2.2. Extraction
All dried samples were ground in a laboratory mill and passed through a sieve (80 mesh). Bean
samples (10 g) were extracted twice in 100 mL of 70% ethanol for 2 h at room temperature. After
vacuum filtration, the supernatants were combined and concentrated under reduced pressure in a rotary
evaporator at 50 °C. After freeze-drying, the sample powder was stored at −20 °C until analysis. The
biological activities of the azuki beans were measured at a concentration of 15 mg/mL.
2.3. HPLC Analysis of Individual Phenolic Acids
HPLC system was equipped with two Shimadzu LC-20A pumps, a Shimadzu LC-20 autosampler, a
SPD-20A UV/vis detector and an Alltima C18 column (4.6 mm × 250 mm, Metachem Technologies Inc.,
Torrance, CA). The wavelength of the UV detector was set at 280 nm. The mobile phase was a mixture
of solvent A (HPLC water containing 0.05% TFA) and solvent B (acetonitrile: MeOH:
TFA = 30:10:0.05). The gradient elution was programmed as follows: from 10% to 12% B in 16 min;
from 12% to 25% B in 9 min; from 25% to 50% B in 25 min; from 50% to 75% B in 18 min; from 75%
to 10% B in 10 min. The flow rate was set at 1.0 mL/min, and the injection volume was 10 μL. Each
phenolic acid was quantified according to its calibration curve.
2.4. Determination of Total Phenolic Content (TPC)
TPC was measured using the Folin-Ciocalteu method described previously [17,18]. Briefly, 50 μL
of the extract was mixed in 5 mL of distilled deionised water followed by the addition of 500 μL of 1 M
2.2 สกัด
ตัวอย่างอบแห้งทั้งหมดถูกพื้นดินในห้องปฏิบัติการโรงงานและผ่านตะแกรง (80 ตาข่าย) ถั่ว
ตัวอย่าง (10 กรัม) ถูกสกัดสองครั้งใน 100 มิลลิลิตรของเอทานอล 70% เป็นเวลา 2 ชั่วโมงที่อุณหภูมิห้อง หลังจาก
การกรองสูญญากาศ, supernatants ถูกรวมและเข้มข้นภายใต้ความกดดันที่ลดลงในแบบหมุน
ระเหยที่ 50 ° C หลังจากแช่แข็งแห้ง, ผงตัวอย่างที่ถูกเก็บไว้ที่ -20 ° C จนการวิเคราะห์
กิจกรรมทางชีวภาพของถั่วอะซูกิถูกวัดที่ความเข้มข้น 15 มก. / มล.
2.3 HPLC วิเคราะห์บุคคลฟีโนลิกกรด
ระบบ HPLC เป็นอุปกรณ์ที่มีสองปั๊ม Shimadzu LC-20A, Shimadzu LC-20 autosampler,
SPD-20A UV / Vis ตรวจจับและคอลัมน์ C18 Alltima (4.6 มม× 250 มม Metachem เทคโนโลยีอิงค์
Torrance, CA) ความยาวคลื่นของเครื่องตรวจจับรังสียูวีที่ถูกตั้งไว้ที่ 280 นาโนเมตร เฟสเคลื่อนที่เป็นส่วนผสม
ของตัวทำละลาย (HPLC น้ำที่มี 0.05% TFA) และตัวทำละลาย B (acetonitrile: เมธานอล:
TFA = 30: 10: 0.05) ชะลาดเป็นโปรแกรมดังต่อไปนี้จาก 10% เป็น 12% B ใน 16 นาที;
จาก 12% เป็น 25% B ใน 9 นาที; จาก 25% เป็น 50% B ใน 25 นาที; จาก 50% ถึง 75% B ใน 18 นาที; จาก 75%
เป็น 10% B ใน 10 นาที อัตราการไหลอยู่ที่ 1.0 มิลลิลิตร / นาทีและปริมาณการฉีดคือ 10 ไมโครลิตร แต่ละ
กรดฟีนอลได้รับการวัดตามเส้นโค้งของการสอบเทียบ.
2.4 การวิเคราะห์ปริมาณฟีนอลิเนื้อหา (RDC)
TPC วัดโดยใช้วิธี Folin-Ciocalteu อธิบายไว้ก่อนหน้า [17,18] สั้น ๆ 50 ไมโครลิตร
ของสารสกัดผสมใน 5 มิลลิลิตรของน้ำกลั่น deionised ตามด้วยนอกเหนือจาก 500 ไมโครลิตร 1 เมตร
การแปล กรุณารอสักครู่..
