Tissue cultures were initiated from

Tissue cultures were initiated from Calendula
officinalis L. seeds. The seed tegument was completely
removed, and surface sterilization was performed
according to Victório and Lage (2009a). After in vitro
seed germination, nodal segments (1.0-1.2 cm) were
excised from plantlets and inoculated in medium MS
(MURASHIGE; SKOOG, 1962) to produce new plants
that were subcultured during a series of 45-day periods
over the course of 1 year to obtain the biomass required
to initiate treatments. Individual clones were then selected
and monoclonal cultures used to apply the treatments
described below. Nodal segments excised from 45-day-old
clonal plantlets were placed in six vessels (141 x 72 mm)
with 5 explants per vessel, on 50 mL of modified MS,
reduced to half of NH4NO3
and KNO3
solution (MS½N,
supplemented with 20 g L-1 sucrose, 1.3 µM of thiamineHCl,
3 µM of pyridoxine, 4.1 µM of nicotinic acid, 0.6 mM
of myo-inositol, pH rated to 5.8 ± 0.1) and sterilized in
autoclave at 120 oC and 1.1 kgf cm-2. To solidify media, 7.8
g L-1 of agar was used. Cultures were maintained for 45 days
at 25 ± 2 oC under white light (Sylvania F20 W T12) at an
intensity of 30 moles m-2 s
-1 and a photoperiod of 16 h. For
all treatments, morphogenesis was evaluated at 15, 30 and 45
days, considering these criteria: shoot number, shoot height,
leaf number and rooting.
Effect of different explant source on plant
development
Nodal segments from apical, intermediate and basal
region were excised from 45-day-old clonal plantlets and
placed in vessels on 50 mL of MS½N. The experimental
design was randomized with two replicates of 30 nodal
segment types. Data were statistically analyzed by ANOVA
followed by the Tukey`s test (p 0.05).
Effect of solid medium and liquid medium, plus sand
as support, on growth
Nodal segments, independent of position, were placed
in vessels containing 40 mL of liquid MS½N plus 60 g of
beach sand (0.25 to 0.125 mm grain size) used as support.
The sand was rinsed in running water, immersed in 0.2%
H2
SO4
for 24 h, followed by several rinses in sterile
water to remove H2
SO4
traces and further sterilized by
autoclaving (120 ºC, 1.1 Kgf cm-2, 15 min). The following
treatments were evaluated: solid MS½N (control 1) with
the same composition above, liquid MS½N plus beach
sand (control 2), and liquid MS½N with the addition
of 0.1 mg L-1 IAA (Indole-3-acetic acid) plus beach
sand. The adopted experimental design was completely
randomized with two replicates and 30 explants per
treatment (n= 60). Data were statistically analyzed by
ANOVA followed by the Tukey`s test (p 0.05).
Effect of cytokinins (TDZ, BAP) on plant
development
The effects of TDZ (Thidiazuron) and BAP (6-
Benzylaminopurine) in improving the production of C.
officinalis plantlets were evaluated using the following
concentrations: 0.0 (control), 0.2; 0.5; 0.8 mg L-1. Their
effects were also evaluated in combination with the auxin
IAA: IAA (0.1 mg L-1) + TDZ (0.1 or 0.5 mg L-1) and
IAA (0.1 mg L-1) + BAP (0.1 or 1.0 mg L-1). The adopted
Rev. Ciênc. Agron., v. 43, n. 3, p. 539-545, jul-set, 2012 541
experimental design was completely randomized with three
replicates and 30 explants per treatment (n= 90). Treatment
effects were analyzed by ANOVA at 5% significance level
using Tukey`s test. If any TDZ concentration failed to elongate
the shoot, then 45-day-old plantlets from TDZ media were
transferred to a medium without growth regulators (MS½N)
to elongate, and the shoot height was measured after 45 days.
In vitro Rooting
Nodal segments, independent of position, were
placed in vessels containing 60 mL of solid MS½N.
The following experiments were evaluated to improve
rooting: (1) solid MS½N plus additional auxins: IAA,
IBA (Indole-3-butyric acid) and NAA (Naphthalene
acetic acid). The experiment was arranged as a
randomized complete design, with three replicates
(n= 60) for treatments using IAA, NAA and IBA
with concentrations of 0.0, 0.25, 0.5 and 1.0 mg L-1
.
Data were statistically analyzed by ANOVA followed by
the Tukey`s test (p 0.05). A test of difference between two
percentages was conducted, considering p 0.05 level, t-test.
Acclimatization
Piraí City (Rio de Janeiro State, Brazil), the place
of acclimatization, is located between the geographic
coordinates 22o37`45`` S and 43o53`53`` W, at high
altitude, providing cool temperatures. Under the Kooppen
climate classification, Piraí City has a humid tropical
climate (Cwa). About 30 plantlets of 6 to 8 cm in length
were transferred to seed pots (9 cm2 area) containing
a sand and humus mixture (2:1). To maintain humidity,
the plants were covered with plastic caps and gradually
opened during the two-week acclimatization. Plants were
grown in a greenhouse for 15 days, at temperatures
ranging from 12.3 ºC to 24.1 ºC, and watered once a day.
Survival of transplanted plants was monitored.
R

