2. Materials and methods2.1. Bacter

2. Materials and methods
2.1. Bacterial strains
Pediococcus acidilactici NRRL B-5627 (a pediocin-producing strain)was obtained from
the Northern Regional Research Laboratory (NRRL, Peoria, IL, USA). Lactococcus lactis
subsp. lactis CECT 539 (a nisin-producing strain), Lactobacillus casei subsp. casei CECT
4043 (a high lactic acid-producing strain), Enterococcus faecium CECT 410 and Carnobacterium
piscicola CECT 4020 (the target organism in the antibacterial-activity assay) were
obtained from the Spanish Type Culture Collection (CECT). Stock cultures of the four LAB
were maintained at −40 ◦C in Nutrient broth supplemented with 15mL of glycerol per litre
of medium. Working cultures maintained at 4 ◦C on de Man, Rogosa and Sharpe (MRS)
agar (for Ped. acidilactici, L. lactis, Lact. casei and C. piscicola) or Rothe agar (for Ent.
faecium) were prepared monthly from frozen stock cultures.

2.2. Tolerance to acidic pH
The four potentially probiotic strains were grown in MRS (for Ped. acidilactici, L. lactis
and Lact. casei) and Rothe broth (for Ent. faecium) at 30◦C overnight in culture tubes, then
subcultured into the corresponding medium for each strain during 18 h. The cultures were
centrifuged at 5000×g for 10 min at 4 ◦C, the pellets washed in sterile phosphate-buffered
saline (PBS: 10mM sodium phosphate monobasic, 10mM sodium phosphate dibasic,
130mM sodium chloride, pH 7.2), and resuspended in sterile PBS. Each strain was diluted
1/100 in sterile PBS at pH 1.0, 2.0, 3.0, 4.0 and 5.0. Incubation times were 1, 2 and 4 h. Serial
decimal dilutions in sterile PBS were prepared, and aliquots (0.1 mL) from the dilutions were
then spotted on MRS or Rothe agar plates for determining the surviving cells number. The
experiment was repeated twice and each reading represents the mean of three observations.

2.3. Preparation of simulated gastric and pancreatic juices
Gastric and pancreatic juices were prepared fresh by dissolving pepsin (Sigma) from
porcine stomach mucosa (3 g/L) and pancreatin (Sigma) from porcine pancreas (1 g/L) in
sterile saline (5 g/L) according to Charteris et al. (1998). Subsequently, the pHs of the gastric and pancreatic preparations were, respectively, adjusted to 2.0 and 8.0 with 12M HCl or
0.1M NaOH

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2 วัสดุและวิธีการ
2.1 แบคทีเรีย Pediococcus acidilactici
NRRL B-56​​27 (ความเครียด pediocin ผลิต) ที่ได้รับจาก
ห้องปฏิบัติการวิจัยทางตอนเหนือของภูมิภาค (NRRL, พีโอเรีย, IL, USA) Lactococcus lactis subsp
lactis CECT 539 (สายพันธุ์ที่ผลิตไนซิน), แลคโตบาซิลลัส Casei subsp CECT Casei
4043 (ความเครียดสูงกรดแลคติกที่ผลิต)Enterococcus faecium CECT 410 และ carnobacterium
piscicola CECT 4020 (ชีวิตเป้าหมายในการทดสอบการยับยั้งเชื้อแบคทีเรียกิจกรรม) เป็น
ที่ได้รับจากการเก็บรวบรวมวัฒนธรรมของสเปน (CECT) วัฒนธรรมต็อกของห้องปฏิบัติการ
สี่ถูกเก็บรักษาที่ -40 ◦ C ในน้ำซุปสารอาหารที่เสริมด้วย 15ml กลีเซอรอลต่อลิตร
ของกลาง วัฒนธรรมการทำงานไว้ที่ 4 ◦ C บนมนุษย์ rogosa และชาร์ป (MRS)
วุ้น (สำหรับ PED. acidilactici, l. lactis, lact. Casei และ c. piscicola) หรืออาหารเลี้ยงเชื้อ Rothe (สำหรับ ENT.
faecium) ได้เตรียมรายเดือนจากวัฒนธรรมหุ้นแช่แข็ง.

