Previous proteomics studies showed

Previous proteomics studies showed that Ta0152 possesses complex
forming ability suggesting a ~500 kDa molecular weight, which size was
in good agreement with its hexadecameric homologue of Aeropyrum
pernix (Mizohata et al., 2005). Our result might indicate that the antibody
purified Ta0152 ring was prevented from ordered aggregation which
was detected in earlier studies (R. Knispel, personal communication)
therefore this complex could not be visualized by EM (data not shown).
Our scFv-antibody based two-step chromatography separation method
allowed the isolation of intact complexes from native T. acidophilum
cell extract and on the example of two well-known complexes we
demonstrated the feasibility of scFv-based purification technique for
other high molecular weight complexes. These complexes can be subjected
to biochemical and/or EM analyses however care should be taken to
carry out the experiments with several specific scFvs to avoid enzyme inhibition.
We proved the power of this method by described experiments
however to avoid unnecessary cloning steps and to increase the bait
yield creating a His-tagged nanobody displaying phage library based
on camelid immunization would be a viable option

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ศึกษาโปรตีโอมิกส์ก่อนหน้านี้แสดงให้เห็นว่า มี Ta0152 ซับซ้อนขนาดที่ขึ้นรูปสามารถบอกน้ำหนักโมเลกุล ~ 500 kDa ถูกในข้อตกลงที่ดีกับ homologue ของ hexadecameric ของ Aeropyrumpernix (Mizohata et al. 2005) ผลการค้นหาของเราอาจบ่งชี้ว่า แอนติบอดีแหวน Ta0152 บริสุทธิ์ถูกป้องกันไม่ให้สั่งรวมซึ่งตรวจพบในการศึกษาก่อนหน้า (R. Knispel การสื่อสาร)ดังนั้น ที่ซับซ้อนอาจไม่สามารถแสดงเป็นภาพ ด้วย EM (ไม่แสดงข้อมูล)ของเรา scFv แอนติบอดีตามวิธีแยก chromatography สองขั้นตอนอนุญาตให้แยกของคอมเพล็กซ์เหมือนเดิมจากเจ้า T. acidophilumสารสกัดจากเซลล์และใช้ตัวอย่างของคอมเพล็กซ์รู้จักสองเราแสดงให้เห็นความเป็นไปได้ของเทคนิค scFv คะแนนบริสุทธิ์สำหรับคอมเพล็กซ์อื่น ๆ โมเลกุลสูง สิ่งอำนวยความสะดวกเหล่านี้สามารถถูกบังคับการทางชีวเคมี หรือ EM วิเคราะห์อย่างไรก็ตาม ดูแลจะต้องดำเนินการดำเนินการทดสอบกับหลายเฉพาะ scFvs เพื่อหลีกเลี่ยงการยับยั้งเอนไซม์เราพิสูจน์แล้วว่าพลังของวิธีการนี้ โดยการทดลองอธิบายอย่างไรก็ตาม เพื่อหลีกเลี่ยงขั้นตอนการโคลนที่ไม่จำเป็น และเพิ่มเหยื่อผลผลิตสร้าง nanobody แท็กของพระองค์ที่แสดงจากไลบรารีของ phageบน camelid สร้างภูมิคุ้มกันจะเป็นอีกตัวเลือก

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

การศึกษาโปรตีนก่อนหน้านี้แสดงให้เห็นว่ามีคุณสมบัติที่ซับซ้อน Ta0152
ความสามารถในการขึ้นรูปแนะนำ ~ 500 kDa น้ำหนักโมเลกุลซึ่งเป็นขนาดที่
อยู่ในข้อตกลงที่ดีกับคล้ายคลึงกัน hexadecameric ของ Aeropyrum
pernix (Mizohata et al., 2005) ผลของเราอาจบ่งชี้ว่าแอนติบอดี
บริสุทธิ์แหวน Ta0152 ได้รับการป้องกันจากการรวมตัวสั่งซื้อที่
ถูกตรวจพบในการศึกษาก่อนหน้า (อาร์ Knispel, การสื่อสารส่วนบุคคล)
ดังนั้นการที่ซับซ้อนนี้ไม่สามารถมองเห็นโดย EM (ไม่ได้แสดงข้อมูล).
scFv แอนติบอดีของเราอยู่สอง วิธีการแยกโครมาโต -step
ได้รับอนุญาตแยกคอมเพล็กซ์เหมือนเดิมจาก T. พื้นเมือง acidophilum
สารสกัดจากเซลล์และตัวอย่างของสองเชิงซ้อนที่รู้จักกันดีที่เรา
แสดงให้เห็นถึงความเป็นไปได้ของเทคนิคการทำให้บริสุทธิ์ scFv-based สำหรับ
อื่น ๆ สูงน้ำหนักโมเลกุลเชิงซ้อน คอมเพล็กซ์เหล่านี้สามารถอยู่ภายใต้
การทางชีวเคมีและ / หรือ EM วิเคราะห์อย่างไรก็ตามการดูแลควรจะนำไป
ดำเนินการทดลองกับ scFvs เฉพาะหลายอย่างเพื่อหลีกเลี่ยงการยับยั้งเอนไซม์.
เราได้รับการพิสูจน์พลังของวิธีการนี้โดยการทดลองอธิบาย
อย่างไรเพื่อหลีกเลี่ยงขั้นตอนการโคลนที่ไม่จำเป็นและจะเพิ่มขึ้น เหยื่อ
ผลผลิตสร้างห้องสมุดของเขาทำลายจุลินทรีย์ที่ติดแท็ก nanobody แสดงตาม
ใน camelid การฉีดวัคซีนจะเป็นตัวเลือกที่ทำงานได้