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

วัฒนธรรมเนื้อเยื่อถูกริเริ่มจาก Calendula
officinalis เมล็ดลิตร กระดองเมล็ดพันธุ์ที่ได้รับการอย่างสมบูรณ์ออกและการฆ่าเชื้อพื้นผิวที่ได้ดำเนินการตามVictorio และ Lage (2009a) หลังจากที่ในหลอดทดลองการงอกของเมล็ดส่วนสำคัญ (1.0-1.2 เซนติเมตร) ถูกตัดจากต้นและเชื้อในอาหารสูตรMS (Murashige; Skoog, 1962) ในการผลิตโรงงานใหม่ที่ถูกเลี้ยงในซีรีส์ของระยะเวลา45 วันซึ่งเป็นช่วงเวลาของ1 ปีที่จะได้รับชีวมวลที่จำเป็นต้องใช้ในการเริ่มต้นการรักษา โคลนส่วนบุคคลได้รับการคัดเลือกแล้วและวัฒนธรรมโมโนโคลนอลใช้ในการใช้การรักษาอธิบายไว้ด้านล่าง ส่วนสำคัญพอจาก 45 วันเก่าต้นclonal ถูกวางไว้ในหกเรือ (141 x 72 มิลลิเมตร) 5 ชิ้นต่อลำใน 50 มิลลิลิตร MS ดัดแปลง, ลดลงถึงครึ่งหนึ่งของ NH4NO3 และ KNO3 การแก้ปัญหา (MS½N, เสริมด้วย 20 กรัม L-1 ซูโครส 1.3 ไมครอนของ thiamineHCl, 3 ไมครอนของไพริดอกซิ 4.1 ไมครอนของกรด nicotinic 0.6 มิลลิของmyo-ทอพีเอชจัดอันดับ 5.8 ± 0.1) และผ่านการฆ่าเชื้อในหม้อนึ่งความดันที่120 องศาเซลเซียสและ 1.1 ซม kgf-2 เพื่อเสริมสร้างสื่อ 7.8 กรัม L-1 จากวุ้นถูกนำมาใช้ วัฒนธรรมได้รับการดูแลเป็นเวลา 45 วันที่อุณหภูมิ25 ± 2 องศาเซลเซียสภายใต้แสงสีขาว (ซิลเวเนีย F20 W T12) ที่ความเข้มของวันที่30 ม. ไฝ-2 s -1 และแสง 16 ชั่วโมง สำหรับการรักษาทุก morphogenesis ถูกประเมินที่ 15, 30 และ 45 วันพิจารณาเกณฑ์เหล่านี้: ยิงจำนวนสูงยิงจำนวนใบและราก. ผลของแหล่งที่มาของชิ้นส่วนที่แตกต่างกันในโรงงานพัฒนาส่วนปมจากปลาย, ระดับกลางและฐานภูมิภาคถูกตัดจาก45 วันเก่าต้น clonal และวางไว้ในเรือ50 มิลลิลิตรMS½N ทดลองการออกแบบได้รับการสุ่มสองซ้ำสำคัญ 30 ชนิดส่วน วิเคราะห์ข้อมูลทางสถิติโดยการวิเคราะห์ความแปรปรวนตามด้วยการทดสอบ Tukey`s (P 0.05). ผลกระทบของสื่อที่เป็นของแข็งของเหลวและขนาดกลางรวมทั้งทรายเป็นการสนับสนุนการเจริญเติบโตของกลุ่มปมเป็นอิสระจากตำแหน่งถูกวางไว้ในภาชนะที่มี40 มลMS½Nของเหลว บวก 60 กรัมของหาดทราย(0.25-0.125 มมขนาดเม็ด) ที่ใช้ในการสนับสนุน. ทรายที่ได้รับการล้างในน้ำที่ใช้แช่ใน 0.2% H2 SO4 เวลา 24 ชั่วโมงตามด้วยการล้างหลายอย่างในการฆ่าเชื้อน้ำที่จะลบH2 SO4 ร่องรอยและต่อไป ผ่านการฆ่าเชื้อโดยการนึ่งฆ่าเชื้อ(120 องศาเซลเซียส 1.1 Kgf ซม-2, 15 นาที) ต่อไปนี้การรักษาที่ได้รับการประเมิน: MS½Nของแข็ง (ควบคุม 1) ที่มีองค์ประกอบเดียวกันข้างต้นMS½Nของเหลวบวกหาดทราย(ควบคุม 