MATERIALS AND METHODSS. suis strain

MATERIALS AND METHODS
S. suis strains and growth conditions. Encapsulated S. suis type 2 strains
P1/7 (45) and 89-1591 (46), isolated from pigs with meningitis in Europe
(United Kingdom) and North America (Canada), respectively, were used
for experimental infections. A nonencapsulated cpsF mutant derived
from P1/7 (5) and M2, derived from 89-1591 (46), were used as the coating
for enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) evaluation of the
noncapsular, mainly protein-specific Ab response (see below). Bacteria
were grown as previously described (47). Briefly, bacteria were grown
overnight onto sheep blood agar plates at 37°C, and isolated colonies were
cultured in 5ml of Todd-Hewitt broth (THB [Becton Dickinson]) for 8 h
at 37°C. Then, 10 l of 1/1,000 dilutions of 8-h cultures were transferred
into 30 ml of THB and incubated for 16 h at 37°C. Stationary-phase
bacteria were washed in phosphate-buffered saline (PBS [pH 7.3]). The
bacterial pellet was then resuspended in vehicle solution and adjusted to
the desired concentrations. Aliquots of the final bacterial suspension were
plated using an Autoplate 4000 automated spiral plater (Spiral Biotech)
onto sheep blood agar plates, and colonies were accurately counted after
overnight incubation at 37°C.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

วัสดุและวิธีการสายพันธุ์ S. suis และสภาพการเจริญเติบโต นึ้ S. suis ชนิด 2 สายพันธุ์89-1591 (46), แยกได้จากสุกรที่มีเยื่อหุ้มสมองอักเสบในยุโรปและ P1 ชั่วโมง (45)(ไทย) และทวีปอเมริกาเหนือ (แคนาดา), ตามลำดับ ใช้ทดลองติดเชื้อ Mutant nonencapsulated cpsF มาจาก M2 มาจาก 89-1591 (46), และ P1 ชั่วโมง (5) ถูกใช้เป็นการเคลือบสำหรับลิงค์เอนไซม์ immunosorbent assay (ELISA) ประเมินผลการnoncapsular ส่วนใหญ่เป็นโปรตีนเฉพาะ Ab การตอบสนอง (ดูด้านล่าง) แบคทีเรียที่ปลูกเป็นที่เคยอธิบายไว้ (47) สั้น ๆ แบคทีเรียเติบโตค้างคืนบนแกะแผ่นเลือดอาหารที่ 37° C และอาณานิคมแยกก็เพาะเลี้ยงในน้ำซุป Hewitt ทอดด์ (บาท [ดิกคินสัน Becton]) สำหรับ 8 ชั่วโมง 5 มล.ที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียส แล้ว ถ่ายโอน 1/1,000 dilutions วัฒนธรรม 8-h l 10ใน ml 30 บาท และได้รับการกกที่ 37 องศาเซลเซียส 16 ชั่วโมง ขั้นตอนการเขียนแบคทีเรียถูกล้างในน้ำเกลือฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (PBS [ค่า pH 7.3]) การเม็ดแบคทีเรียแล้ว resuspended ในรถ และปรับให้ความเข้มข้นที่ต้องการ Aliquots ระงับแบคทีเรียสุดท้ายได้ชุบใช้เป็น plater เกลียว 4000 Autoplate อัตโนมัติ (เทคโนโลยีชีวภาพเกลียว)ลงบนอาหารเลือดแกะ แผ่น และอาณานิคมนับอย่างถูกต้องหลังจากข้ามคืนบ่มที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียส

