The exocarp of the olive fruits at different stages was removed
using a scalpel blade. Mesocarp slices (approximately 5 g each)
were homogenized with mortar and pestle on ice upon the
addiction of cold grinding medium (0.6 M sucrose, 0.1 M HEPES/
NaOH,10mMKCl,1mMMgCl2,1mMEDTA, 2mMDTT, pH 7.5). The
homogenate was centrifuged at 10,000g at 4 C for 30 min, and
three fraction was obtained: a floating fatty layer on the top, an
aqueous middle layer and a pellet. The floating fatty layer, corresponding
to the crude lipid body fraction, was removed from the
surface of the supernatant with a spatula and resuspended in buffer
medium containing a non-ionic detergent (1mMTris, pH 7.5, 2mM DTT, 0.5% Triton X-100, approximately 4 ml g1 fatty layer) for
30 min at 4 C. The suspension was mixed vigorously with a vortex
and centrifuged again as above. The lipids, the top layer after the
second centrifugation, were removed and the remaining supernatant
(soluble protein fraction) were filtered through two layers of
cheesecloth. Lipase activity was tested in the aqueous fraction, in
the pellet obtained from the first centrifugation, and in the supernatant
obtained from the second centrifugation as indicated above.
Exocarp ผลไม้มะกอกที่ระยะต่าง ๆ ถูกเอาออกใช้ใบมีด scalpel Mesocarp ชิ้น (ประมาณ 5 กรัมแต่ละ)มี homogenized เป็นกลุ่มกับโกร่งบนน้ำแข็งตามติดเย็นบดกลาง (0.6 M ซูโครส 0.1 M HEPES /NaOH, 10mMKCl, 1mMMgCl2, 1mMEDTA, 2mMDTT, pH 7.5) ที่homogenate ถูก centrifuged ที่ 10000 g ที่ 4 C ใน 30 นาที และส่วนที่สามกล่าว: ชั้นไขมันที่ลอยอยู่ด้านบน การอควีชั้นกลางและเป็นเม็ด ไขมันลอยชั้น สอดคล้องการเศษส่วนร่างกายไขมันน้ำมัน ถูกลบออกจากการพื้นผิวของ supernatant กับการพาย และ resuspended ในบัฟเฟอร์ขนาดกลางที่ประกอบด้วยผงซักฟอกไม่ ionic (1mMTris, pH 7.5, 2 มม. DTT, 0.5% ไตรตั้น X-100 ประมาณ 4 ml g 1 ไขมันชั้น) สำหรับ30 นาทีที่ 4 ค การระงับได้ผสมโยคะ ด้วย vortex เป็นและ centrifuged บวกข้างต้น โครงการ ชั้นบนสุดหลังจากที่สอง centrifugation ถูกเอาออก และ supernatant ที่เหลือ(โปรตีนละลายเศษ) ถูกกรองผ่านชั้นสองcheesecloth กิจกรรมของเอนไซม์ไลเปสที่ทดสอบในเศษอควี ในเม็ดที่ได้รับ จาก centrifugation แรก และ ใน supernatantได้รับจาก centrifugation 2 ตามที่ระบุข้างต้น
การแปล กรุณารอสักครู่..

exocarp
ของผลไม้มะกอกในแต่ละขั้นตอนที่แตกต่างกันจะถูกลบออกโดยใช้ใบมีดผ่าตัด ชิ้นเนื้อ (ประมาณ 5 กรัม)
ถูกปั่นด้วยโกร่งบดยาบนน้ำแข็งเมื่อติดยาเสพติดของกลางบดเย็น (0.6 M ซูโครส 0.1 M HEPES / NaOH, 10mMKCl, 1mMMgCl2,1mMEDTA, 2mMDTT ค่า pH 7.5) homogenate ถูกหมุนเหวี่ยงที่ 10,000 กรัมที่ 4 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 30 นาทีและ? สามส่วนที่ได้รับ: ชั้นไขมันที่ลอยอยู่ด้านบนเป็นชั้นกลางน้ำและเม็ด ชั้นไขมันลอยสอดคล้องกับส่วนร่างกายไขมันดิบออกจากพื้นผิวของสารละลายด้วยไม้พายและresuspended ในบัฟเฟอร์ขนาดกลางที่มีผงซักฟอกที่ไม่ใช่ไอออนิก (1mMTris ค่า pH 7.5 2mm DTT, 0.5% Triton X-100 ประมาณ 4 กรัมมล. 1 ชั้นไขมัน) สำหรับ 30 นาทีที่ 4 องศาเซลเซียส ระงับผสมกับแรงน้ำวนและหมุนเหวี่ยงอีกครั้งดังกล่าว ไขมันที่ชั้นบนสุดหลังจากที่ปั่นสองถูกถอดออกและใสที่เหลือ(ส่วนโปรตีนที่ละลายน้ำได้) ได้รับการกรองผ่านสองชั้นของผ้า กิจกรรมเอนไซม์ไลเปสได้รับการทดสอบในส่วนน้ำในเม็ดที่ได้จากการหมุนเหวี่ยงครั้งแรกและในสารละลายที่ได้รับจากการหมุนเหวี่ยงที่สองตามที่ระบุไว้ข้างต้น
การแปล กรุณารอสักครู่..

มีโซคาร์ปของผลมะกอก ที่ระยะต่าง ๆถูกลบออก
ใช้มีดใบมีด เปลือกชิ้น ( ประมาณ 5 กรัมแต่ละ )
ถูกบดด้วยครกและสากบนน้ำแข็งบน
ติดหนาวบดขนาดกลาง ( 0.6 M ซูโครส 0.1 M NaOH 10mmkcl ฮีเปส /
, , 1mmmgcl2,1mmedta 2mmdtt , pH 7.5 )
อนคือระดับที่ 10 , 000 g 4 C นาน 30 นาทีและ
3 เศษส่วนได้ :ชั้นไขมันที่ลอยอยู่ด้านบน ,
น้ำชั้นกลางและเม็ด ลอยตัวชั้นไขมันที่ร่างกายกับไขมันดิบ
ส่วนถูกลบออกจากพื้นผิวของน่านด้วยไม้พายและ resuspended ในบัฟเฟอร์
ขนาดกลางที่มีผงซักฟอกไม่ ( 1mmtris pH 7.5 , 2mm ส่วน 0.5% Triton X-100 , ประมาณ 4 ml กรัม 1 ชั้นไขมัน )
30 นาทีที่ 4 Cการผสมอย่างแข็งขันด้วยน้ำวน
ไฟฟ้าอีกเป็นข้างต้น ไขมัน , ชั้นบนหลังจากที่
3 วินาที ถูกถอดออกและที่เหลือนำ
( โปรตีนส่วน soluble ) ถูกกรองผ่านผ้าสองชั้น
. กิจกรรมของเอนไซม์ถูกทดสอบในส่วนน้ำใน
เม็ดที่ได้จากการปั่นครั้งแรก และในน่าน
ที่ได้จากการปั่นเหวี่ยงที่สองตามที่ระบุไว้ข้างต้น
การแปล กรุณารอสักครู่..
