β-Carotene bleaching test
Antioxidant activity was determined using the β-carotene
bleaching test with some modifications [33,34]. Briefly,
1 mL of β-carotene solution (0.2 mg/mL in chloroform) was
added to 0.02 mL of linoleic acid and 0.2 mL of 100%
Tween 20. After evaporation of chloroform and dilution with
water, 5 mL of the emulsion was transferred into different
test tubes containing 0.2 mL of samples in 70% ethanol at
different concentrations. Standard (propyl gallate) at the
same concentration as samples was used for comparison. The
tubes were then gently shaken and placed at 45°C in a water
bath for 60 minutes. The absorbance of the samples, standard
and control, was measured at 470 nm using a Perkin Elmer
Lambda 40 UV/VIS spectrophotometer (Perkin Elmer,
Monza, Italy) against a blank, consisting of an emulsion
without β-carotene. The measurement was carried out at
initial time (t = 0) and successively at 30 and 60 minutes. All
samples were assayed in triplicate and the mean value was
calculated. The AA was measured in terms of successful
bleaching β-carotene by using the following equation:
AA = 1 − A0 − At ð Þ= A-0 − A-t ½ ð Þ × 100
where A0 and A°0 are the absorbance values measured at the
initial incubation time for samples/standard and control,
respectively. At and A°t are the absorbance values measured
in the samples/standard and control, respectively, at t = 30
minutes and t = 60 minutes.
2.8. Bovine brain peroxidation assay
The in vitro AA tests were carried out using the TBA test
[34] modified as reported by Conforti et al [33]. The TBA
reaction is based on the fact that peroxidation of most
membrane systems leads to formation of small amounts of
free malonaldehyde (MDA).MDAreacts with TBA to yield a
colored product, which in an acid environment absorbs light
at 532 nm and is readily extractable into organic solvents. The
intensity of color is a measure of MDA concentration.
Absorbance at 532 nm was determined on a Perkin Elmer
Lambda 40 UV/VIS spectrophotometer (Perkin Elmer,
Monza, Italy). The incorporation of any antioxidant compound
in the bovine brain peroxidation assay reaction
mixture will lead to a reduction of the extent of peroxidation.
The extract and fractions were tested for their AA against
liposomes that were prepared from bovine brain extract in
phosphate-buffered saline (5 mg/mL). Peroxidation was
started by adding FeCl3 (1 mmol/L) and ascorbic acid (1
mmol/L), followed by incubation at 37°C for 20 minutes.
Ascorbic acid is a well-known antioxidant, but it also has
prooxidant properties in the presence of certain transition
metal ions, such as Fe or Cu. Butylated hydroxytoluene
(BHT) in ethanol was added to prevent lipid peroxidation
during the TBA test itself. Propyl gallate (0.1 mmol/L) was
used as a positive control.
