After การปลูกเชื้อ it took about 30

After การปลูกเชื้อ it took about 30 h before the fungus started growing actively. During cultivation, the hemicellulose สารละลาย was added in small batches, and after
95 h of cultivation the feeds were changed to cellulosic hydrolyzate. During the

cultivation, in total 236 g of hemicellulose and 484 g cellulose hydrolyzate was
5 added. Part of the sugars added was left unutilized at the end of the fermentation. At

167 h, when the cultivation ended, there was 16 g/l of biomass, of which 43 % ไลปิด (Figure 1 ). It could be concluded that producing microbial oil from wheat straw hemicellulose and cellulose sugars was successful. In the beginning of the fermentation the phenolic concentration was 4 g/l, and in the end 6 g/l (a calculation
10 based on original amount of hemicellulose ). Therefore, it could also be stated that fungal growth and efficient ไลปิด production was achieved in spite of high inhibitor concentrations.




Example 4 - The growth of contaminating bacteria on phenolic containing
15 ประเภทเฮมิเซลลูโลสสารละลาย

The experiments were done with the bacteria Bacillus subiltls and Pseudomonas fluorescens. The medium base components are presented in the table 6. All of them contained these basic nutrients, and สารประกอบฟีโนลิก containing hemicellulose สารละลาย so that the final concentration of phenolics was 0, 1, 2 and 3 g/l.
20 ออโตไฮโดรไลซิส liquid C (hemicellulose สารละลาย) was used in the cultivation and it contained 160 g/l sugars based on HPLC analysis, OW 460 g/l and 33 g/l phenolics
based on analysis with โฟลิน-ซิโอแคลตู method (Waterhouse, 2002).


Table 6: Composition of growth medium
Q/I glucose 20 malt extract 30 peptone 3
25
The medium was made using tap water.
The ออโตไฮโดรไลซิส liquid C (hemicellulose สารละลาย) was added in so that the concentration of phenolics was 0, 1, 2 and 3 g/l. After this the pH of the media was adjusted to 6.5 using 3 M NaOH. The medium was distributed to 50 ml batches into

30 250 ml erlenmayer flasks. The media was sterilized in autoclave 121 C 15 min. After cooling down, each flask was ได้รับการปลูกเชื้อ using 0,5 ml of pre-cultured bacteria
สารแขวนลอย. For each concentration, parallel cultivations were made. The cultivations were incubated in 250 rpm shaking, at 28 C for 5 days. The growth was observed daily with a microscope, and in the end of the cultivation the glucose contents were determined. The sugar concentration samples were made by
5 centrifuging the biomass down, diluting the supernatant by 10 with distilled water and HPLC analysis was made.


Results:

Based on microscope observations it could be seen that both bacteria grew only in

10 those flasks which contained no phenolics. At the end of the cultivation only in the flasks that contained no phenolics all sugars were consumed. In flasks that contained phenolics, the same amount of sugars as in the beginning was present. It could be concluded that even in small concentrations the สารประกอบฟีโนลิกs inhibit efficiently the growth of many contaminating bacteria. It can be concluded that
15 growth of contaminating bacteria can be inhibited or prevented by using ไฮโดรไลเซตประเภทลิกโนเซลลูโลสs containing inhibitory สารประกอบ, such as phenolic, สารประกอบ in concentrations which do not significantly inhibit growth of oleaginous yeast and ราชนิดเส้นใย (examples 2, 3 and 6).



20 Example 5 - Controllingthe contaminationswith the help of สารประกอบฟีโนลิกand quick heat treatment
The experiments were done using a ไลปิด producing fungal strain A.oryzae. From the sporulating fungus grown on PDA-plates a spore สารแขวนลอย was made by adding
12 ml of sterile water and the spores were scraped off with การปลูกเชื้อ loop to the

25 liquid. 0,5 ml of the spore สารแขวนลอย was used for each flask การปลูกเชื้อ. The medium composition is presented in table 9.
The phenolics containing liquid from ออโตไฮโดรไลซิส, ออโตไฮโดรไลซิส liquid A (hemicellulose สารละลาย), was added so that the final concentration in the media was
3,5 g/l. After this the pH of the media was adjusted to 6.5 using 3 M NaOH. The

30 medium was distributed to 50 ml batches into 250 ml erlenmayer flasks. The yeast extract here was used as a source for usual contaminating microbes.





