rooting media. The rooted plantlets

rooting media. The rooted plantlets were transplanted into
nursery pots (6 9 6 cm, upper edge diameter 9 height)
containing peat and vermiculite (1:1 volume), incubated in
greenhouse for 1 week and then transplanted in the field.
These plants were available for softwood cuttings collected
the next growing season.
Rooting of softwood cuttings collected from tissue culture
rejuvenated MX (R) and M26 (R) were tested on July, 2013.
Softwood cuttings from apomictic seedlings ofMX(J), adult
tree canopy MX (A) and M26 (A) were used as biological
control. The chemical treatments were 3,000 mg L-1 IBA,
3,000 mg L-1 IBA ? 50 mM H2O2 and distilled water
(control).
The levels of IAA, gibberellins (GA3), abscisic acid (ABA),
Zeatin in young leaves of in vitro shoots were assayed by using
high performance liquid chromatography (HPLC) according to
the protocols described by Zhang et al. (2008). Fresh sample
(0.5 g) was ground using a mortar and pestle. Subsequently,
2.5 ml of 100 % acetonitrile containing 1 mmol of butylated
hydroxytoluene (BHT) was added to the extraction buffer.
Before injection into the HPLC, the samples were passed
through a 0.45 lm microporous membrane. The elution gradient
is shown in Table S1. The HPLC conditions were as
follows: Waters 600HPLCpump(Milford,MA,USA);Waters
2,487 ultraviolet detector with which IAA,ABAandGA3 were
detected at 280 nm, and Zeatin at 267 nm. An inertsil ODS-3
chromatography column (250 9 4.6 mm, 5 lm particle size)
was used with column temperature set at 30 C. Samples
(30 ll) were injected with an autosampler (Waters 2,707). The
standards were IAA (I2886), ABA (A1049), Zeatin (Z0164),
and GA3 (G7645) (Sigma Chemical Co, St, Louis, MO, USA).
Endogenous phytohormones were quantified by the linear
regression between the peak area and the concentration of
external standards.
For gene relative expression assay, the total RNA was
extracted using a modified cetyltrimethylam-monium bromide
(CTAB) method (Zhang et al. 2005), and the DNA was
digested at 37 C for 30 min using DNaseI (Takara, Dalian,
China) according to the manufacturer’s instructions. The
concentration of each RNA sample was determined using a
spectrophotometer (Thermo Scientific, Nanodrop 2000). To
obtain the first-strand cDNA, 1 lg of each DNA-free RNA
sample was used for reverse transcription with the M-MLV
reverse transcriptase (Takara). The quantitative measurement
of the gene expression was performed using the cDNA
samples with an AB7500 Real-time PCR System and the
SYBR Green fluorescence dye (Takara) (Li et al. 2012).
The sequences of all of the genes were obtained from
the apple genome web-site (http://genomics.research.
iasma.it/) via BLAST (basic localalignment search tool)
service. Based on the BLASTP results for those proteins
