Fermentation of plant extracts by m

Fermentation of plant extracts by microbes
To prepare an inoculum, each microbial isolate with GSL-degrading capacity will be cultured separately in 10 mL respective broths at 30˚C in anaerobic conditions for 24 h. Microbial cells will be harvested by centrifugation at 5000 rpm at 4˚C for 15 min. Pellet of microbial cells will be washed with minimal salt medium (MSM) twice and again resuspended in 20 mL MSM. The absorbance (OD600nm) of microbial cells is measured with UV-VIS spectrophotometer and adjusted to OD ~1.
For GSL degradation study, 20 mL MSM with each plant extract (20 mg/mL) containing GSL substrate is prepared in 100 mL Erlenmeyer flasks. Next each microbial strain or their different consortia (by mixing a fifth of each of 5 different microbial inoculum) are inoculated anaerobically and aerobically in flasks at 150 rpm at 30˚C for 0, 12, 24, 36, 48 h with triplicates. The samples will be collected and processed accordingly and the pH and OD600nm of each sample is recorded at each time interval. The negative controls including incubations of plant extracts without microbes and those of microbes without plant extracts will be carried out. The lack of ITC production in the negative controls and the presence of ITCs in the samples will indicate that individual microbes and microbial consortia can metabolize GSLs in plant extracts to ITCs. Time-course analysis is used to determine the GSL degradation rates and the trends of ITC production over time. To optimize conditions for highest microbial GSL and highest ITC production, different pHs of 1 mL MRS media are studied first and fermentation temperatures 25, 30, 37 and 45C are tested at the optimal pH will then be tested. Next aerobic and anaerobic conditions are tested at optimal pH and temperature. Different concentrations of NaCl as a stimulant for GSL degradation (Herzallah et al., 2011) will also be tested at optimal conditions. The volume of culture will be increased from 1 mL to 100 mL under the optimal conditions tested thus far to determine whether higher GSL degradation and higher ITC production can be achieved in a larger scale.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

สารสกัดจากพืชโดยจุลินทรีย์หมักการเตรียม inoculum มี แต่ละจุลินทรีย์แยกลด GSL กำลังจะเพาะเลี้ยงแยกต่างหากใน 10 มล. broths ลำดับที่ 30˚C ในสภาวะไม่ใช้ออกซิเจน 24 h. เซลล์จุลินทรีย์จะเก็บเกี่ยว โดยการหมุนเหวี่ยงที่ 5000 rpm ที่ 4˚C สำหรับ 15 นาทีเม็ดของเซลล์จุลินทรีย์จะล้าง ด้วยกลางเกลือน้อยที่สุด (MSM) สองครั้ง และอีกครั้ง resuspended ใน 20 mL MSM Absorbance (OD600nm) ของเซลล์จุลินทรีย์จะวัด ด้วยเครื่อง spectrophotometer UV-VIS และปรับ OD 1ศึกษาลด GSL, 20 mL MSM ด้วยละสารสกัดพืช (20 มิลลิกรัม/มิลลิลิตร) ที่ประกอบด้วยพื้นผิว GSL จะเตรียมไว้ในขวดขนาด 100 มล. Erlenmeyer ถัดไปแต่ละสายพันธุ์จุลินทรีย์หรือกลุ่มร่วมค้าระดับความแตกต่างกัน (โดยผสมห้าของ inoculum จุลินทรีย์ต่าง ๆ 5) inoculated เป็น anaerobically และ aerobically ในขวดที่ 150 rpm ที่ 30˚C สำหรับ 0, 12, 24, 36, 48 h กับ triplicates ตัวอย่างจะถูกรวบรวม และประมวลผลตามลำดับ และค่า pH และ OD600nm ของแต่ละอย่างจะถูกบันทึกในแต่ละช่วงเวลา ลบการควบคุมรวมทั้ง incubations สารสกัดจากพืชโดยจุลินทรีย์ และจุลินทรีย์โดยสกัดจากพืชเหล่านั้นจะดำเนินการ ขาดการผลิตทีซีในการควบคุมเชิงลบและการปรากฏตัวของ ITCs ในตัวอย่างจะบ่งชี้ว่า จุลินทรีย์แต่ละบุคคลและกลุ่มร่วมค้าระดับจุลินทรีย์สามารถเผาผลาญ GSLs สารสกัดจากพืชเพื่อ ITCs การวิเคราะห์หลักสูตรเวลาถูกใช้เพื่อกำหนดราคาลด GSL และแนวโน้มของการผลิตทีซีตลอดเวลา การปรับปรุงเงื่อนไข GSL จุลินทรีย์สูงสุดและสูงสุดทีซีผลิต pHs ที่แตกต่างกันของสื่อ 1 มล. MRS ศึกษาครั้งแรก และจะมีทดสอบการหมักอุณหภูมิ 25, 30, 37 และ 45 C ที่ค่า pH ที่เหมาะสมจะแล้วทดสอบ ออกซิเจน และเงื่อนไขถัดไปจะมีทดสอบที่อุณหภูมิและค่า pH ที่เหมาะสม แตกต่างความเข้มข้นของ NaCl เป็นสำหรับการย่อยสลาย GSL (Herzallah et al. 2011) จะทดสอบในเงื่อนไขที่เหมาะสม ระดับวัฒนธรรมจะเพิ่มจาก 1 mL ถึง 100 mL ภายใต้เงื่อนไขที่เหมาะสมที่ทดสอบฉะนี้เพื่อตรวจสอบว่า ลด GSL สูงและผลิตทีซีสามารถทำได้ในวงกว้าง