Table 9: Growth medium composition
g/l
Glucose
Phenolics 40
3,5
Yeast extract 5
(NH4)2S04 2
MgS04 * 7 H20 1,0
K2HP04 0,5
KH2P04 1,0
CaCl2* 2H20 0,2

Half of the media prepared this way was quickly heated to 80 C, and then cooled down. For the rest of the media, no heat treatment was made. Half of the each
5 differently treated flasks were ได้รับการปลูกเชื้อ with 0,5 ml

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

หลังจากการปลูกเชื้อ ก็เอาประมาณ 30 ชั่วโมงก่อนที่เชื้อราเริ่มต้นเติบโตแข็งขัน ในระหว่างการเพาะปลูก hemicellulose สารละลายเพิ่ม ใน batches ขนาดเล็ก และหลังจากชม.ที่ 95 ของการเพาะปลูกที่ตัวดึงข้อมูลถูกเปลี่ยนแปลงไป hydrolyzate ไลต์ ในระหว่างการเพาะปลูก ในรวม 236 กรัมของ hemicellulose และ 484 g hydrolyzate เซลลูโลสเป็น5 เพิ่ม ส่วนของน้ำตาลเพิ่มถูกซ้ายวงเงินเมื่อสิ้นสุดการหมัก ที่167 h เมื่อสิ้นสุดการเพาะปลูก มี 16 g/l ของชีวมวล ของที่ไลปิด 43% (รูปที่ 1) อาจสรุปว่า การผลิตน้ำมันจุลินทรีย์จากฟางข้าวสาลีน้ำตาลเซลลูโลสและ hemicellulose ประสบความสำเร็จ ในการเริ่มต้นของการหมัก ความเข้มข้นฟีนอเป็น 4 g/l และ ในสุด 6 g/l (การคำนวณ10 ตามจำนวนเดิมของ hemicellulose) ดังนั้น มันอาจจะระบุไว้ว่า การเจริญเติบโตของเชื้อรา และไลปิดมีประสิทธิภาพการผลิตสำเร็จทั้ง ๆ ที่ มีความเข้มข้นสูงยับยั้งตัวอย่าง 4 - การเจริญเติบโตของแบคทีเรียที่ประกอบด้วยฟีนอ15 ประเภทเฮมิเซลลูโลสสารละลายการทดลองที่ถูกทำกับ subiltls แบคทีเรีย Bacillus และ Pseudomonas fluorescens คอมโพเนนต์พื้นฐานปานกลางจะแสดงในตาราง 6 พวกเขาทั้งหมดประกอบด้วยสารอาหารพื้นฐานเหล่านี้ และสารประกอบฟีโนลิกที่ประกอบด้วย hemicellulose สารละลายเพื่อให้ความเข้มข้นสุดท้ายของ phenolics เป็น 0, 1, 2 และ 3 แยกของเหลวออโตไฮโดรไลซิส 20 C (hemicellulose สารละลาย) มาใช้ในการเพาะปลูก และประกอบด้วยน้ำตาล 160 g/l ที่อิงวิเคราะห์ HPLC, phenolics 460 g/l และ 33 แยกเดียวคะแนนจากการวิเคราะห์ ด้วยวิธีโฟลินซิโอแคลตู (คิงทาวน์ 2002)ตารางที่ 6: องค์ประกอบของการเจริญเติบโตปานกลางQ / ฉันกลูโคส 20 มอลต์สกัด 30 peptone 325ทำสื่อโดยใช้น้ำประปาของเหลวออโตไฮโดรไลซิส C (hemicellulose สารละลาย) ถูกเพิ่มในเพื่อให้ความเข้มข้นของ phenolics เป็น 0, 1, 2 และ 3 แยก หลังจากนี้ ค่า pH ของสื่อถูกปรับให้ 6.5 ใช้ 3 M NaOH กระจายสื่อไปยังชุด 50 ml ลงในขวด 30 ใน erlenmayer 250 ml สื่อการฆ่าเชื้อในหม้อนึ่งความดัน 121 C 15 นาที หลังจากเย็นลง แต่ละขวดก็ใช้ 0,5 ได้รับการปลูกเชื้อ ml ของแบคทีเรียก่อนล้างสารแขวนลอย สำหรับแต่ละความเข้มข้น ขนาน cultivations ทำ Cultivations ที่ได้รับการกกใน 250 rpm สั่น 28 c เป็นเวลา 5 วัน สังเกตการเจริญเติบโต ด้วยกล้องจุลทรรศน์ทุกวัน และกำหนดเนื้อหากลูโคสในสุดการเพาะปลูก ตัวอย่างความเข้มข้นของน้ำตาลทำโดยเจือจาง supernatant ที่ 10 ด้วยน้ำกลั่นและวิเคราะห์ HPLC ทำ 5 สิ่งชีวมวลลงผลลัพธ์:อิงจากกล้องจุลทรรศน์ที่สังเกตเห็นว่า แบคทีเรียทั้งสองเติบโตเฉพาะใน10 those flasks which contained no phenolics. At the end of the cultivation only in the flasks that contained no phenolics all sugars were consumed. In flasks that contained phenolics, the same amount of sugars as in the beginning was present. It could be concluded that even in small concentrations the สารประกอบฟีโนลิกs inhibit efficiently the growth of many contaminating bacteria. It can be concluded that15 growth of contaminating bacteria can be inhibited or prevented by using ไฮโดรไลเซตประเภทลิกโนเซลลูโลสs containing inhibitory สารประกอบ, such as phenolic, สารประกอบ in concentrations which do not significantly inhibit growth of oleaginous yeast and ราชนิดเส้นใย (examples 2, 3 and 6).20 Example 5 - Controllingthe contaminationswith the help of สารประกอบฟีโนลิกand quick heat treatmentThe experiments were done using a ไลปิด producing fungal strain A.oryzae. From the sporulating fungus grown on PDA-plates a spore สารแขวนลอย was made by adding12 ml of sterile water and the spores were scraped off with การปลูกเชื้อ loop to the25 liquid. 0,5 ml of the spore สารแขวนลอย was used for each flask การปลูกเชื้อ. The medium composition is presented in table 9.The phenolics containing liquid from ออโตไฮโดรไลซิส, ออโตไฮโดรไลซิส liquid A (hemicellulose สารละลาย), was added so that the final concentration in the media was
3,5 g/l. After this the pH of the media was adjusted to 6.5 using 3 M NaOH. The