บีตา - แคโรทีน ฟอก
ทดสอบฤทธิ์ต้านบีตา - แคโรทีนถูกกำหนดโดยใช้การทดสอบกับการปรับเปลี่ยนบางอย่าง
[ 33,34 ] สั้น ๆ ,
1 มิลลิลิตรของบีตา - แคโรทีน ( 0.2 mg / ml ในสารละลายคลอโรฟอร์ม ) คือ
เพิ่ม 0.02 มิลลิลิตรของกรด linoleic และ 0.2 มล. 100 %
Tween 20 หลังจากการระเหยของคลอโรฟอร์มและเจือจางด้วยน้ำ 5 มิลลิลิตร
, อิมัลชันถูกถ่ายโอนลงในหลอดทดลองที่มีแตกต่างกัน
02 ml ของตัวอย่างในเอทานอล 70% ที่
ความเข้มข้นต่างกัน มาตรฐาน ( โพรพิลแกลเลต ) ที่ความเข้มข้นเดียวกัน
ตัวอย่างที่ใช้สำหรับการเปรียบเทียบ
แล้วเขย่าเบา ๆและหลอดวางไว้ที่ 45 ° C ในอ่างน้ำ
เป็นเวลา 60 นาที มีการดูดกลืนแสงของตัวอย่างมาตรฐานการควบคุม
และวัดที่ 470 nm ใช้เพอร์กินเอลเมอร์
แลมบ์ดา 40 UV / VIS Spectrophotometer ( เพอร์กินเอลเมอร์
Monza , ,อิตาลี ) กับเปล่าประกอบด้วยปริมาณบีตา - แคโรทีน
โดยไม่ต้อง . การวัดโดยใช้เวลาเริ่มต้นที่
( t = 0 ) และกระชั้นชิดที่ 30 และ 60 นาที ตัวอย่างทั้งหมด
ถูก assayed ทั้งสามใบและค่าเฉลี่ยอยู่ที่
คํานวณ AA เป็นวัดในแง่ของบีตา - แคโรทีนประสบความสำเร็จ
ฟอกโดยใช้สมการต่อไปนี้ :
1 A0 = −−ที่ðÞ = a-0 −½× 100
a-t ðÞที่ขนาด A0 และองศา 0 เป็นค่าวัดค่าการดูดกลืนแสงที่
เวลาในการบ่มเริ่มต้นตัวอย่าง / มาตรฐานและการควบคุม
ตามลำดับ และบริเวณที่ทีนค่าที่วัดได้
ในตัวอย่าง / มาตรฐานและการควบคุมตามลำดับที่ T
T = = 30 นาทีและ 60 นาที
2.8 . สมอง (
- ) ในหลอดทดลอง AA ทดสอบโดยใช้การทดสอบ
TBA[ 34 ] แก้ไขรายงานโดย CONFORTI et al [ 33 ] จาก TBA
ปฏิกิริยาจะขึ้นอยู่กับความจริงที่ว่าส่วนใหญ่ของระบบเมมเบรน -
นำไปสู่การก่อตัวของจํานวนเล็ก
มาโลนัลดีไฮด์ฟรี ( 2 ) mdareacts กับ TBA กับผลผลิตสี
ซึ่งในสภาพแวดล้อมที่เป็นกรดจะดูดซับแสง
ที่ 532 nm และพร้อมสกัดในตัวทำละลายอินทรีย์
ความเข้มของสีคือ การวัดความเข้มข้น 2 .
การดูดกลืนแสงที่ 532 นาโนเมตร ตัดสินใจใน เพอร์กินเอลเมอร์
แลมบ์ดา 40 UV / VIS Spectrophotometer ( เพอร์กินเอลเมอร์
, มอนซา , อิตาลี ) การผสมของสารต้านอนุมูลอิสระในวัวใช้สมอง
-
ปฏิกิริยาผสมจะนำไปสู่การลดลงของขอบเขตของ - .
สกัดและเศษส่วน ทดสอบของ AA กับ
ไลโปโซมที่เตรียมจากสารสกัดสมองวัวในฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (
5 mg / ml ) - คือ
เริ่มต้นด้วยการเพิ่ม FeCl3 ( 1 มิลลิโมล / ลิตร ) และกรดแอสคอร์บิค ( 1
mmol / L ) รองลงมา คือ บ่มที่ 37 ° C เป็นเวลา 20 นาที วิตามินซีเป็นสารต้านอนุมูลอิสระที่รู้จักกันดี
แต่มันยังมีคุณสมบัติ prooxidant ในการแสดงตนของไอออนโลหะเปลี่ยน
บางประเภท เช่น เหล็ก หรือ จุฬาฯ จักรภพ
( บาท ) ในเอทานอลเพิ่ม เพื่อป้องกันการเกิด lipid peroxidation
ในระหว่างการทดสอบ TBA นั่นเอง โพรพิลแกลเลต ( 0.1 มิลลิโมล / ลิตร ) คือ
ใช้เป็นตัวควบคุมบวก
การแปล กรุณารอสักครู่..