2) และMS½Nของเหลวที่มีการเพิ่ม0.1 มก. L-1 IAA (กรด Indole-3-อะซิติก) บวก หาดทราย การออกแบบการทดลองนำมาใช้เป็นที่สมบูรณ์แบบสุ่มซ้ำสองและ 30 ชิ้นต่อการรักษา(n = 60) วิเคราะห์ข้อมูลทางสถิติโดยการวิเคราะห์ความแปรปรวนตามด้วยการทดสอบ Tukey`s (P 0.05). ผลของไซโตไค (TDZ, BAP) ในโรงงานพัฒนาผลของTDZ (Thidiazuron) และ BAP (6 benzylaminopurine) ในการปรับปรุงการผลิตของซีofficinalis ต้นได้รับการประเมินโดยใช้ต่อไปนี้ความเข้มข้น: 0.0 (ควบคุม) 0.2; 0.5; 0.8 มก. L-1 ของพวกเขาผลกระทบที่ได้รับการประเมินยังร่วมกับออกซินIAA: IAA (0.1 มก. L-1) + TDZ (0.1 หรือ 0.5 มก. L-1) และIAA (0.1 มก. L-1) + BAP (0.1 หรือ 1.0 มก. L-1 ) ที่นำมารายได้ Ciênc Agron., v. 43, n 3, p 539-545, ชุดกรกฎาคม 2012 541 การออกแบบการทดลองแบบสุ่มสมบูรณ์ถูกสามซ้ำและ 30 ชิ้นต่อการรักษา (n = 90) การรักษาผลกระทบวิเคราะห์ ANOVA ที่ระดับนัยสำคัญ 5% ใช้การทดสอบ Tukey`s ถ้ามีความเข้มข้น TDZ ใด ๆ ที่ล้มเหลวในการยืดการถ่ายทำแล้วต้น45 วันเก่าจากสื่อ TDZ ถูกถ่ายโอนไปยังสื่อโดยไม่มีหน่วยงานกำกับดูแลการเจริญเติบโต(MS½N) จะยาวและความสูงยิงวัดหลังจาก 45 วัน. ในหลอดทดลองขจัดส่วนปม, เป็นอิสระจากตำแหน่งได้. วางไว้ในภาชนะที่มี 60 มลMS½Nของแข็งการทดลองต่อไปนี้ได้รับการประเมินเพื่อปรับปรุงการขจัด(1) MS½Nของแข็งบวกเพิ่มเติม auxins: IAA, ไอบีเอ (กรด Indole-3-butyric) และ NAA (แนพทาลีกรดอะซิติก) การทดลองที่ได้รับการจัดให้เป็นออกแบบที่สมบูรณ์แบบสุ่มสามซ้ำ(n = 60) สำหรับการรักษาโดยใช้ IAA, NAA และ IBA ที่มีความเข้มข้น 0.0, 0.25, 0.5 และ 1.0 มก. L-1. การวิเคราะห์ข้อมูลทางสถิติโดยการวิเคราะห์ความแปรปรวนตามด้วยTukey`s ทดสอบ (P 0.05) การทดสอบความแตกต่างระหว่างสองเปอร์เซ็นต์ได้ดำเนินการพิจารณาพีระดับ 0.05 t-test. เคยชินกับสภาพPirai ซิตี้ (Rio de Janeiro รัฐบราซิล), สถานที่ของเคยชินกับสภาพที่ตั้งอยู่ระหว่างทางภูมิศาสตร์พิกัด22o37`45`` S และ 43o53 `53`` W ที่สูงระดับความสูงให้อุณหภูมิเย็น ภายใต้ Kooppen จำแนกสภาพภูมิอากาศ Pirai เมืองมีเขตร้อนชื้นสภาพภูมิอากาศ(ค) เกี่ยวกับ 30 ต้นของ 6-8 เซนติเมตรยาวถูกโอนไปยังกระถางเมล็ด(9 พื้นที่ cm2) ที่มีทรายผสมปุ๋ยอินทรีย์(2: 1) เพื่อรักษาความชื้นพืชถูกปกคลุมไปด้วยหมวกพลาสติกและค่อยๆเปิดเคยชินกับสภาพในช่วงสองสัปดาห์ พืชที่ปลูกในเรือนกระจกเป็นเวลา 15 วันที่อุณหภูมิตั้งแต่ 12.3 ºCถึง 24.1 องศาเซลเซียสและรดน้ำวันละครั้ง. การอยู่รอดของพืชที่ปลูกได้รับการตรวจสอบ. R