30 medium was distributed to 50 ml batches into 250 ml erlenmayer flasks. The yeast extract here was used as a source for usual contaminating microbes.





Table 9: Growth medium composition
g/l
Glucose
Phenolics 40
3,5
Yeast extract 5
(NH4)2S04 2
MgS04 * 7 H20 1,0
K2HP04 0,5
KH2P04 1,0
CaCl2* 2H20 0,2

Half of the media prepared this way was quickly heated to 80 C, and then cooled down. For the rest of the media, no heat treatment was made. Half of the each
5 differently treated flasks were ได้รับการปลูกเชื้อ with 0,5 ml

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

หลังจากการปลูกเชื้อมันต้องใช้เวลาประมาณ 30 ชั่วโมงก่อนที่จะเริ่มเชื้อราเจริญเติบโตอย่างแข็งขัน ในช่วงการเพาะปลูกในสารละลายเฮมิเซลลูโลสถูกเพิ่มเข้ามาใน batches ขนาดเล็กและหลังจาก
95 ชั่วโมงของการเพาะปลูกฟีดมีการเปลี่ยนแปลงการไฮโดรไลเซลลูโลส ในช่วงการเพาะปลูกรวม 236 กรัมของเฮมิเซลลูโลสและ 484 กรัมเซลลูโลสไฮโดรไลถูก5 เพิ่ม ส่วนหนึ่งของน้ำตาลที่เพิ่มถูกทิ้งไว้ยังไม่ได้ใช้ในตอนท้ายของหมัก ที่167 H เมื่อการเพาะปลูกสิ้นสุดวันที่มี 16 g / l ชีวมวลซึ่ง 43% ไลปิด (รูปที่ 1) มันอาจจะสรุปได้ว่าการผลิตน้ำมันของจุลินทรีย์จากฟางข้าวสาลีและเฮมิเซลลูโลสเซลลูโลสน้ำตาลก็ประสบความสำเร็จ ในการเริ่มต้นของการหมักที่เข้มข้นของฟีนอล 4 กรัม / ลิตรและในท้าย 6 g / l (คำนวณ10 ขึ้นอยู่กับจำนวนเงินที่เดิมของเฮมิเซลลูโลส) ดังนั้นจึงอาจจะมีการระบุว่าการเจริญเติบโตของเชื้อราและมีประสิทธิภาพไลปิดการผลิตก็ประสบความสำเร็จทั้งๆที่มีความเข้มข้นของสารยับยั้งสูง. ตัวอย่างที่ 4 - การเจริญเติบโตของเชื้อแบคทีเรียที่ปนเปื้อนในฟีนอลที่มี15 ประเภทเฮมิเซลลูโลสสารละลายการทดลองทำกับ subiltls แบคทีเรีย Bacillus และ Pseudomonas fluorescens กลางส่วนประกอบฐานถูกแสดงไว้ในตารางที่ 6 ทั้งหมดของพวกเขาที่มีสารอาหารพื้นฐานเหล่านี้และสารประกอบฟีโนลิกที่มีเฮมิเซลลูโลสเพื่อให้สารละลายความเข้มข้นสุดท้ายของฟีนอลเป็น 0, 1, 2 และ 3 g / l. 20 ออโต ไฮโดรไลซิสซีเหลว (เฮมิเซลลูโลสสารละลาย) ถูกนำมาใช้ในการเพาะปลูกและมันมี 160 กรัม / ลิตรน้ำตาลตามการวิเคราะห์ HPLC, OW 460 กรัม / ลิตรและ 33 g / l ฟีนอลจากการวิเคราะห์ด้วยโฟลิน - ซิโอ แคลตูวิธีการ (วอเตอร์เฮาส์, 2002). ตารางที่ 6: องค์ประกอบของการเจริญเติบโตปานกลางQ / ผมน้ำตาลกลูโคส 20 สารสกัดจากมอลต์ 30 เปปโตน 3 25 กลางที่ถูกสร้างขึ้นโดยใช้น้ำประปา. ออโตไฮโดรไลซิสของเหลว C (เฮมิเซลลูโลสสารละลาย) ถูกเพิ่มเข้ามาในเพื่อให้ความเข้มข้นของฟีนอลเป็น 0, 1, 2 และ 3 กรัม / ลิตร หลังจากนี้ค่า pH ของสื่อที่ถูกปรับ 6.5 ใช้ 3 M NaOH สื่อที่ได้รับการกระจายไปยัง 50 มล. สำหรับกระบวนการเข้า30 250 มลขวด erlenmayer