encoded by the examined genes in NCBI (http://www.ncbi.
nlm.nih.gov/), primers were designed to avoid the

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ขจัดสื่อ Plantlets รากถูกปลูกเป็นเรือนเพาะชำหม้อ (6 9 6 ซม. ความสูงเส้นผ่าศูนย์กลาง 9 ขอบด้านบน)ประกอบด้วยพรุและเวอร์มิคูไลท์ (1:1 ปริมาตร), ได้รับการกกในเรือนกระจกสำหรับ 1 สัปดาห์ และจากนั้น มาในฟิลด์พืชเหล่านี้ถูกใช้สำหรับตัดไม้เนื้ออ่อนที่เก็บรวบรวมฤดูกาลปลูกถัดไปรากของไม้เนื้ออ่อนตัดรวบรวมจากเนื้อเยื่อสดชื่น MX (R) และ M26 (R) ได้รับการทดสอบบนกรกฎาคม 2013ตัดไม้เนื้ออ่อนจากต้นกล้า apomictic ofMX(J) ผู้ใหญ่ต้นไม้หลังคา MX (A) และ M26 (A) ใช้เป็นเชื้อการควบคุม เคมีบำบัดได้ 3,000 มิลลิกรัม L-1 IBA3,000 มิลลิกรัม L-1 IBA 50 มม. H2O2 และน้ำกลั่น(ควบคุม)ระดับของ IAA, gibberellins (GA3), กรดแอบไซซิก (ABA),ซีเอตินในใบอ่อนของหน่อในหลอดทดลองถูก assayed โดยใช้ประสิทธิภาพสูงของเหลว chromatography (HPLC) ตามโปรโตคอลที่อธิบายโดย Zhang et al. (2008) ตัวอย่างสด(0.5 กรัม) ถูกบดโดยใช้ครกและสาก ต่อมา2.5 มิลลิลิตร acetonitrile 100% ประกอบด้วย 1 mmol ของ butylatedhydroxytoluene (บาท) ถูกเพิ่มไปยังบัฟเฟอร์สกัดก่อนที่จะฉีดเข้า HPLC ตัวอย่างถูกส่งผ่านผ่านเยื่อพรุน lm 0.45 การไล่ระดับสีชะแสดงในตาราง S1 สภาพการ HPLC ก็เป็นต่อไปนี้: น้ำ 600HPLCpump(Milford,MA,USA) น้ำทะเลใสการตรวจจับรังสีอัลตราไวโอเลต 2,487 กับ IAA ซึ่ง ABAandGA3 ได้ตรวจพบที่ 280 nm ซีเอตินที่ 267 nm Inertsil เป็น ODS-3คอลัมน์ chromatography (250 9 4.6 มม. ขนาดอนุภาคของ lm ที่ 5)ใช้ตั้งตัวอย่าง 30 เซลเซียสอุณหภูมิของคอลัมน์(30 ll) ถูกฉีด ด้วยการสามารถ(ได้น้ำ 2,707) การมาตรฐาน IAA (I2886), ABA (A1049) ซีเอติน (Z0164),และ GA3 (G7645) (บริษัทเคมี Sigma, St, Louis, MO สหรัฐอเมริกา)Phytohormones ภายนอกถูกวัด โดยเชิงเส้นถดถอยระหว่างพื้นที่สูงสุดและความเข้มข้นของมาตรฐานภายนอกสำหรับยีนญาตินิพจน์ทดสอบ RNA รวมเป็นสกัดโดยใช้โบรไมด์แก้ไข cetyltrimethylam-moniumวิธี (CTAB) (Zhang et al. 2005), และดีเอ็นเอย่อยที่ 37 C 30 นาทีโดยใช้ DNaseI (Takara ต้าเหลียนจีน) ตามคำแนะนำของผู้ผลิต การความเข้มข้นของ RNA แต่ละอย่างกำหนดโดยใช้การspectrophotometer (วิทยาศาสตร์เทอร์โม Nanodrop 2000) ถึงขอสาระแรก cDNA, lg 1 ของ RNA แต่ละดีเอ็นเอฟรีตัวอย่างใช้สำหรับถอดรหัสย้อนกลับกับ M-MLVปเทส (Takara) การวัดเชิงปริมาณยีน นิพจน์ถูกดำเนินการโดยใช้ cDNAตัวอย่างระบบ PCR เรี AB7500 และสีเรืองแสงสีเขียว SYBR (Takara) (Li et al. 2012)ลำดับของยีนทั้งหมดได้รับมาจากเว็บแอปเปิ้ลพันธุไซต์ (http://genomics.researchiasma.it/) ผ่านระเบิด (เครื่องมือค้นหา localalignment พื้นฐาน)บริการ ตามผลลัพธ์ BLASTP สำหรับโปรตีนเหล่านั้นการเข้ารหัส โดยการตรวจสอบยีนใน NCBI (http://www.ncbinlm.nih.gov/), ไพรเมอร์ออกแบบมาเพื่อหลีกเลี่ยงการ

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

สื่อราก ต้นกล้าที่ฝังรากถูกปลูกลงใน
กระถาง (6 9 6 ซม. ขนาดเส้นผ่าศูนย์กลางขอบบน 9 สูง)
ที่มีพรุและดิน (1: 1 โดยปริมาตร) บ่มใน
. เรือนกระจกเป็นเวลา 1 สัปดาห์และปลูกแล้วในสาขา
พืชเหล่านี้มีอยู่สำหรับไม้เนื้ออ่อน ตัดเก็บรวบรวม
ฤดูการเจริญเติบโตต่อไป.