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

การหมักของสารสกัดจากพืชโดยจุลินทรีย์
ในการเตรียมหัวเชื้อแต่ละจุลินทรีย์แยกที่มีความจุ GSL ย่อยสลายจะถูกเลี้ยงแยกกันใน 10 มลซุปมิโสะตามลำดับที่ 30C ในสภาวะไร้ออกซิเจนเป็นเวลา 24 ชั่วโมง เซลล์ของจุลินทรีย์จะได้รับการเก็บเกี่ยวโดยการหมุนเหวี่ยงที่ 5000 รอบต่อนาทีที่ 4C เป็นเวลา 15 นาที เม็ดของเซลล์จุลินทรีย์จะได้รับการล้างด้วยเกลือกลางน้อยที่สุด (MSM) สองครั้งและอีกครั้ง resuspended ใน 20 มลกลุ่มชายรักชาย ค่าการดูดกลืน (OD600nm) ของเซลล์จุลินทรีย์เป็นวัดที่มี spectrophotometer UV-VIS และปรับให้ OD ~ 1.
สำหรับการศึกษาการย่อยสลาย GSL 20 มล MSM กับแต่ละสารสกัดจากพืช (20 mg / ml) ที่มีพื้นผิว GSL จัดทำใน 100 ขวดมิลลิลิตร Erlenmeyer . ถัดไปในแต่ละสายพันธุ์จุลินทรีย์หรือไพรีที่แตกต่างกันของพวกเขา (โดยการผสมหนึ่งในห้าของแต่ละ 5 หัวเชื้อจุลินทรีย์ที่แตกต่างกัน) เป็นเชื้อแบบไม่ใช้อากาศและออกซิเจนในขวดที่ 150 รอบต่อนาทีที่ 30C 0, 12, 24, 36, 48 ชั่วโมงกับ triplicates กลุ่มตัวอย่างจะถูกเก็บรวบรวมและประมวลผลตามและค่า pH และ OD600nm ของแต่ละตัวอย่างจะถูกบันทึกไว้ในแต่ละช่วงเวลา การควบคุมเชิงลบรวมถึงการฟักตัวของเชื้อของสารสกัดจากพืชโดยไม่ต้องจุลินทรีย์และของจุลินทรีย์โดยไม่ต้องสารสกัดจากพืชจะได้รับการดำเนินการ การขาดการผลิต ITC ในการควบคุมการลบและการปรากฏตัวของ ITCs ในตัวอย่างที่จะแสดงให้เห็นว่าเชื้อจุลินทรีย์ของแต่ละบุคคลและไพรีจุลินทรีย์สามารถเผาผลาญ GSLs ในสารสกัดจากพืชเพื่อ ITCs การวิเคราะห์เวลาหลักสูตรที่ถูกใช้ในการกำหนดอัตราการย่อยสลาย GSL และแนวโน้มของการผลิต ITC เมื่อเวลาผ่านไป เพื่อเพิ่มประสิทธิภาพการเงื่อนไขในการ GSL จุลินทรีย์สูงสุดและการผลิต ITC สูงสุดค่าพีเอชที่แตกต่างกันของสื่อมล 1 MRS มีการศึกษาเป็นครั้งแรกและการหมักที่อุณหภูมิ 25, 30, 37 และ 45C จะมีการทดสอบที่มีค่า pH ที่เหมาะสมจากนั้นจะมีการทดสอบ เงื่อนไขและแอโรบิกแบบไม่ใช้ออกซิเจนถัดไปจะมีการทดสอบที่ pH และอุณหภูมิที่เหมาะสม ความเข้มข้นแตกต่างกันของโซเดียมคลอไรด์เป็นตัวกระตุ้นสำหรับการย่อยสลาย GSL (Herzallah et al., 2011) นอกจากนี้ยังจะมีการทดสอบในสภาวะที่เหมาะสม ปริมาณของวัฒนธรรมจะเพิ่มขึ้นจาก 1 มิลลิลิตร 100 มิลลิลิตรภายใต้สภาวะที่เหมาะสมในการทดสอบป่านนี้เพื่อตรวจสอบว่าสูงกว่าการย่อยสลาย GSL และการผลิตที่สูงขึ้น ITC สามารถทำได้ในระดับขนาดใหญ่

