3. Results3.1. Screening for bacter

3. Results
3.1. Screening for bacterial antagonist producing volatile antimicrobial
Two hundred and six strains of bacteria were isolated from the soil using repeated plate streaking (Fig. 1). Preliminary screening showed that 4 isolates had readily observed inhibitory activity towards C. gloeosporioides mycelia growth, identified as TB09, TB30, TB52 and TB72. The diameters of mycelia growth were inhibited over 80% by TB09 and TB72 and reduced over 30% in the presence of volatiles released from TB30 or TB52 (Table 1).

3.2. In vivo tests of the volatile compounds produced by bacteria
The development and expansion of disease symptoms induced by the anthracnose pathogen was inhibited effectively by volatile compounds synthesized by four strains identified in in vitro screens, TB09, TB30, TB52 and TB72 (Fig. 2). For the inoculated control fruit, the lesion area extended to 9.39 mm2 after 7 days incubation at room temperature, whereas for the inoculated fruits
exposed to volatiles from TB09, TB30, TB52 and TB72, the lesion areas were limited to 0.54, 1.18, 1.42 or 1.16 mm2. These correspond to relative inhibition incidences of 94.3, 87.4, 84.9 and 87.6 for each isolate, respectively (Table 2). In the test of spore suspension inoculations, the VOCs of four antagonistic strains also significantly inhibited the growth of anthracnose pathogen in fruit
tissue, but the inhibition values of isolates TB09 and TB72 were greater than TB30 and TB52.

3.3. Identification of bacteria TB09 and TB072
The two bacterial antagonistic strains TB09 and TB72 were identified by morphological observation, physiological test and
DNA sequence analysis. The results showed that TB09 was most similar to Bacillus pumilus strain AY876289 (98.01%); similarity
overlap included Bacillus altitudinis strain AJ831842 (96.22%) as second comparison and Bacillus stratosphericus strain AJ831841
(94.58%) as third comparison. Based on colony appearance criteria, the identity of TB09 was best assigned as a B. pumilus strain. Likewise, the results obtained from sequence comparison indicated TB72 was most similar to Bacillus thuringiensis strain D16281
(99.50%) and, to a lesser extent, Bacillus cereus strain HE716871 (85.63%). Thus TB72 was identified as a B. thuringiensis strain.

3.4. Analysis of the volatile compounds produced by bacteria
The volatile profiles analyzed by GC–MS showed that TB09 produced more volatile compounds (VOCs) than TB72 and the control (Fig. 3). Diethyl phthalate and heptadecane existed in all the samples and a peak corresponding to diethyl phthalate represented
the main fraction in all assays (Table 3). 2-decanone and 2-methylpyrazine were the secondary predominant substances produced by TB09 and TB72, respectively. 2-nonanone, 2-decanone, gentisic acid and n-hexadecanoic acid were volatiles uniquely produced
by TB09, while TB72 was differentiated by peaks identified as 2-methylpyrazine and thymol.

3.5. Inhibitory effect of identified volatile compounds on the mycelia growth in vitro
Among the eleven volatile compounds mentioned in Table 3, seven of these technical grade volatile compounds are available in a liquid state and another four occur in a solid state at normal room temperature. 2-nonanone, b-benzeneethanamine and 2-decanone
completely inhibited the growth of mycelia in vitro at the tested concentration of 100 lL L_1 (Table 4). Thymol completely inhibited
the growth of mycelia at concentrations of 50 mg L_1 and 100 mg L_1 (Table 5). 2-methylpyrazine showed strong inhibitory
activity against the growth of mycelia at a concentration of 100 lL L_1, while the remaining compounds showed weak or no
inhibitory activity. The C. gloeosporioides agar plug from the completely inhibited test plate could not initiate outgrowth to the fresh
PDA following transfer even in the absence of volatiles for five days (data not shown).

