซเดียมไซด์ ( 1 μกรัม / จาน ) ถูกใช้ในการควบคุม aspositive .ส่วนผสมที่ถูกเขย่าโดย for20 นาทีที่ 37 ° C ในที่มืดก่อนที่จะเพิ่ม 2 ml ofmolten ด้านบน agar ที่เติม 0.5 มม. / biotin.the เมื่อเนื้อหาในท่อถูกเทลงบนน้อยที่สุด GLU กว่วุ้น หลังจากด้านบนวุ้นแข็ง จานเป็น incu ลดในที่มืดที่อุณหภูมิ 37 องศา C เป็นเวลา 48 ชั่วโมง การทดสอบทั้งหมดได้ performedwith ทำสำเนาสามฉบับแผ่นสำหรับแต่ละความเข้มข้นการ mutagenicresponse รายงานคำนวณเป็นทางลาดชัน ( revertants / μ GPM ) ของส่วนของเส้นโค้งเส้นความคิดเห็น fittedwith ปัวซอเวทข้อมูล ( โรเมอร์ et al . 2009 )