The observation that over-expressio

The observation that over-expression of G6PD leads to down- regulation of glucose response in GAL4-ChREBP activity, and knockdown of G6PD, a modest increase (Fig. 3), ruled out the involvement of pentose-phosphate pathway in PP2A-independent activation of ChREBP in 832/13 cells. Additionally, the pentose- phosphate pathway was known to be inactive in pancreatic islet b-cells [14]. This might have contributed to the susceptibility of these cells to oxidative stress for lack of supply of reducing equiv- alent, i.e., NADPH. In fact, the survival of INS-1 cells, from which 832/13 cells were derived, depends on the reducing agent 2-mercaptoethanol in the media [28]. Therefore, it is unlikely that the pentose-phosphate pathway plays a significant role in activa- tion of ChREBP in 832/13 cells and pancreatic islet b-cells.
Since glycolysis is the major pathway of glucose metabolism, it is important to determine if metabolites downstream of G-6-P are involved in transactivation of ChREBP in 832/13 cells. However, in our study, a glucose analogue, 2-DG, which can be directly phos- phorylated by hexokinase but not further metabolized through the glycolytic pathway, was found to dose-dependently activate the transcriptional activity of GAL4-ChREBP, an effect that can be negated by treatment with D-mannoheptulose (Fig. 4A). This find- ing, which is consistent with a previous report [20], strongly sug- gests that phosphorylation by hexokinase is sufficient for activation of ChREBP. Meanwhile, artificially increasing the glyco- lytic flux by over-expression of PFK1 and PFK2 actually decreased the glucose response of ChREBP (Fig. 4B); again, corroborating the conclusion that further metabolism through glycolytic path- way is not required for high glucose-induced ChREBP activation.
We have probed the major metabolic pathways downstream of G-6-P and found that they were not required for activating ChREBP in 832/13 cells. Although the other fates of G-6-P (glycogen and hexosamine synthesis) were examined only indirectly, G-6-P itself remains the most likely candidate especially with the evidence that there is a correlation between intracellular G-6-P levels with the ChREBP transcriptional activity under different glucose concen- trations (Fig. 2B). This interpretation is compatible with all existing data as well as those described in this report.

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

สังเกตว่าการแสดงออกมากกว่าของ G6PD นำไปสู่การลงกฎระเบียบของการตอบสนองต่อระดับน้ำตาลในกิจกรรม GAL4-ChREBP และล้มลงของ G6PD เพิ่มขึ้นเจียมเนื้อเจียมตัว (รูปที่. 3), ตัดออกไปมีส่วนร่วมของทางเดิน pentose ฟอสเฟตในการกระตุ้น PP2A อิสระ ของ ChREBP ในเซลล์ 832/13 นอกจากนี้ทางเดินฟอสเฟต pentose- เป็นที่รู้จักกันที่จะไม่ได้ใช้งานในเกาะตับอ่อนขเซลล์ [14] นี้อาจมีส่วนร่วมกับความไวของเซลล์เหล่านี้ความเครียดออกซิเดชันสำหรับการขาดของอุปทานของการลด equiv- alent คือ NADPH ในความเป็นจริงการอยู่รอดของ INS-1 เซลล์จากการที่เซลล์ 832/13 ได้มาขึ้นอยู่กับรีดิวซ์ 2 mercaptoethanol ในสื่อ [28] ดังนั้นจึงไม่น่าที่เดิน pentose ฟอสเฟตมีบทบาทสำคัญในการ activa- ของ ChREBP 832/13 ในเซลล์และเกาะตับอ่อนเซลล์ข.
ตั้งแต่ glycolysis เป็นทางเดินที่สำคัญของการเผาผลาญกลูโคสเป็นสิ่งสำคัญเพื่อตรวจสอบว่าสาร ล่อง G-6-P มีส่วนร่วมใน transactivation ของ ChREBP 832/13 ในเซลล์ อย่างไรก็ตามในการศึกษาของเรา, อนาล็อกกลูโคส 2 DG ซึ่งสามารถโดยตรง phos- phorylated โดย hexokinase แต่ไม่เผาผลาญเพิ่มเติมผ่านทางเดิน glycolytic ถูกพบว่ายา-dependently เปิดใช้งานกิจกรรมการถอดรหัสของ GAL4-ChREBP ผลว่า สามารถทำให้ไร้ผลโดยการรักษาด้วย D-mannoheptulose (รูป. 4A) ไอเอ็นจี find- นี้ซึ่งสอดคล้องกับรายงานก่อนหน้านี้ [20] ขอข้อเสนอแนะที่ gests phosphorylation โดย hexokinase เพียงพอสำหรับการใช้งานของ ChREBP ในขณะเดียวกันการเพิ่มเทียมฟลักซ์ glyco- lytic กว่าการแสดงออกของ PFK1 และ PFK2 จริงลดลงการตอบสนองของกลูโคส ChREBP (รูปที่ 4B.); อีกครั้งยืนยันข้อสรุปว่าการเผาผลาญอาหารเพิ่มเติมผ่านทาง glycolytic path- ไม่จำเป็นต้องใช้สำหรับการเปิดใช้ ChREBP กลูโคสที่เกิดขึ้นสูง.
เราได้ตรวจสอบเส้นทางการเผาผลาญอาหารที่สำคัญต่อเนื่องของ G-6-P และพบว่าพวกเขาไม่จำเป็นสำหรับการใช้งานใน ChREBP 832 / 13 เซลล์ แม้ว่าชะตากรรมอื่น ๆ ของ G-6-P (ไกลโคเจนและการสังเคราะห์ hexosamine) ได้รับการตรวจสอบเฉพาะทางอ้อม G-6-P ตัวเองยังคงมีแนวโน้มที่ผู้สมัครมากที่สุดโดยเฉพาะอย่างยิ่งที่มีหลักฐานว่ามีความสัมพันธ์ระหว่างระดับเซลล์ G-6-P กับ กิจกรรมการถอดรหัส ChREBP ภายใต้ความเข้มข้นของน้ำตาลกลูโคสที่แตกต่างกัน trations (รูป. 2B) การตีความนี้สามารถทำงานร่วมกับข้อมูลที่มีอยู่ทั้งหมดเช่นเดียวกับที่อธิบายไว้ในรายงานฉบับนี้