2.2 ความทนทานต่อกรด pH
สี่สายพันธุ์ที่อาจเกิดขึ้นได้รับการปลูกใน mrs (สำหรับ PED. acidilactici, l. lactis
และ lact. Casei) และ Rothe น้ำซุป (สำหรับ faecium ENT.) วันที่ 30 ◦ C ค้างคืนในหลอดวัฒนธรรมแล้ว
เพาะลงไปในกลางที่สอดคล้องกันสำหรับแต่ละสายพันธุ์ในช่วง 18 ชั่วโมง วัฒนธรรมถูก
หมุนเหวี่ยงที่ 5,000 × g เป็นเวลา 10 นาทีที่ 4 ◦ C, เม็ดล้างในการฆ่าเชื้อฟอสเฟตบัฟเฟอร์
น้ำเกลือ (PBS: โซเดียมฟอสเฟต monobasic 10mm, 10mm โซเดียมฟอสเฟต dibasic
โซเดียมคลอไรด์ 130mm, 7.2 pH) และ resuspended ในการฆ่าเชื้อพีบีเอส แต่ละสายพันธุ์จะเจือจาง
1/100 ในการฆ่าเชื้อพีบีเอสที่ pH 1.0, 2.0, 3.0, 4.0 และ 50 ครั้งบ่มเป็น 1, 2 และ 4 ชั่วโมง เจือจางอนุกรม
ทศนิยมในการฆ่าเชื้อพีบีเอสถูกจัดเตรียมและ aliquots (0.1 มล. ) จากเจือจางเป็นด่าง
แล้วเมื่อ mrs หรือ Rothe จานอาหารเลี้ยงเชื้อสำหรับการกำหนดจำนวนเซลล์ที่มีชีวิตรอด การทดลอง
ได้ซ้ำแล้วซ้ำอีกเป็นครั้งที่สองและการอ่านแต่ละเฉลี่ยของสามข้อสังเกต.

2.3 การเตรียมการของกระเพาะอาหารและน้ำผลไม้จำลองตับอ่อน
น้ำในกระเพาะอาหารและตับอ่อนได้เตรียมสดโดยการละลายน้ำย่อย (ซิกม่า) จาก
หมูกระเพาะอาหารเยื่อเมือก (3 g / l) และ pancreatin (ซิกม่า) จากตับอ่อนหมู (1 g / l) ในน้ำเกลือปลอดเชื้อ
(5 กรัม / ลิตร) ตามที่ อัลชาร์ต (1998) ต่อมา PHS ของการเตรียมการในกระเพาะอาหารและตับอ่อนอยู่ตามลำดับปรับ 2.0 และ 8.0 ด้วย 12m HCL หรือ
0.1m NaOH

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2. วัสดุและวิธีการ
2.1 สายพันธุ์แบคทีเรีย
Pediococcus acidilactici NRRL B-5627 (ต้องผลิต pediocin ใช้) ได้รับจาก
เหนือภูมิภาควิจัย (NRRL พี IL สหรัฐอเมริกา) Lactococcus lactis
ถั่ว lactis CECT 539 ต้อง (nisin ผลิตใช้), แลคโตบาซิลลัส casei ถั่ว casei CECT
4043 ต้อง (สูงผลิตกรดใช้), Enterococcus faecium CECT 410 และ Carnobacterium
piscicola CECT 4020 (มีชีวิตเป้าหมายในการวิเคราะห์ยาปฏิชีวนะกิจกรรม) ถูก
รับจากสเปนชนิดวัฒนธรรมชุด (CECT) หุ้นวัฒนธรรมของแล็บ 4
ถูกรักษาไว้ที่ −40 ◦C ในซุปธาตุอาหารเสริม มี 15mL ของกลีเซอรต่อลิตร
ของกลาง วัฒนธรรมการทำงานรักษาที่ ◦C 4 บนเดอแมน Rogosa และ Sharpe (นาง)
agar (สำหรับ Ped. acidilactici, L. lactis, Lact casei และ C. piscicola) หรือ Rothe agar (สำหรับเอนท์.
faecium) ได้เตรียมรายเดือนจากแช่แข็งหุ้นวัฒนธรรม