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การหมักสารสกัดจากพืช โดยจุลินทรีย์เพื่อเตรียมเชื้อจุลินทรีย์แต่ละแยกกับ GSL สลายความจุจะเลี้ยงแยกในแต่ละ 10 ml า 30 ˚ C ในสภาวะไร้อากาศเป็นเวลา 24 ชั่วโมง โดยเซลล์จะเก็บเกี่ยวโดยการเหวี่ยงแยกที่ 5 , 000 รอบต่อนาทีที่อุณหภูมิ 4 ˚ C เป็นเวลา 15 นาที เม็ดจุลินทรีย์เซลล์จะถูกล้างด้วยเกลือน้อยที่สุด ( ชายรักชาย ) กลาง 2 ครั้ง อีก resuspended 20 ml MSM . น ( od600nm ) เซลล์ของจุลินทรีย์ เป็นวัดที่มีไอออน Spectrophotometer และปรับให้ OD ~ 1สำหรับ GSL การย่อยสลายการศึกษา 20 ml MSM กับแต่ละสารสกัดจากพืช ( 20 มิลลิกรัมต่อมิลลิลิตรที่ประกอบด้วย GSL พื้นผิวที่เตรียมไว้ในเออร์เลนเมเยอร์ ขวด 100 ml . ถัดไปในแต่ละสายพันธุ์จุลินทรีย์หรือ consortia ที่แตกต่างกันของพวกเขา ( โดยผสม หนึ่งในห้าของแต่ละที่แตกต่างกัน 5 สายพันธุ์และเชื้อจุลินทรีย์ ) พ aerobically ในขวด 150 รอบต่อนาทีที่อุณหภูมิ 30 ˚ C 0 , 12 , 24 , 36 , 48 ชั่วโมงล้อม . ตัวอย่างจะถูกเก็บรวบรวมและประมวลผลตามและ pH และ od600nm ของแต่ละตัวอย่างจะถูกบันทึกในแต่ละช่วงเวลานั้น ลบ incubations การควบคุมรวมทั้งสารสกัดจากพืชและจุลินทรีย์ โดยจุลินทรีย์ที่ไม่มีสารสกัดจากพืช จะต้องดําเนินการ ขาดการผลิต ITC ในการควบคุมเชิงลบและการปรากฏตัวของ itcs ในตัวอย่างจะพบว่า จุลินทรีย์ จุลินทรีย์สามารถเผาผลาญบุคคลและ consortia gsls สารสกัดพืชเพื่อ itcs . การวิเคราะห์หลักสูตร เวลาที่ใช้ในการตรวจสอบอัตราการย่อยสลายและ GSL แนวโน้มการผลิต ITC ตลอดเวลา การปรับเงื่อนไขสำหรับสูงสุดและสูงสุด ITC การผลิตจุลินทรีย์ GSL PHS ที่แตกต่างกัน 1 ml นางสื่อศึกษาก่อนและการหมักอุณหภูมิ 25 , 30 , 37 และ 45C ทดสอบที่ pH ที่เหมาะสมจะถูกทดสอบ แอโรบิค และ anaerobic ต่อไปสภาวะทดสอบที่เหมาะสม pH และอุณหภูมิ ระดับความเข้มข้นของเกลือโซเดียมคลอไรด์เป็นตัวกระตุ้นการย่อยสลาย GSL ( herzallah et al . , 2011 ) ก็จะถูกทดสอบในเงื่อนไขที่เหมาะสมที่สุด ปริมาณของวัฒนธรรมจะต้องเพิ่มขึ้นจาก 1 มิลลิลิตร ต่อ 100 มล. ภายใต้สภาวะการทดสอบจึงห่างไกลเพื่อตรวจสอบว่าสูงกว่า GSL การย่อยสลายและการผลิต ITC ที่สูงขึ้นสามารถทำได้ในระดับขนาดใหญ่