3.6. Effect of a constructed mixture of Bacillus volatile compounds on mycelia growth of C. gloeosporioides
Following 7 days incubation exposure at 28 _C, the growth inhibitions of C. gloeosporioides mycelia were 77.06% and 98.75% in the presence 20 or 40 lL, respectively (Table 6) of a constructed mixture of primary volatile compounds.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

3. ผลลัพธ์3.1 การคัดกรองเชื้อแบคทีเรียปฏิปักษ์ผลิตจุลินทรีย์ระเหยสองร้อย และหกสายพันธุ์ของแบคทีเรียที่แยกจากดินโดยใช้แผ่นซ้ำ streaking (Fig. 1) คัดกรองเบื้องต้นพบว่า 4 แยกมีพร้อมพบกิจกรรมลิปกลอสไขต่อ C. gloeosporioides mycelia เจริญเติบโต เป็น TB09, TB30, TB52 และ TB72 สมมาตรโต mycelia ถูกห้ามกว่า 80% โดย TB09 และ TB72 และลดลงกว่า 30% ในต่อหน้าของ volatiles ออกจาก TB30 หรือ TB52 (ตารางที่ 1)3.2. ในสัตว์ทดลองทดสอบสารระเหยที่ผลิต โดยแบคทีเรียการพัฒนาและการขยายตัวของอาการของโรคที่เกิดจากการศึกษา anthracnose ถูกห้ามอย่างมีประสิทธิภาพ โดยการระเหยสารสังเคราะห์ โดยสี่สายพันธุ์ที่ระบุไว้ในหน้าจอการเพาะเลี้ยง TB09, TB30, TB52 และ TB72 (Fig. 2) สำหรับผลไม้ควบคุม inoculated บริเวณแผลขยาย 9.39 มม 2 ได้ภายหลัง 7 วันบ่มที่อุณหภูมิห้อง ในขณะที่สำหรับผลไม้ inoculatedสัมผัสกับ volatiles จาก TB09, TB30, TB52 และ TB72 พื้นที่แผลถูกจำกัด 0.54, 1.18, 1.42 หรือ 1.16 มม 2 ได้ภาย เหล่านี้สอดคล้องกับ incidences ยับยั้งสัมพัทธ์ 94.3, 87.4, 84.9 และ 87.6 สำหรับแต่ละแยก ตามลำดับ (ตารางที่ 2) ในการทดสอบของประเทศระงับสปอร์ VOCs ของสายพันธุ์ต่อต้านสี่จะห้ามการเจริญเติบโตของการศึกษา anthracnose ในผลไม้เนื้อเยื่อ แต่ค่ายับยั้งแยก TB09 และ TB72 ได้มากกว่า TB30 และ TB523.3. รหัสของแบคทีเรีย TB09 และ TB0722 แบคทีเรียต่อต้านสายพันธุ์ TB09 และ TB72 ได้ระบุสัณฐานสังเกต ทดสอบสรีรวิทยา และการวิเคราะห์ลำดับดีเอ็นเอ ผลลัพธ์ที่แสดงให้เห็นว่า TB09 สุดโหมคัด pumilus AY876289 (98.01%) คล้ายคลึงaltitudinis ซ้อนรวมคัดสายพันธุ์ AJ831842 (96.22%) เป็นการเปรียบเทียบสอง และ stratosphericus คัดสายพันธุ์ AJ831841(94.58%) เป็นการเปรียบเทียบ 3 ตามเกณฑ์ลักษณะโคโลนี เอกลักษณ์ของ TB09 ส่วนกำหนดเป็น pumilus เกิดต้องใช้ ในทำนองเดียวกัน ผลได้รับจากการเปรียบเทียบลำดับระบุ TB72 สุดบาซิลลัสโหม D16281(99.50%) และ ขอบเขตที่น้อยกว่า cereus คัดสายพันธุ์ HE716871 (85.63%) ดังนั้น TB72 มีการระบุไว้เป็น thuringiensis เกิดต้องใช้3.4 การวิเคราะห์สารประกอบระเหยที่ผลิต โดยแบคทีเรียโพรไฟล์การระเหยที่วิเคราะห์ ด้วย GC-MS พบว่า TB09 ผลิตสารประกอบมากระเหย (VOCs) TB72 และควบคุม (Fig. 3) Diethyl พทาเลทและ heptadecane อยู่ในตัวอย่างทั้งหมดและสูงสุดที่สอดคล้องกับพทาเลท diethyl แทนส่วนหลักในทั้งหมด assays (ตาราง 3) 2 decanone และ 2-methylpyrazine มีสารกันรองผลิต โดย TB09 และ TB72 ตามลำดับ 2 nonanone, 2 decanone, gentisic กรด และกรด n-hexadecanoic ได้ volatiles ที่ผลิตโดยเฉพาะโดย TB09 ในขณะที่ TB72 แตกต่างกันเป็น 2 methylpyrazine และ thymol พีคส์3.5 ผลลิปกลอสไขของสารระเหยที่ระบุใน mycelia เติบโตหมู่ 11 ระเหยสารดังกล่าวในตาราง 3 เจ็ดสารระเหยเหล่านี้เทคนิคเกรดอยู่ในสถานะของเหลว และสี่อื่นเกิดขึ้นในสถานะของแข็งที่อุณหภูมิห้องปกติ 2-nonanone, b benzeneethanamine และ 2-decanoneห้ามการเจริญเติบโตของการเพาะเลี้ยงที่ความเข้มข้นที่ผ่านการทดสอบ 100 mycelia สมบูรณ์จะ L_1 (ตาราง 4) Thymol ห้ามทั้งหมดการเจริญเติบโตของ mycelia ที่ความเข้มข้นของ 50 mg L_1 และ 100 mg L_1 (ตาราง 5) 2-methylpyrazine แสดงให้เห็นแรงลิปกลอสไขกิจกรรมต่อต้านการเติบโตของ mycelia ที่ความเข้มข้น 100 lL L_1 ในขณะเหลือสารประกอบอ่อนแอแสดงหรือไม่ลิปกลอสไขกิจกรรม ปลั๊ก agar C. gloeosporioides จากแผ่นทดสอบห้ามสมบูรณ์สามารถเริ่มไปจะสดPDA ที่ต่อโอนได้ในการขาดงานของ volatiles 5 วัน (ไม่ได้แสดงข้อมูล)3.6. ผลของส่วนผสมของสารระเหยคัดสร้าง mycelia เจริญเติบโตของ C. gloeosporioidesต่อแสงบ่มวันที่ 28 _C, inhibitions เจริญเติบโตของ C. gloeosporioides mycelia ถูก 77.06 และจะอยู่ที่ 20 หรือ 40, 98.75% ตามลำดับ (ตาราง 6) ผสมระหว่างสร้างหลักสารประกอบที่ระเหย

