2.3. Separation and identification

2.3. Separation and identification of phenolic acids
Phenolic extracts were resuspended in water and methanol
(1:1), and 20 lL aliquots injected into a chromatograph (Shimadzu,
Tokyo, Japan, CLASS-M10A) at a flow rate of 0.7 mL/min at 35 C.
The separation of the phenolic acids was accomplished using a
C18 column (4.6  250 mm, 5 lm, Discovery, USA) and a gradient
isocratic solvent consisting of methanol and acidified water (1% v/v
acetic acid) at a 20:80 ratio during 25 min, with UV detection at
280 nm until 15 min and 320 nm until 25 min. Phenolic acids were
identified by comparison of retention times and absorption
spectrum with different standards of phenols present in rice bran
(caffeic, chlorogenic, p-coumaric, ferulic, gallic, p-hydroxybenzoic,
protocatechuic, syringic and vanillin, obtained from Sigma–Aldrich,
USA) as described in the literature (Mira et al., 2008; Pourali
et al., 2010). The detection limit (LOD) was calculated by the background
noise signal (solution containing the solvents used in the
extraction of phenolic compounds) at 3:1. The determination limit
(LOQ) was established as three times the amount of the LOD
(Ribani, Bottoli, Collins, Jardim, & Melo, 2004).
2.4. Antioxidant activity of phenolic extracts
The phenolic antioxidant activity of the extracts was determined
according to the methods described by Rufino, Fernandes, Alves, and
Brito (2009), Sánchez-Moreno, Larrauri, and Saura-Calixto (1998)
and Brand-Wiliams, Cuvelier, & Berset, 1995 measured by the
reduction in free radical 1,1-diphenyl-2-picrihidrazil (DPPH). This
method is based on the transfer of electrons from one antioxidant
substance to a free radical, DPPH, which loses its purple colour upon
reduction, becoming yellow. Different concentrations of solutions of
ascorbic acid (0.01–0.1 mg/mL), ferulic acid (0.01–1 mg/ml), fermented
and unfermented rice bran (0.01–0.5 mg/mL) were tested,
so that it could get different values of DPPH at steady state covering
the widest range between 0 and 100%. In the dark, 0.2 mL of the
sample was added to 3.8 mL of 0.5 mM DPPH. The consumption of
DPPH was monitored by spectrophotometer at 515 nm for different
reaction times, until its stabilization. The DPPH concentration in the
medium was calculated using a calibration curve (0–0.16 mg/mL)
and determined by linear regression (Eq. (1)).
A515nm ¼ 6:6953  ½DPPH ðr ¼ 0:999Þ ð1Þ
where: [DPPH] = concentration of DPPH expressed in mg/mL.
From the calibration curve equation, the percentage of the
remaining DPPH for each time at every concentration tested was
determined according to Eq. (2):
%DPPHREM ¼ ð½DPPHt=½DPPHcontrolÞ  100 ð2Þ
The DPPHREM percentage was plotted against the reaction time
using an exponential model of the first order, through the software
Microcal Origin 6.0, to estimate the percentage of DPPHREM at steady
state for each concentration tested. And then the percentage of
DPPHREM at steady state was plotted against the solutions concentration
to obtain the amount of antioxidant needed to decrease the
initial concentration of DPPH by 50% (EC50). The time needed to
reach the EC50 (TEC50) was obtained graphically as proposed by
Sánchez-Moreno et al. (1998). The anti-radical efficiency (AE)
was calculated according to Eq. (3).