รากของกิ่งไม้เนื้ออ่อนที่เก็บได้จากการเพาะเลี้ยงเนื้อเยื่อ
พลังวังชา MX (R) และ M26 (R) ได้รับการทดสอบกรกฏาคม 2013
การตัดไม้เนื้ออ่อนจากต้นกล้า apomictic ofMX (ญ) ผู้ใหญ่
หลังคาต้นไม้ MX (A) และ M26 (A) ถูกนำมาใช้เป็นทางชีวภาพ
ควบคุม การรักษาทางเคมีเป็น 3,000 มก. L-1 IBA,
3,000 มก. L-1 IBA? ขนาด 50 มม H2O2 และน้ำกลั่น
(Control).
ระดับของ IAA, เรลลิ (GA3) กรดแอบไซซิก (ABA)
ซีเอตินในใบอ่อนในหลอดทดลองหน่อและนำไปวิเคราะห์โดยใช้
ที่มีประสิทธิภาพสูงของเหลว chromatography (HPLC) ตาม
โปรโตคอลที่อธิบาย โดย Zhang et al, (2008) ตัวอย่างสด
(0.5 กรัม) คือพื้นดินโดยใช้ครกและสาก ต่อมา
2.5 มล. ของแท้ 100% มี acetonitrile 1 มิลลิโมลของ butylated
hydroxytoluene (บาท) ถูกบันทึกอยู่ในบัฟเฟอร์สกัด.
ก่อนที่จะฉีดเข้าไปใน HPLC ได้ตัวอย่างที่ถูกส่งผ่านไป
ผ่านเมมเบรน 0.45 LM พรุน ลาดชะ
จะแสดงในตาราง S1 เงื่อนไข HPLC พบว่า
ดังนี้ Waters 600HPLCpump (ฟอร์ด, MA, USA); Waters
ตรวจจับ 2,487 อัลตราไวโอเลตที่ IAA, ABAandGA3 ถูก
ตรวจพบที่ 280 นาโนเมตรและมีซีเอตินที่ 267 นาโนเมตร inertsil ODS-3
คอลัมน์โครมาโต (250 9 4.6 มม 5 LM ขนาดอนุภาค)
ถูกนำมาใช้กับอุณหภูมิคอลัมน์ตั้งไว้ที่ 30 องศาเซลเซียส ตัวอย่าง
(30 LL) ถูกฉีดด้วยการฉีดตัวอย่างอัตโนมัติ (น้ำ 2,707)
มาตรฐานเป็น IAA (I2886) ABA (A1049) ซีเอติน (Z0164)
และ GA3 (G7645) (Sigma Chemical Co, เซนต์หลุยส์, MO, USA).
phytohormones ภายนอกถูกวัดโดยการเชิงเส้น
ถดถอยระหว่างพื้นที่จุดสูงสุดและ ความเข้มข้นของ
มาตรฐานภายนอก.
ยีนญาติทดสอบการแสดงออกที่ RNA ทั้งหมดถูก
สกัดโดยใช้โบรไมด์การแก้ไข cetyltrimethylam-monium
(CTAB) วิธีการ (Zhang et al. 2005) และดีเอ็นเอที่ถูก
ย่อยที่ 37 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 30 นาทีโดยใช้ DNaseI (Takara ต้าเหลียน
ประเทศจีน) ตามคำแนะนำของผู้ผลิต
ความเข้มข้นของกลุ่มตัวอย่าง RNA แต่ละคนถูกกำหนดโดยใช้
spectrophotometer (Thermo Scientific, Nanodrop 2000) ที่จะ
ได้รับเป็นครั้งแรกที่ Strand cDNA 1 LG ของแต่ละ RNA DNA ฟรี
ตัวอย่างที่ใช้ในการถอดรหัสแบบย้อนกลับที่มี M-MLV
transcriptase ย้อนกลับ (Takara) การวัดปริมาณ
การแสดงออกของยีนที่ถูกดำเนินการโดยใช้ยีน
ตัวอย่างกับ AB7500 Real-time PCR ระบบและ
สีย้อม SYBR สีเขียวเรืองแสง (Takara) (Li et al. 2012).
ลำดับทั้งหมดของยีนที่ได้รับจาก
แอปเปิ้ล จีโนมของเว็บไซต์ (http:. //genomics.research
iasma.it/) ผ่าน BLAST (ขั้นพื้นฐานเครื่องมือในการค้นหา localalignment)
บริการ บนพื้นฐานของผล BLASTP สำหรับโปรตีนเหล่านั้น
เข้ารหัสโดยยีนตรวจสอบใน NCBI (http:. //www.ncbi
nlm.nih.gov/) ไพรเมอร์ได้รับการออกแบบเพื่อหลีกเลี่ยงการ