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

3. ผล
3.1 การคัดกรองศัตรูแบคทีเรียผลิตสารระเหยยาต้านจุลชีพสองร้อยหกสายพันธุ์ของเชื้อแบคทีเรียที่แยกได้จากดินโดยใช้แผ่นซ้ำพุ่ง (รูปที่ 1).
การตรวจคัดกรองเบื้องต้นแสดงให้เห็นว่า 4 สายพันธุ์ได้สังเกตเห็นได้ง่ายต่อการยับยั้งการเจริญเติบโตของซี gloeosporioides เส้นใยระบุว่าเป็น TB09, TB30, TB52 และ TB72 เส้นผ่าศูนย์กลางของการเจริญเติบโตของเส้นใยถูกยับยั้งกว่า 80% โดย TB09 และ TB72 และลดลงกว่า 30% ในการปรากฏตัวของสารระเหยที่ปล่อยออกมาจาก TB30 หรือ TB52 (ตารางที่ 1). 3.2 ในการทดสอบร่างกายของสารระเหยที่ผลิตโดยแบคทีเรียการพัฒนาและการขยายตัวของอาการของโรคที่เกิดจากเชื้อโรคแอนแทรกโนถูกยับยั้งอย่างมีประสิทธิภาพโดยสารระเหยสังเคราะห์โดยสี่สายพันธุ์ที่ระบุไว้ในหน้าจอหลอดทดลอง TB09, TB30, TB52 และ TB72 (รูปที่. 2) . สำหรับผลไม้ที่ควบคุมเชื้อบริเวณแผลขยายไปถึง 9.39 mm2 หลังจากวันที่ 7 บ่มที่อุณหภูมิห้องในขณะที่สำหรับผลไม้ที่เชื้อสัมผัสกับสารระเหยจากTB09, TB30, TB52 และ TB72 พื้นที่แผลถูก จำกัด ให้ 0.54, 1.18, 1.42 หรือ 1.16 mm2 เหล่านี้สอดคล้องกับอุบัติการณ์การยับยั้งญาติของ 94.3, 87.4, 84.9 และ 87.6 สำหรับแต่ละแยกตามลำดับ (ตารางที่ 2) ในการทดสอบวัคซีนของสปอร์แขวนลอยที่ VOCs สี่สายพันธุ์ที่เป็นปรปักษ์กันอย่างมีนัยสำคัญสามารถยับยั้งการเจริญเติบโตของเชื้อโรคแอนแทรกโนผลไม้เนื้อเยื่อแต่ค่าการยับยั้งของแยก TB09 และ TB72 มีมากกว่า TB30 และ TB52. 3.3 บัตรประจำตัวของเชื้อแบคทีเรียและ TB09 TB072 ทั้งสองสายพันธุ์แบคทีเรียปฏิปักษ์ TB09 และ TB72 ถูกระบุโดยการสังเกตลักษณะทางสัณฐานวิทยาสรีรวิทยาและการทดสอบการวิเคราะห์ลำดับดีเอ็นเอ ผลการศึกษาพบว่าส่วนใหญ่เป็น TB09 คล้ายกับ Bacillus pumilus สายพันธุ์ AY876289 (98.01%) ความคล้ายคลึงกันทับซ้อนรวม Bacillus altitudinis ความเครียด AJ831842 (96.22%) ในขณะที่การเปรียบเทียบที่สองและ Bacillus AJ831841 ความเครียด stratosphericus (94.58%) ในขณะที่การเปรียบเทียบที่สาม ขึ้นอยู่กับเกณฑ์ลักษณะอาณานิคมตัวตนของ TB09 ได้รับมอบหมายอย่างดีในฐานะ B. pumilus สายพันธุ์ ในทำนองเดียวกันผลที่ได้รับจากการเปรียบเทียบลำดับระบุ TB72 เป็นส่วนใหญ่คล้ายกับสายพันธุ์ Bacillus thuringiensis D16281 (99.50%) และในระดับที่น้อยกว่าสายพันธุ์ Bacillus cereus HE716871 (85.63%) ดังนั้น TB72 ถูกระบุว่าเป็นสายพันธุ์บี thuringiensis. 