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

สังเกตว่าสีหน้าของ G6PD นำไปสู่ลง - ระเบียบของการตอบสนองกลูโคสในกิจกรรม chrebp gal4 และน็อคดาวน์ของ G6PD , เพิ่มขึ้นเจียมเนื้อเจียมตัว ( รูปที่ 3 ) , ปกครองออกมีส่วนร่วมของวิถีเพนโตสฟอสเฟตในการเปิดใช้งานอิสระ pp2a ของ chrebp ใน 832 / 13 เซลล์ นอกจากนี้ นาคร - ทางเดินและรู้จักที่จะใช้งานในตับอ่อน Islet บี - [ 14 ]นี้อาจมีส่วนให้ความไวของเซลล์เหล่านี้ความเครียดออกซิเดชันสำหรับการขาดอุปทานของการลด equiv - alent ได้แก่ nadph . ในความเป็นจริงการอยู่รอดของ ins-1 เซลล์ ซึ่งเซลล์ที่ 301 / 13 ได้ ขึ้นอยู่กับปริมาณสารอย่างเดียวในสื่อ [ 28 ] ดังนั้นมันยากที่วิถีเพนโตสฟอสเฟตมีบทบาทสำคัญในแอ็คทิวา - tion ของ chrebp ใน 832 / 13 และบี - เซลล์ตับอ่อน Islet .
ตั้งแต่ไกลโคไลซิสคือเส้นทางหลักของการเผาผลาญกลูโคสเป็นสิ่งสำคัญที่จะตรวจสอบว่าสารปลายน้ำของ g-6-p เกี่ยวข้องใน transactivation ของ chrebp ใน 832 / 13 เซลล์ อย่างไรก็ตาม ในการศึกษาของเรา 2-dg กลูโคส , อนาล็อกซึ่งสามารถโดยตรง phos - phorylated โดย hexokinase แต่ไม่ต่อ metabolized ผ่านทางเดิน glycolytic พบว่าปริมาณ dependently เปิดกิจกรรมลอง gal4 chrebp , ผลที่สามารถทําได้โดยการรักษาด้วย d-mannoheptulose ( รูปที่ 4 ) นี้หา - ไอเอ็นจี ซึ่งสอดคล้องกับรายงานก่อนหน้านี้ [ 20 ]ขอซุก - gests ที่กรุงเทพมหานคร โดย hexokinase เพียงพอสำหรับการกระตุ้นของ chrebp . ขณะเดียวกัน เทียมเพิ่มไกลโค - เอนไซม์ฟลักซ์ โดยผ่านการแสดงออกของ pfk1 pfk2 จริงลดลงกลูโคสและการตอบสนองของ chrebp ( ภาพ 4B ) ; อีกครั้ง ยืนยันข้อสรุปที่ยังเผาผลาญผ่าน glycolytic เส้นทาง - ไม่จําเป็นสําหรับการ chrebp
กลูโคสสูง เปิดใช้งานเราได้ตรวจสอบหลักการเผาผลาญเซลล์ g-6-p ท้ายน้ำ และพบว่า พวกเขาไม่ต้องใช้ chrebp ใน 832 / 13 เซลล์ ถึงแม้ว่าโชคชะตาของ g-6-p ( ไกลโคเจนการสังเคราะห์ hexosamine ) โดยทำการศึกษาโดยอ้อมเท่านั้นg-6-p ของตัวเองยังคงมีแนวโน้มผู้สมัครโดยเฉพาะอย่างยิ่งที่มีหลักฐานว่ามีความสัมพันธ์ระหว่างระดับ g-6-p ภายในเซลล์กับ chrebp ลองกิจกรรมภายใต้ที่แตกต่างกัน concen กลูโคส - trations ( รูปที่ 2B ) การตีความนี้เข้ากันได้กับทุกข้อมูลที่มีอยู่เช่นเดียวกับที่อธิบายไว้ในรายงานนี้