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

วัสดุและวิธีการ
เอส suis สายพันธุ์และสภาวะการเจริญเติบโต ห่อหุ้ม S. suis ชนิด 2 สายพันธุ์
P1 / 7 (45) และ 89-1591 (46) ที่แยกได้จากสุกรที่มีเยื่อหุ้มสมองอักเสบในยุโรป
(สหราชอาณาจักร) และอเมริกาเหนือ (แคนาดา) ตามลำดับถูกนำมาใช้
สำหรับการติดเชื้อจากการทดลอง nonencapsulated? cpsF กลายพันธุ์มา
จาก P1 / 7 (5) และ M2 มา 89-1591 (46) ถูกนำมาใช้เป็นสารเคลือบผิว
สำหรับเอนไซม์ที่เชื่อมโยงอิมมูโน assay การประเมินผล (ELISA) ของ
noncapsular ส่วนใหญ่เป็นโปรตีนเฉพาะการตอบสนอง Ab (ดูด้านล่าง) แบคทีเรีย
ที่ปลูกตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ (47) สั้น ๆ , แบคทีเรียปลูก
ค้างคืนบนแผ่นวุ้นเลือดแกะที่ 37 ° C และอาณานิคมบางแห่งเป็น
ที่เลี้ยงใน 5ml ของทอดด์-Hewitt น้ำซุป (บาท [Becton Dickinson]) เป็นเวลา 8 ชั่วโมง
ที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียส จากนั้น 10 ลิตร 1 / 1,000 เจือจางของวัฒนธรรม 8-H ถูกโอน
เข้าไปใน 30 มลบาทและบ่มเป็นเวลา 16 ชั่วโมงที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียส เครื่องเขียนเฟส
แบคทีเรียล้างในน้ำเกลือฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (พีบีเอส [ค่า pH 7.3])
เม็ดแบคทีเรียถูก resuspended แล้วในการแก้ปัญหาและยานพาหนะและการปรับให้
มีความเข้มข้นที่ต้องการ aliquots ของการระงับแบคทีเรียสุดท้ายถูก
ชุบใช้ Autoplate 4000 เกลียว Plater อัตโนมัติ (Spiral ไบโอเทค)
ลงบนแผ่นวุ้นเลือดแกะและอาณานิคมนับได้อย่างถูกต้องหลังจาก
การบ่มค้างคืนที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียส

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

วัสดุและวิธีการเอส ซุย สายพันธุ์ และภาวะการเจริญเติบโต 3 . ซุยชนิด 2 สายพันธุ์P1 / 7 ( 45 ) และ 89-1591 ( 46 ) ที่แยกได้จากสุกรกับประเทศในยุโรป( สหราชอาณาจักร ) และอเมริกาเหนือ ( แคนาดา ) , ตามลำดับ , ใช้สำหรับเชื้อที่ทดลอง เป็น nonencapsulated ได้มา cpsf กลายพันธุ์จาก P1 / 7 ( 5 ) และ M2 , ได้มาจาก 89-1591 ( 46 ) ที่ใช้เคลือบสำหรับ enzyme-linked immunosorbent assay ( ELISA ) การประเมินผลของnoncapsular ส่วนใหญ่โปรตีนตอบสนอง AB เฉพาะ ( ดูด้านล่าง ) แบคทีเรียปลูกตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ ( 47 ) สั้น ๆ , แบคทีเรียเติบโตค้างคืนบนแกะเลือดวุ้นแผ่น 37 ° C และแยกเป็นอาณานิคมที่เพาะเลี้ยงใน broth ( 5ml ของทอดด์ ฮิวเบคตอนดิกคินสัน ] บาท [ 8 H )ที่อุณหภูมิ 37 องศา จากนั้น 10 ลิตร 1 / 1000 วิธีการวัฒนธรรมประมาณคือใน 30 ml ของบาทและบ่มที่ 37 ° C เป็นเวลา 16 ชั่วโมง เครื่องเขียน เฟสแบคทีเรียถูกล้างเกลือฟอสเฟตบัฟเฟอร์ ( PBS [ pH 7.3 ] ) ที่เม็ดแบคทีเรียก็ resuspended ในยานพาหนะและปรับโซลูชั่นที่ต้องการความเข้มข้น เฉยๆของการระงับแบคทีเรีย สุดท้ายคือชุบใช้ autoplate 4000 เกลียวผู้พิมพ์อัตโนมัติ ( เกลียวเทคโนโลยีชีวภาพ )ลงแกะเลือดวุ้นแผ่น และอาณานิคมได้ถูกต้องนับหลังจากคืนบ่มที่ 37 องศา