3.4 การวิเคราะห์สารระเหยที่ผลิตโดยแบคทีเรียโปรไฟล์ระเหยวิเคราะห์โดย GC-MS พบว่า TB09 ผลิตสารระเหยมากขึ้น (VOCs) มากกว่า TB72 และการควบคุม (รูปที่. 3) phthalate Diethyl และ heptadecane อยู่ในกลุ่มตัวอย่างทั้งหมดและจุดสูงสุดที่สอดคล้องกับ diethyl phthalate เป็นตัวแทนของส่วนหลักในการตรวจทั้งหมด(ตารางที่ 3) 2 decanone และ 2 methylpyrazine เป็นสารที่เด่นรองที่ผลิตโดย TB09 และ TB72 ตามลำดับ 2 Nonanone 2 decanone กรด gentisic และกรด n-hexadecanoic เป็นสารระเหยที่ไม่ซ้ำกันผลิตโดยTB09 ขณะ TB72 ได้แตกต่างจากยอดเขาระบุว่าเป็น 2 methylpyrazine และไทมอล. 3.5 ผลยับยั้งการระบุสารระเหยในการเจริญเติบโตของเส้นใยในหลอดทดลองในบรรดาสิบเอ็ดสารระเหยที่กล่าวถึงในตารางที่ 3 เจ็ดชั้นประถมศึกษาปีทางเทคนิคเหล่านี้สารระเหยที่มีอยู่ในสถานะของเหลวและสี่อื่นที่เกิดขึ้นในสภาพของแข็งที่อุณหภูมิห้องปกติ 2 Nonanone, B-benzeneethanamine และ 2 decanone สามารถยับยั้งการเจริญเติบโตของเส้นใยในหลอดทดลองที่ความเข้มข้นของการทดสอบ 100 LL L_1 (ตารางที่ 4) ไทมอลสามารถยับยั้งการเจริญเติบโตของเส้นใยที่ความเข้มข้น 50 มิลลิกรัม L_1 และ 100 มก. L_1 (ตารางที่ 5) 2 methylpyrazine แสดงให้เห็นความแข็งแกร่งในการยับยั้งฤทธิ์ต้านการเจริญเติบโตของเส้นใยที่มีความเข้มข้น100 LL L_1 ในขณะที่สารที่เหลืออยู่แสดงให้เห็นว่าอ่อนแอหรือไม่มีการยับยั้ง ซี gloeosporioides ปลั๊กวุ้นจากแผ่นทดสอบยับยั้งสมบูรณ์ไม่สามารถเริ่มต้นการเจริญเติบโตที่จะสดPDA โอนต่อไปแม้กระทั่งในกรณีที่ไม่มีของสารระเหยเป็นเวลาห้าวัน (ไม่ได้แสดงข้อมูล). 3.6 ผลของการสร้างส่วนผสมของสารระเหย Bacillus ต่อการเจริญเติบโตของเส้นใย gloeosporioides ซีหลังจาก7 วันการเปิดรับการบ่มที่ 28 _C การยับยั้งการเจริญเติบโตของเส้นใย C. gloeosporioides เป็น 77.06% และ 98.75% ในที่ที่มี 20 หรือ 40 จะตามลำดับ (ตารางที่ 6) ของส่วนผสมที่สร้างขึ้นมาจากสารระเหยหลัก