2.2 ค่าเผื่อค่า pH กรด
สี่อาจโปรไบโอติกส์สายพันธุ์ที่ปลูกใน MRS (สำหรับ Ped. acidilactici, L. lactis
และ Lact casei) และซุป Rothe (สำหรับเอนท์ faecium) ที่ 30◦C ค้างคืนในวัฒนธรรมหลอด แล้ว
subcultured เป็นสื่อที่สอดคล้องกันสำหรับแต่ละต้องใช้ระหว่าง 18 h วัฒนธรรมถูก
centrifuged ที่ 5000 × g ใน 10 นาทีที่ 4 ◦C ขี้ที่ล้างในกอซ buffered ฟอสเฟต
saline (PBS: monobasic ฟอสเฟตโซเดียม 10 มม. 10 มม.โซเดียมฟอสเฟต dibasic,
130 มม.โซเดียมคลอไรด์ pH 7.2), และ resuspended ใน PBS กอซ ต้องใช้แต่ละถูกทำให้เจือจาง
1/100 ใน PBS กอซที่ค่า pH 1.0, 2.0, 3.0, 4.0 และ 50. คณะทันตแพทยศาสตร์ครั้ง 1, 2 และ 4 h. ประจำ
dilutions ทศนิยมใน PBS กอซถูกเตรียมพร้อม และ aliquots (0.1 มล.) จากที่ dilutions ถูก
แล้ว ด่างบน MRS หรือ Rothe agar แผ่นกำหนดรอดเซลล์หมายเลข ใน
ทดลองถูกซ้ำสอง และอ่านแต่ละแทนค่าเฉลี่ยของ 3 สังเกต

2.3 เตรียมของจำลองในกระเพาะอาหารและน้ำผลไม้ pancreatic
Gastric และน้ำผลไม้ pancreatic ได้เตรียมสด โดยยุบเพพซิน (ซิกมา) จาก
mucosa ของกระเพาะอาหารช่วง (3 บัญชี) และ pancreatin (ซิกมา) จากตับอ่อนช่วง (1 g/L) ใน
ใส่น้ำเกลือ (5 g/L) ตาม Charteris et al. (1998) ในเวลาต่อมา pHs ของเตรียมในกระเพาะอาหาร และตับอ่อนได้ ตามลำดับ ปรับปรุง 2.0 และ 8.0 ด้วย 12 M HCl หรือ
0.1M NaOH

