2.4. Screening of Endophytes for L-

2.4. Screening of Endophytes for L-Asparaginase Activity.
The plate assay method of Gulati et al. [22] was
adopted to screen fungal endophytes for L-asparaginase
activity on modified Czapek Dox’s (MCD) agar medium
(glucose—2.0 g/L, L-asparagine—10 g/L, potassium dihydrogen
phosphate (KH2PO4)—1.52 g/L, potassium chloride
(KCl)—0.52 g/L, magnesiumsulphate (MgSO4
⋅7H2O)—
0.52 g/L, copper nitrate (CuNO3
⋅3H2O)—0.001 g/L, zinc
sulphate (ZnSO4
⋅7H2O)—0.001 g/L, and ferrous sulphate
(FeSO4
⋅7H2O)—0.001 g/L) adjusted to a pH of 6.2. Phenol
red indicator (0.009%) was prepared from a stock solution of
2.5% of the dye in ethanol.The control plates were prepared
withMCDmediumdevoid of asparagine (instead containing
KNO3—0.001 g/L as the nitrogenous source) and phenol
red indicator to check the ability of test fungi to grow in
the medium. The mycelial plugs from four different fungi
were inoculated on MCD agar medium marked into four
quadrants. The plates were incubated at 27∘C for five days.
The colonies exhibiting pink zones were inoculated onMCD
agar medium plates to confirm the activity of enzyme prior
to estimation.
2.5. Enzyme Estimation by Nesslerization. The positive isolates
were cultured in MCD broth medium incubated at
30∘C in orbital shaker (GeNei, Bangalore) set at 120 rpm
for five days. L-asparaginase was estimated by Nesslerization
as described by Imada et al. [23]. The reaction mixture
containing 0.5mL of 0.04M L-asparagine, 0.5mL of 0.5M
Tris HCl buffer (pH 8.2), 0.5mL of enzyme, and 0.5mL
distilled water was incubated at 27∘C for 30min. 0.5mL of
1.5M trichloroacetic acid (TCA) was added to each reaction
tube to stop the reaction. 0.1mL was drawn from the above
reaction mixture tube to another tube to which 3.7mL of
distilledwater and 0.2mLofNessler’s reagentwere added and
incubated for 20 min. The optical density was read at 450nm
using UV-Visible spectrophotometer (TPL Technology Pvt.
Ltd., Bangalore). Blank tubes were prepared by adding the
enzyme after the addition of TCA. One international unit
(IU) of L-asparaginase is the amount of enzyme needed to
liberate one

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.4. การคัดกรองของ Endophytes สำหรับกิจกรรม L Asparaginaseเป็นวิธีการทดสอบแผ่นของ Gulati et al. [22]นำมาใช้กับจอ endophytes เชื้อราสำหรับ L asparaginaseกิจกรรมแก้ไข Czapek Dox ของ (MCD) วุ้นขนาดกลาง(กลูโคส — 2.0 g/L, L asparagine — 10 g/L โพแทสเซียมไดไฮโดรเจนฟอสเฟต (KH2PO4) — 1.52 g/L โพแทสเซียมคลอไรด์(KCl) — 0.52 g/L, magnesiumsulphate (MgSO4⋅7H2O) —ไนเตรท 0.52 แยก ทองแดง (CuNO3⋅3H2O) — 0.001 g/L สังกะสีซัลเฟต (ZnSO4⋅7H2O) — 0.001 g/L และซัลเฟตเหล็ก(FeSO4⋅7H2O) — 0.001 g/L) ปรับให้ค่า pH 6.2 ฟีนอลสแดง (0.009%) ถูกเตรียมจากสารละลาย stock2.5% ของสีย้อมในเอทานอล แผ่นควบคุมวจัดwithMCDmediumdevoid ของ asparagine (แทนประกอบด้วยKNO3 — 0.001 g/L เป็นแหล่งไนโตรเจน) และฟีนอลไฟแสดงสถานะสีแดงเพื่อตรวจสอบความสามารถของเชื้อทดสอบการเติบโตในตัวกลาง ปลั๊ก mycelial จากเชื้ออื่นที่สี่ถูก inoculated MCD กลางวุ้นที่ทำเครื่องหมายลงในสี่quadrants แผ่นได้รับการกกที่ 27∘C ห้าวันอาณานิคมแสดงโซนสีชมพูถูก inoculated onMCDเพื่อยืนยันการทำงานของเอนไซม์ก่อนแผ่นปานกลางวุ้นการประเมิน2.5. ประมาณเอนไซม์ โดย Nesslerization แยกเป็นค่าบวกถูกล้างใน MCD น้ำซุปที่ได้รับการกก30∘C ในวัติวง (GeNei บังกาลอร์) ที่ 120 รอบต่อนาทีห้าวัน L-asparaginase ประมาณ โดย Nesslerizationตามที่อธิบายไว้โดย Imada et al. [23] ส่วนผสมของปฏิกิริยาที่ประกอบด้วย 0.5mL ของ 0.04 M L-asparagine, 0.5mL 0.5 เมตรทริสเรทติ้ง HCl บัฟเฟอร์ (pH 8.2), 0.5mL ของเอนไซม์ และ 0.5mLน้ำกลั่นมี incubated ที่ 27∘C สำหรับ 30 นาที 0.5 มล.1.5 M trichloroacetic กรด (TCA) ถูกเพิ่มลงในแต่ละปฏิกิริยาหลอดเพื่อหยุดปฏิกิริยา 0.1 มล.มาจากข้างบนหลอดส่วนผสมไปอีกท่อไปที่ 3.7 มล.distilledwater และ 0.2mLofNessler ของ reagentwere เพิ่ม และรับการกก 20 นาที ความหนาแน่นออปติคอลถูกอ่านที่ 450nmใช้ UV เห็นสเปค (TPL เทคโนโลยี Pvtจำกัด บังกาลอร์) หลอดเปล่าวจัดทำขึ้น โดยการเพิ่มการเอนไซม์หลังจากการเพิ่มของ TCA หนึ่งหน่วยสากล(IU) ของ L-asparaginase คือจำนวนของเอนไซม์ที่จำเป็นในการปลดปล่อย