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

3 . ผลลัพธ์
3.1 . การคัดกรองสารต้านเชื้อแบคทีเรียปฏิปักษ์ผลิต
สองแสนหกสายพันธุ์ของแบคทีเรียที่แยกได้จากดินโดยใช้แผ่นซ้ำ streaking ( รูปที่ 1 ) การตรวจเบื้องต้นพบว่ามี 4 สายพันธุ์พร้อมกิจกรรมสังเกตยับยั้งการเจริญเติบโตเชื้อราที่มีเส้นใยซี ระบุว่าเป็น tb09 tb30 tb52 , และ , tb72 .ขนาดเส้นผ่านศูนย์กลางของเส้นใยจะถูกยับยั้งการเจริญเติบโตและกว่า 80% โดย tb09 tb72 และลดลงกว่า 30% ในการปรากฏตัวของสารระเหยออกมาจาก tb30 หรือ tb52 ( ตารางที่ 1 ) .

. . ในการทดสอบฤทธิ์ของสารระเหยที่ผลิตโดยแบคทีเรีย
การพัฒนาและการขยายตัวของโรคอาการของโรคเกิดจากเชื้อโรคเจริญได้อย่างมีประสิทธิภาพ โดยสังเคราะห์จากสารระเหย 4 สายพันธุ์ที่ระบุในการ tb09 tb30 , หน้าจอ , และ tb52 tb72 ( รูปที่ 2 ) สำหรับควบคุมพื้นที่ปลูกผลไม้ แผลขยาย 9.39 แน่นหลังจาก 7 วันบ่มที่อุณหภูมิห้อง ในขณะที่การปลูกผลไม้
สัมผัสกับสารระเหยจาก tb09 tb30 tb52 , และ , tb72 บริเวณแผลถูก จำกัด หรือ 1.18 1.42 หรือ 1.16 แน่น . เหล่านี้สอดคล้องกับการพิจารณาอุบัติการณ์ของญาติ 94.3 , , 84.9 และ 87.6 สำหรับแต่ละแยก ตามลำดับ ( ตารางที่ 2 ) ในการทดสอบสปอร์แขวนลอย Inoculations , สารสี่ปฏิปักษ์สายพันธุ์ยังสามารถยับยั้งการเจริญเติบโตของเชื้อโรคในผลไม้
เนื้อเยื่อ แต่การยับยั้งเชื้อและค่า tb09 tb72 มากกว่า tb30 และ tb52 .