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

เนื้อเยื่อเพาะเลี้ยงที่ถูกริเริ่มจาก Calendula officinalis L .
เมล็ด เมล็ดพบทั้งหมด
ลบออก และฆ่าเชื้อที่พื้นผิวได้ตาม vict
óริโอและสถานที่ ( 2009a ) หลังจากในการงอกของเมล็ดการ
ส่วนข้อ ( 1.0-1.2 ซม. )
ตัดจากต้นและปลูกใน MS
( อาหาร ; Skoog , 1962 ) เพื่อผลิตพืชใหม่
ที่ subcultured ในระหว่างชุด 45 วัน ระยะเวลา
ผ่านหลักสูตร 1 ปี เพื่อให้ได้จำนวนที่ต้องการ
เพื่อเริ่มต้นการรักษา โคลนแต่ละตัวแล้วเลือก
และวัฒนธรรมโมโนโคลนอลใช้ในการใช้รักษา
อธิบายไว้ด้านล่าง ส่วนข้อที่ตัดจากต้นงาน 45 วันเก่า
อยู่ในหกเรือ ( 141 x 72 มม. )
5 เลี้ยงต่อเรือ 50 ml
MS ดัดแปลงลดลงครึ่งหนึ่ง และ nh4no3

kno3 โซลูชั่น ( MS ½ N ,
เสริม 20 กรัม L-1 ซูโครส , 1.3 µ M ของ thiaminehcl
3 M , µ pyridoxine 4.1 µ M กรดนิโคตินิก , 0.6 mm
ของเมียว inositol pH 5.8 คะแนน เพื่อ± 0.1 ) และฆ่าเชื้อในหม้อนึ่งความดัน 120
OC และ 1.1 กิโลกรัม cm-2 . ที่จะทำให้สื่อ , 7.8
g L-1 วุ้นที่ใช้ วัฒนธรรมที่ถูกเก็บรักษาไว้เป็นเวลา 45 วัน
25 ± 2 องศาเซลเซียสภายใต้แสงสีขาว ( Sylvania f20 W T12 ) ที่ความเข้มของไฝด้วย 30
s
- 1 และต่อ 16 ชั่วโมงสำหรับ
ทั้งหมดรักษามอร์โฟเจเนซิสถูกประเมิน 15 , 30 และ 45
วัน พิจารณาเกณฑ์เหล่านี้ : ยิงเบอร์ ยิง ความสูง จำนวนใบและราก
.
ผลของพืชที่แตกต่างกันต่อการพัฒนาแหล่ง

ส่วนข้อ จาก ปลาย กลางและแรกเริ่ม