สื่อได้รับการฆ่าเชื้อในหม้อนึ่งความดัน 121 C 15 นาที หลังจากที่เย็นลงในแต่ละขวดเป็นได้รับการปลูกเชื้อโดยใช้ 0.5 มล. ของแบคทีเรียก่อนเพาะเลี้ยงสารแขวนลอย สำหรับแต่ละความเข้มข้นของการเพาะปลูกแบบขนานที่ถูกสร้างขึ้น ถูกบ่มเพาะปลูกใน 250 รอบต่อนาทีสั่นที่ 28 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 5 วัน การเจริญเติบโตก็สังเกตเห็นทุกวันด้วยกล้องจุลทรรศน์และในท้ายที่สุดของการเพาะปลูกเนื้อหากลูโคสได้รับการพิจารณา กลุ่มตัวอย่างที่ความเข้มข้นของน้ำตาลที่ทำโดย5 เหวี่ยงชีวมวลลงเจือจางสารละลายโดย 10 ด้วยน้ำและ HPLC วิเคราะห์กลั่นได้ทำ. ผล: ตามข้อสังเกตกล้องจุลทรรศน์จะเห็นได้ว่าแบคทีเรียทั้งสองเติบโตเฉพาะใน10 ขวดเหล่านั้นซึ่งมีอยู่ไม่มีฟีนอล . ในตอนท้ายของการเพาะปลูกได้เฉพาะในขวดที่มีฟีนอลไม่มีน้ำตาลทั้งหมดถูกบริโภค ในขวดที่มีฟีนอล, ปริมาณที่เท่ากันของน้ำตาลเช่นเดียวกับในการเริ่มต้นเป็นปัจจุบัน มันอาจจะสรุปได้ว่าแม้ในความเข้มข้นขนาดเล็กสารประกอบฟีโนลิก s อย่างมีประสิทธิภาพยับยั้งการเจริญเติบโตของเชื้อแบคทีเรียที่ปนเปื้อนจำนวนมาก มันสามารถสรุปได้ว่า15 การเจริญเติบโตของเชื้อแบคทีเรียที่ปนเปื้อนสามารถยับยั้งหรือป้องกันได้โดยการใช้ไฮโดรไลเซตประเภทลิกโน เซลลูโลส s ที่มีการยับยั้งสารประกอบเช่นฟีนอลสารประกอบในระดับความเข้มข้นที่ไม่ได้มีนัยสำคัญยับยั้งการเจริญเติบโตของยีสต์น้ำมันและราชนิด เส้นใย (ตัวอย่าง 2, 3 และ 6). 20 ตัวอย่างที่ 5 - Controllingthe contaminationswith ความช่วยเหลือของสารประกอบฟีโนลิกและการรักษาความร้อนอย่างรวดเร็วการทดลองกระทำโดยใช้ไลปิดการผลิตสายพันธุ์เชื้อรา A.oryzae จากเชื้อรา sporulating ที่ปลูกบน PDA แผ่นสปอร์สารแขวนลอยที่ถูกสร้างขึ้นโดยการเพิ่ม12 มล. น้ำหมันและสปอร์ที่ถูกคัดลอกออกไปพร้อมกับการปลูกเชื้อห่วงไป25 ของเหลว 0.5 มล. ของสปอร์สารแขวนลอยที่ใช้สำหรับขวดแต่ละการปลูกเชื้อ องค์ประกอบกลางจะนำเสนอในตารางที่ 9 ฟีนอลที่มีของเหลวจากออโตไฮโดรไลซิส, ออโตไฮโดรไลซิสของเหลว (เฮมิเซลลูโลสสารละลาย) ถูกเพิ่มเข้ามาเพื่อให้ความเข้มข้นสุดท้ายในสื่อเป็น3,5 g / l หลังจากนี้ค่า pH ของสื่อที่ถูกปรับ 6.5 ใช้ 3 M NaOH 30 กลางถูกกระจายไปยัง 50 มล. สำหรับกระบวนการออกเป็น 250 มล. ขวด erlenmayer สารสกัดจากยีสต์ที่นี่ได้ถูกใช้เป็นแหล่งข้อมูลสำหรับจุลินทรีย์ปนเปื้อนตามปกติ. ตารางที่ 9: การเจริญเติบโตองค์ประกอบกลางg / l กลูโคสPhenolics 40 3,5 ยีสต์สารสกัดจาก 5 (NH4) 2 2S04 MgS04 * 7 H20 1,0 K2HP04 0,5 KH2P04 1 , 0 CaCl2 * 2H20 0,2 ครึ่งหนึ่งของสื่อที่จัดทำวิธีนี้อย่างรวดเร็วความร้อนถึง 80 องศาเซลเซียสและจากนั้นเย็นลง สำหรับส่วนที่เหลือของสื่อที่ไม่มีการรักษาความร้อนที่ถูกสร้างขึ้น ครึ่งหนึ่งของแต่ละ5 ขวดถือว่าแตกต่างกันอยู่ได้รับการปลูกเชื้อด้วย 0.5 มล.