. . การจำแนกชนิดของแบคทีเรียและ tb09 tb072
สองสายพันธุ์แบคทีเรียปฏิปักษ์ และ tb09 tb72 ถูกระบุโดยการสังเกตลักษณะทางสัณฐานวิทยา สรีรวิทยา และทดสอบ
การวิเคราะห์ลำดับเบสดีเอ็นเอ ผลการศึกษาพบว่า tb09 ใกล้เคียงที่สุดสายพันธุ์บาซิลลัส พูมิลัส ay876289 ( 98.01 ) %
; คล้ายคลึงรวม altitudinis สายพันธุ์บาซิลลัส ซ้อน aj831842 ( 96.22 % ) และ Bacillus stratosphericus เปรียบเทียบสองสายพันธุ์ aj831841
( 94.58 % ) การเปรียบเทียบสาม ขึ้นอยู่กับเกณฑ์ลักษณะโคโลนี , เอกลักษณ์ของ tb09 ดีที่สุดได้รับมอบหมายให้เป็น บี ลลั ูมิลุส ความเครียด อนึ่ง ผลจากการเปรียบเทียบลำดับ พบ tb72 ใกล้เคียงที่สุดใน Bacillus thuringiensis สายพันธุ์ d16281
( 9950 % ) และในระดับที่น้อยกว่า , Bacillus cereus สายพันธุ์ he716871 ( 85.63 % ) ดังนั้น tb72 ถูกระบุเป็น B . thuringiensis สายพันธุ์

3.4 . การวิเคราะห์สารระเหยที่ผลิตโดยแบคทีเรีย
ได้วิเคราะห์โดย GC และโพรไฟล์ MS พบว่า tb09 ผลิตสารระเหยง่าย ( VOCs ) มากขึ้นกว่า tb72 และการควบคุม ( รูปที่ 3 )พทาเลทและไดเฮปต้าเดกเคนมีอยู่จริงในตัวอย่างทั้งหมด และสูงสุดที่สอดคล้องกับไดพทาเลทแทน
ส่วนหลักในทั้งหมด ) ( ตารางที่ 3 ) และ 2-decanone 2-methylpyrazine เป็นมัธยมโดดสารผลิตโดย tb09 และ tb72 ตามลำดับ 2-nonanone 2-decanone , กรดและกรดเป็นสารระเหย โดย gentisic n-hexadecanoic ผลิตโดย tb09
,ในขณะที่ tb72 คือความแตกต่างโดยยอดและระบุว่าเป็น 2-methylpyrazine ไทมอล

3 . ผลยับยั้งของระบุระเหยบนเส้นใยเจริญเติบโตในหลอดทดลอง
ในหมู่ 11 ระเหยที่กล่าวถึงในโต๊ะ 3 เจ็ดของเหล่านี้เทคนิคเกรดสารระเหยที่มีอยู่ในสถานะของเหลว และอีกสี่เกิดขึ้นในสถานะเป็นของแข็งที่อุณหภูมิห้องปกติ 2-nonanone ,b-benzeneethanamine 2-decanone
อย่างสมบูรณ์และยับยั้งการเจริญของเส้นใยในหลอดทดลองที่ทดสอบความเข้มข้น 100 จะ l_1 ( ตารางที่ 4 ) ไทมอลยับยั้งการเจริญเติบโตของเส้นใย
ที่ความเข้มข้น 50 มิลลิกรัม l_1 และ 100 มก. l_1 ( ตารางที่ 5 ) 2-methylpyrazine พบกิจกรรมการยับยั้งการเจริญเติบโตของเส้นใย
เข้มแข็งต่อความเข้มข้นจะ l_1 100 ,ในขณะที่สารที่เหลือให้อ่อนแอหรือกิจกรรมการยับยั้งไม่

โดย C . gloeosporioides วุ้นเสียบจากยับยั้งแผ่นทดสอบไม่สามารถเริ่มต้นผลพลอยได้กับ PDA สด
ต่อไปนี้โอนแม้ในกรณีที่ไม่มีสารระเหย 5 วัน ( ข้อมูลไม่แสดง ) .

3.6 ผลของส่วนผสมของเชื้อสร้างสารระเหยในการเจริญเติบโตของ C . gloeosporioides
เส้นใยต่อไปนี้ 7 วันที่ 28 _c บ่มเพาะการ เจริญเติบโตของ C . gloeosporioides เส้นใย inhibitions สร้างที่ % และ 98.75 ในการแสดง 20 หรือ 40 จะตามลำดับ ( ตารางที่ 6 ) การสร้างผสมสารระเหยหลัก .