เขตที่ถูกตัดจากต้นและอายุ 45 วันงาน
วางไว้ในเรือใน 50 มิลลิลิตร นางสาว½ของการทดลองแบบสุ่มที่มีสอง

ซ้ำประเภท 30 ข้อ ปล้อง วิเคราะห์ข้อมูลทางสถิติโดยใช้ ANOVA
ตามด้วยคู่ ` s ทดสอบ ( P < 0.05 ) ผลของขนาดปานกลาง และ ของเหลว ของแข็ง บวกทราย
เป็นสนับสนุนการเจริญเติบโต
ส่วนข้ออิสระ ตำแหน่ง ถูกวางไว้
ในภาชนะบรรจุ 40 ml ของของเหลว MS ½ N บวก 60 g
( 0.25 ถึงหาดทรายเม็ดขนาด 0.125 มม. ) ใช้เป็นสนับสนุน .
ทรายล้างในน้ำไหล แช่ใน 0.2 % H2


ปา 24 H ตามหลาย rinses ในน้ำหมัน
เอา H2
ปา และยังผ่านกระบวนการฆ่าเชื้อด้วย

มีอัตราส่วนโฟกัส ( 120 º C 1.1 กิโลกรัม cm-2 15 นาที ) การรักษาต่อไปนี้
ประเมิน : ของแข็ง MS ½ ( ควบคุมด้วย
1 )เหมือนองค์ประกอบข้างต้น เหลว MS ½ N บวกหาดทราย
( ควบคุม ) และนางสาวเหลว½กับ 0.1 มิลลิกรัม นอกจากนี้
L-1 IAA ( กรดกระเพาะ ) บวก
ชายหาดทราย รับการทดลองสุ่มสมบูรณ์
2 แบบ 30 เลี้ยงต่อ
รักษา ( n = 60 ) วิเคราะห์ข้อมูลทางสถิติโดยใช้ ANOVA และตามด้วยคู่
` s ทดสอบ ( P < 0.05 ) ผลของไทเดียซูรอนไซโตไคนิน ( ,บาป ) ในการพัฒนาพืช

ผลของไทเดียซูรอน ( thidiazuron ) และแบบ ( 6 -
benzylaminopurine ) ในการปรับปรุงการผลิตของ C .

ต่อต้นเป็นประเมินความเข้มข้นดังต่อไปนี้ : 0.0 ( การควบคุม ) , 0.2 ; 0 ; 1 L-1 มิลลิกรัม ผลกระทบ
ยังประเมินร่วมกับออกซิน ( IAA
: IAA 0.1 มก. L-1 ) ดัดแปลง ( 0.1 หรือ 0.5 mg L-1 )
( IAA 0.1 มก. ( L-1 ) BAP 0.1 และ 1.0 มก. L-1 )