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2 . วัสดุและวิธีการ
2.1 . เกิดจากเชื้อแบคทีเรียพันธุ์
pediococcus acidilactici nrrl B -5627 (ความเมื่อยล้า pediocin - การผลิต)ได้มาจาก
ทางด้านเหนือใน ภูมิภาค การวิจัยในห้องปฏิบัติการ( nrrl , Peoria IL สหรัฐอเมริกา) lactococcus lactis
cect lactis subsp. 539 (ความเมื่อยล้า nisin - การผลิต)แลคโตบาซิลลัส( Lactobacillus ) casei subsp. casei cect
4043 (ความเมื่อยล้าสูงเกี่ยวกับนมกรด - การผลิต)enterococcus faecium cect 410 และ carnobacterium
piscicola cect 4020 (สัตว์เป้าหมายในพยายามต้านแบคทีเรียจากสิ่งมีชีวิตทำหน้าที่การทำงานของ)
ได้รับจากสเปน ประเภท วัฒนธรรมคอลเลคชั่น( cect ) วัฒนธรรมหุ้นของสี่ห้องปฏิบัติการ
ซึ่งจะช่วยให้มีการดูแลรักษาเป็นอย่างดีที่ 40 ◦c เพิ่มเติมในน้ำซุปสารอาหารพร้อมด้วย 15 มล.ของกลีซ - เออะรินต่อลิตร
มีขนาดกลาง วัฒนธรรมการทำงานได้รับการดูแลรักษาเป็นอย่างดีใน 4 ◦c บน de ชาย rogosa และ sharpe (นาง)
สาหร่ายทะเล(สำหรับ piscicola เป็ด. acidilactici L lactis lact . casei และ C .)หรือ rothe สาหร่ายทะเล(สำหรับ faecium Ent .
)ได้เตรียมความพร้อมทุกเดือนจากวัฒนธรรมหุ้นแช่แข็ง.

2.2 Fault Tolerance ไว้ด้วยเพื่อกรด pH
ที่สี่เป็นพันธุ์ชีวนะได้เติบโตในนาง(สำหรับเป็ด. acidilactici , L . lactis
และ lact . casei )และ rothe น้ำซุป(สำหรับ Ent . faecium )ที่ 30 ◦c พักค้างคืนในวัฒนธรรมท่อแล้ว
subcultured ในขนาดกลางที่เกี่ยวข้องสำหรับความเมื่อยล้าแต่ละคนในระหว่าง 18 ชั่วโมง
วัฒนธรรมที่มีเครื่องหมาย× centrifuged ที่ 5000 g สำหรับ 10 นาทีที่ 4 ◦c ,นัดกระสุนลูกปรายล้างฆ่าเชื้อขวดนมในฟอสเฟต - Buffered
น้ำเกลือ( PBS : 10 มม.โซเดียมฟอสเฟต monobasic , 10 มม.โซเดียมฟอสเฟต dibasic ,
130 มม.เกลือโซเดียมคลอไรด์, pH 7.2 ),และ resuspended pbs. ในฆ่าเชื้อขวดนม ดึงแต่ละ
1/100 เจือจางใน PBS ฆ่าเชื้อขวดนมที่ pH 1.0 2.0 3.0 4.0 และ 50 . เวลาแสดงระยะฟักตัวเป็น 1 , 2 และ 4 ชั่วโมง dilutions
ทศนิยม Serial ใน PBS ฆ่าเชื้อขวดนมได้เตรียมความพร้อมและ aliquots ( 0.1 มล.)จาก dilutions ที่ปรากฏให้เห็นในจำนวน rothe แผ่นสาหร่ายทะเลสำหรับการกำหนดเซลล์ยังคงหลงเหลืออยู่หรือนาง
แล้ว
การทดลองที่ถูกเล่นซ้ำอีกครั้งสองครั้งและอ่านหนังสือแต่ละแห่งจะแสดงถึงความหมายของสามการสังเกตการณ์.

2.3 การเตรียมการของย่อยจำลองและน้ำผลไม้คั้น pancreatic
ตามมาตรฐานย่อยและ pancreatic น้ำผัก - ผลไม้ได้จัดเตรียมขึ้นอย่างสดใหม่โดยบรรจุธาตุเพพ - ซิน( Six Sigma )จาก
porcine ท้อง mucosa ( 3 G / L )และ pancreatin ( Six Sigma )จาก porcine ตับอ่อน( 1 G / L )ใน
ฆ่าเชื้อขวดนมน้ำเกลือ( 5 G / L )ตาม charteris et al . ( 1998 ) ต่อมา phs ของการเตรียมตัวย่อยและ pancreatic ได้ตามลำดับการปรับ 2.0 และ 8.0 พร้อมด้วย 12 ม. HCL /หรือ
0.1 ม.โซดาไฟ