AE ¼ 1=ðEC50  TEC50Þ ð3Þ
2.5. Enzymatic inhibition of phenolic extracts
The inhibitory effect of phenolic compounds produced by the
fermentation was evaluated on the enzymes responsible for
browning in plant tissues, peroxidase and polyphenol oxidase.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.3 การแยกและระบุปริมาณกรดฟินอลิสารสกัดจากฟีนอถูก resuspended ในน้ำและเมทานอล(1:1), และ 20 จะ aliquots ฉีดเข้าไปใน chromatograph (Shimadzuโตเกียว ประเทศญี่ปุ่น เรียน-M10A) ที่อัตราการไหลของ 0.7 mL/min ที่ราว 35แยกกรดฟีนอได้สำเร็จโดยใช้การคอลัมน์ C18 (4.6 250 mm, 5 lm ค้นพบ สหรัฐอเมริกา) และการไล่ระดับสีตัวทำละลาย isocratic คิดประกอบด้วยเมทานอล และน้ำ (1% v/v acidifiedกรดน้ำส้ม) ที่ 20:80 อัตราส่วนระหว่างนาทีที่ 25 กับ UV ตรวจที่280 นาโนเมตรจนถึง 15 นาทีและ 320 nm จนได้กรดฟีนอ 25 นาทีระบุการเปรียบเทียบการดูดซึมและรักษาเวลาสเปกตรัม มีมาตรฐานแตกต่างกันของ phenols อยู่ในรำข้าว(caffeic, chlorogenic, p-coumaric, ferulic, gallic, p-hydroxybenzoicprotocatechuic, syringic และวานิลลิน รับจากซิก-Aldrichสหรัฐอเมริกา) ในวรรณคดี (แฮร์ et al., 2008 Pouraliร้อยเอ็ด al., 2010) คำนวณขีดจำกัดการตรวจสอบ (ลอด) โดยพื้นหลังสัญญาณเสียง (แก้ปัญหาที่ประกอบด้วยหรือสารทำละลายที่ใช้ในการการสกัดสารฟีนอ) 3:1 ขีดจำกัดกำหนด(LOQ) ก่อตั้งขึ้นเป็นครั้งที่สามจำนวนลอด(Ribani, Bottoli คอลลินส์ Jardim และ Melo, 2004)2.4 กิจกรรมสารต้านอนุมูลอิสระของสารสกัดจากฟีนอกำหนดกิจกรรมฟีนอสารต้านอนุมูลอิสระของสารสกัดจากใบตามวิธีอธิบายไว้ โดย Rufino, Fernandes, Alves และBrito (2009), Sánchez Moreno, Larrauri และ Saura-Calixto (1998)แบรนด์ Wiliams, Cuvelier, & Berset, 1995 วัดลดอนุมูลอิสระ 1.1 ฟีนิลได-2-picrihidrazil (DPPH) นี้ใช้วิธีการถ่ายโอนอิเล็กตรอนจากสารต้านอนุมูลอิสระหนึ่งสารอนุมูลอิสระ DPPH การสูญเสียของสีม่วงตามลด กลายเป็นสีเหลือง ความเข้มข้นแตกต่างกันของโซลูชั่นกรดแอสคอร์บิค (0.01 – 0.1 mg/mL), กรด ferulic (0.01 – 1 mg/ml), ร้าและรำข้าว unfermented (0.01-0.5 mg/mL) ทดสอบเพื่อ ได้รับค่าต่าง ๆ ของ DPPH ที่ครอบคลุมท่อนช่วงกว้างระหว่าง 0 ถึง 100% ในมล 0.2 มืด ของตัวอย่างเพิ่มเข้าไป 3.8 mL ของ DPPH 0.5 mM ปริมาณการใช้DPPH ถูกตรวจสอบ ด้วยเครื่องทดสอบกรดด่างที่ 515 nm สำหรับแตกต่างกันเวลาปฏิกิริยา จนถึงเสถียรภาพของ ความเข้มข้นของ DPPH ในการกลางถูกคำนวณโดยใช้การเทียบเส้นโค้ง (0 – 0.16 mg/mL)และมุ่งมั่น ด้วยการถดถอยเชิงเส้น (Eq. (1))A515nm ¼ 6:6953 ½DPPH ðr ¼ 0:999Þ ð1Þตำแหน่ง: [DPPH] =ความเข้มข้นของ DPPH แสดงใน mg/mLจากสมการเทียบเส้นโค้ง เปอร์เซ็นต์ของการDPPH ที่เหลือแต่ละครั้งที่ทุกความเข้มข้นที่ทดสอบได้กำหนดตาม Eq. (2):T ¼ ð½DPPH DPPHREM % = ½DPPH controlÞ 100 ð2ÞDPPHREM เปอร์เซ็นต์ถูกพล็อตกับเวลาปฏิกิริยาโดยใช้แบบจำลองแบบเลขชี้กำลังของใบสั่งแรก ผ่านซอฟต์แวร์Microcal กำเนิด 6.0 ประเมินเปอร์เซ็นต์ของ DPPHREM ที่ steadyสถานะสำหรับแต่ละความเข้มข้นที่ทดสอบ แล้วเปอร์เซ็นต์ของDPPHREM ที่ท่อนถูกพล็อตกับความเข้มข้นของโซลูชั่นรับยอดของสารต้านอนุมูลอิสระที่จำเป็นเพื่อลดการเข้มข้นเริ่มต้นของ DPPH 50% (EC50) เวลาที่ต้องการถึง EC50 (TEC50) ได้รับภาพนำเสนอโดยSánchez Moreno et al. (1998) มีประสิทธิภาพต้านอนุมูล (AE)มีคำนวณตาม Eq. (3)แอะ¼ 1 = ðEC50 TEC50Þ ð3Þ2.5 สารสกัดจากฟีนอยับยั้งเอนไซม์ในระบบผลของสารฟีนอลิปกลอสไขผลิตโดยการหมักถูกประเมินในเอนไซม์ที่รับผิดชอบbrowning ในเนื้อเยื่อพืช peroxidase และ polyphenol oxidase

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.3 การแยกและจำแนกสารฟีโนลิก และกรดฟีโนลิก
resuspended ในน้ำและเมทานอล
( 1 : 1 ) , และ 20 เฉยๆจะฉีดเข้าไปในโครมาโตกราฟ ( Shimadzu
, โตเกียว , ญี่ปุ่น class-m10a ) ที่อัตราการ ไหลของ 0.7 มล. / นาทีที่ 35  C .
