2.11. ImmunomicroscopyNodules colle

2.11. Immunomicroscopy
Nodules collected at 7 and 14 dpi were processed for immunomicroscopy
as previously described (Fan et al., 2014). Briefly, sections
(70 nm thick) of nodule tissue were collected onto pre-coated gold
grids. Grids were blocked in blocking buffer, prepared with 2% nonfat
dry milk in TBST (0.3% Tris, 0.02% KCl, 0.8% NaCl, and 0.05% Tween), at
pH 7.4 for 1 h and then incubated in rabbit anti-nitrogenase antibody
(1:100 dilution). For anti-nitrogenase antibody assay, samples were incubated
in anti-rabbit IgG colloidal gold antibody, 10 nm (Sigma) (1:20
dilution). The nodule samples were stained with 0.5% uranyl acetate
and imaged using a Zeiss Libra 120 TEM (Carl Zeiss, Inc., Germany).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.11. Immunomicroscopy
Nodules ที่รวบรวมไว้ที่ 7 และ 14 dpi ถูกประมวลผลสำหรับ immunomicroscopy
ที่เคย อธิบายไว้ (แฟนร้อยเอ็ด al., 2014) สั้น ๆ ส่วน
(70 nm thick) ของเนื้อเยื่ออิทธิพลถูกรวบรวมไว้ไปก่อนเคลือบทอง
กริด บล็อกกริดในบัฟเฟอร์บล็อก พร้อม 2% nonfat
แห้งนมใน TBST (0.3% ทริสเรทติ้ง 0.02% KCl, 0.8% NaCl และ 0.05% Tween), ที่
ค่า pH 74 สำหรับ 1 h แล้ว incubated ในแอนติบอดี nitrogenase ป้องกันกระต่าย
(เจือจาง 1: 100) มี incubated ตัวอย่างสำหรับทดสอบแอนติบอดีต้าน nitrogenase
ในกระต่ายป้องกัน IgG colloidal ทองแอนติบอดี 10 nm (ซิกมา) (1:20
เจือจาง) ตัวอย่างอิทธิพลถูกสี ด้วย 0.5% uranyl acetate
และ imaged ใช้เป็น Zeiss ตุล 120 ยการ (Carl Zeiss, Inc. เยอรมนี)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.11 Immunomicroscopy
Nodules เก็บที่ 7 และ 14 นิ้วที่ถูกประมวลผลสำหรับ immunomicroscopy
ตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ (พัดลม et al., 2014) สั้น ๆ ส่วน
(70 นาโนเมตรหนา) ของเนื้อเยื่อบวมถูกเก็บลงบนทองก่อนการเคลือบ
กริด กริดถูกบล็อกในบัฟเฟอร์การปิดกั้นพร้อมกับ 2% ไม่มีน้ำมัน
นมแห้งใน tbst (0.3% ทริส 0.02% โพแทสเซียมคลอไรด์ 0.8% โซเดียมคลอไรด์และ 0.05% Tween) ที่
pH 7.4 เป็นเวลา 1 ชั่วโมงจากนั้นบ่มในกระต่ายแอนติบอดีต่อต้านไนโตร
(1: 100 เจือจาง) สำหรับการทดสอบแอนติบอดีต่อต้านไนโตตัวอย่างถูกบ่ม
ในการต่อต้านกระต่าย IgG แอนติบอดีทองคอลลอยด์, 10 นาโนเมตร (ซิกม่า) (1:20
เจือจาง) ตัวอย่างตุ่มถูกย้อมด้วย 0.5% uranyl อะซิเตท
และการถ่ายภาพโดยใช้ Zeiss ราศีตุลย์ 120 TEM (Carl Zeiss, Inc, เยอรมนี)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.11 . immunomicroscopy
ปมเก็บที่ 7 และ 14 นิ้วถูกประมวลผลสำหรับ immunomicroscopy
ตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ ( พัดลม et al . , 2010 ) สั้น ๆ , ส่วน
( 70 nm หนา ) ของปมถูกเก็บลงบนทิชชู่ก่อนเคลือบทอง
กริด ตารางที่ถูกบล็อกในบล็อกบัฟเฟอร์เตรียมไว้ร้อยละ 2 นมไม่มีไขมัน
แห้ง ใน tbst ( 0.3% โดย 0.02 เปอร์เซ็นต์ NaCl KCl 0.8% และ 0.05 % น ) ที่ pH 7
.4 เป็นเวลา 1 ชั่วโมง จากนั้นทำการต่อต้านไนโตรจีเนสในกระต่าย (
( 100 เจือจาง ) สำหรับการทดสอบแอนติบอดีต่อต้านไนโตรจีเนส ตัวอย่าง บ่ม
ในกระต่าย Colloidal Gold แอนติบอดี IgG anti 10 nm ( ซิกม่า ) ( 1 : 20
เจือจาง ) ส่วนปมจำนวนเปื้อน 0.5% ยูเรนิลอะซิเตตและใช้ Zeiss ราศีตุลย์อื่นๆ
120 TEM ( Carl Zeiss ( เยอรมนี )