แยกกรดฟีโนลิก ได้ใช้
c18 คอลัมน์ ( 4.6  250 มม. , 5 , LM , การค้นพบ  , USA ) และลาด
ตัวทำละลาย Isocratic ประกอบด้วยเมทานอล และปรับน้ำ ( 1 % v / v
กรดอะซิติก ) ในอัตราส่วน 20 : 80 ในช่วง 25 นาที กับ UV ตรวจจับที่ 280 nm จนกว่า
15 นาทีและ 25 นาที 320 nm จนฟีโนลิก กรดถูก
ระบุเปรียบเทียบเวลาการเก็บรักษาและการดูดซึมสเปกตรัมด้วยมาตรฐานที่แตกต่างกันของฟีนอล

ปัจจุบันใน น้ำมันรำข้าว ( Caffeic chlorogenic p-coumaric ferulic , , , , ฝรั่งเศส p-hydroxybenzoic
, ,protocatechuic syringic VANILLIN , และได้รับจาก Sigma – Aldrich
USA ) ตามที่อธิบายไว้ในวรรณกรรม ( Mira et al . , 2008 ; pourali
et al . , 2010 ) การตรวจสอบจำกัด ( LOD ) คำนวณได้โดยพื้นหลังเสียงสัญญาณ
( สารละลายที่มีตัวทำละลายที่ใช้ในการสกัดสารประกอบฟีนอล
) 3 : 1 . กำหนดวงเงิน
( loq ) ก่อตั้งขึ้นเป็นสามเท่าของ ribani โลด
( ,bottoli คอลลิน Jardim , & , เมโล , 2004 ) .
2.4 . ฤทธิ์ต้านอนุมูลอิสระของสารสกัด phenolic
สารต้านอนุมูลอิสระสารสกัดตั้งใจ
ตามวิธีการที่อธิบายโดย rufino , Femandes , Alves และ
Brito ( 2009 ) , ซันเชซ Moreno , larrauri และ saura calixto ( 1998 )
) และ วิลเลียม แบรนด์ คว เลอร์& , berset ปี 2538 วัดโดย
ลด ในการต้านอนุมูลอิสระ 11-diphenyl-2-picrihidrazil ( dpph ) วิธีนี้
ขึ้นอยู่กับการถ่ายโอนอิเล็กตรอนจากสารหนึ่ง
สารที่รุนแรง , ฟรี dpph ซึ่งแพ้สีม่วงสีของมันเมื่อ
ลดลง กลายเป็นสีเหลือง ระดับความเข้มข้นของโซลูชั่นของ
กรดแอสคอร์บิค ( 0.01 ) 0.1 mg / ml ) , กรด ferulic ( 0.01 - 1 mg / ml ) และรำข้าวหมัก
unfermented ( 0.01 ) 0.5 mg / ml ) ทดสอบ
เพื่อให้มันสามารถรับค่าต่าง ๆ ของ dpph ที่สภาวะคงตัวที่ครอบคลุม
ช่วงกว้างระหว่าง 0 และ 100 % ในที่มืด , 0.2 มล.
ตัวอย่างเพิ่ม 3.8 มล. dpph 0.5 มิลลิเมตร การบริโภคของวัสดุที่ถูกตรวจสอบโดย
dpph 515 nm สำหรับเวลาในการเกิดปฏิกิริยาแตกต่างกัน
จนเสถียรภาพ . การ dpph ความเข้มข้นใน
) คำนวณโดยใช้รูปโค้ง ( 0 ) 0.16 มิลลิกรัม / มิลลิลิตร )
และ กำหนดโดยการวิเคราะห์การถดถอยเชิงเส้น ( อีคิว ( 1 ) )
a515nm ¼ 6:6953  ½ dpph  ð R ¼ 0:999 Þð 1 Þ
: [ dpph ] = ความเข้มข้นของ dpph แสดงออกในมิลลิกรัม / มิลลิลิตร
จากรูปโค้งสมการ , ร้อยละของ dpph ที่เหลือ
แต่ละครั้งในทุกความเข้มข้นที่ทดสอบ คือ
พิจารณาตามอีคิว ( 2 ) :
% dpphrem ¼ð½ dpph  t = ½ dpph  ควบคุมÞ  100 ðÞ
2การ dpphrem ร้อยละงัดข้อกับเวลาปฏิกิริยา
โดยใช้รูปแบบแบบลําดับแรก ผ่านซอฟต์แวร์
microcal ที่มา 6.0 , ค่าร้อยละของ dpphrem ที่สถานะคงตัว
แต่ละความเข้มข้นที่ทดสอบ แล้วค่า
dpphrem ที่สถานะคงตัวจึงวางแผนกับโซลูชั่นของ
ที่จะได้รับปริมาณของสารต้านอนุมูลอิสระที่จำเป็นเพื่อลด