Most of the drought-inducible genes

Most of the drought-inducible genes studied to date also are induced by ABA. It appears that drought stress triggers the production of ABA, which, in turn, induces various genes. Cis- and trans-acting factors involved in ABA-induced gene expression have been analyzed (reviewed by Bray, 1997; Busk and Pages, 1998; Shinozaki and Yamaguchi-Shinozaki, 2000). Many ABA-inducible genes contain a conserved, ABA-responsive, cis-acting element named ABRE (ABA-responsive element; PyACGTGGC) in their promoter regions (Guiltinan et al., 1990; Mundy et al., 1990; Yamaguchi-Shinozaki et al., 1990). Recently, several groups isolated genes for the ABRE binding proteins that interact with ABRE and regulate gene expression (Hobo et al., 1999; Choi et al., 2000; Finkelstein and Lynch, 2000; Lopez-Molina and Chua, 2000; Uno et al., 2000). These ABRE binding proteins contain a similar DNA binding motif of basic domain/Leu zipper (bZIP) structure and three conserved regions in their N termini. These include rice TRAB and Arabidopsis AREB/ABF and ABI5 proteins. Phosphorylation of the proteins is required for their activation (Uno et al., 2000; Lopez-Molina et al., 2001).

The rd22 gene is a dehydration-responsive gene induced by the application of exogenous ABA to Arabidopsis plants (Yamaguchi-Shinozaki and Shinozaki, 1993). Because the induction of the rd22 gene by ABA is inhibited by the addition of cycloheximide, an inhibitor of protein biosynthesis, the induction of this gene apparently requires de novo protein biosynthesis for its expression under drought stress (Yamaguchi-Shinozaki and Shinozaki, 1993). Although regulation of the expression of many ABA-inducible genes has been postulated to involve the ABRE sequence in their promoter regions, rd22 does not contain any typical ABRE consensus sequence in its promoter. These results suggest the existence of a novel regulatory system for gene expression in response to ABA other than the ABRE-bZIP regulatory system in vegetative tissues under drought stress.

We have shown that a 67-bp promoter region of rd22 can regulate drought-inducible gene expression (Iwasaki et al., 1995). There is a MYC and a MYB recognition site within this 67-bp region. We have reported that the MYC and MYB recognition sites function as cis-acting elements in the drought-induced expression of the rd22 gene (Abe et al., 1997). We isolated cDNAs for a basic helix-loop-helix (bHLH)–related protein, rd22BP1 (renamed AtMYC2), and a MYB-related protein, AtMYB2 (Urao et al., 1993; Abe et al., 1997). The AtMYC2 protein and the AtMYB2 protein bound specifically to the MYC recognition site and the MYB recognition site, respectively, in the 67-bp region. Both AtMYC2 and AtMYB2 genes are induced by drought and by ABA treatment. A transient transactivation experiment using Arabidopsis leaf protoplasts demonstrated that both AtMYC2 and AtMYB2 activated the transcription of the β-glucuronidase reporter gene fused to the 67-bp region of the rd22 promoter (Abe et al., 1997). Moreover, coexpression of both AtMYC2 and AtMYB2 further transactivated the β-glucuronidase fusion gene (Abe et al., 1997). Regulation of gene expression by the cooperation of bHLH and MYB proteins may be another regulatory system in the ABA signaling pathway under drought and salt stress.

In the present study, we analyzed transgenic plants overexpressing AtMYC2 and/or AtMYB2 cDNA. All of these transgenic plants showed some ABA hypersensitivity. The plants overexpressing both AtMYC2 and AtMYB2 cDNAs showed stronger ABA hypersensitivity than those overexpressing either AtMYC2 or AtMYB2 cDNA alone. In these transgenic plants, the ABA-inducible gene expression of rd22 and AtADH1 (alcohol dehydrogenase1) was increased markedly. In addition, microarray analysis of the transgenic plants overexpressing both AtMYC2 and AtMYB2 cDNAs revealed that several ABA-inducible genes also are upregulated in the transgenic plants. A knockout mutant of AtMYC2 by Ds transposon was less sensitive to ABA. In this mutant, ABA-inducible expression of rd22 and AtADH1 was decreased significantly. These results indicate that both AtMYC2 and AtMYB2 proteins play important roles as transcription factors in ABA-regulated gene expression under drought and salt stress.

Go to:
RESULTS
Creation of Transgenic Plants Overexpressing the rd22BP1/AtMYC2 and/or AtMYB2 cDNAs

We generated transgenic plants in which the rd22BP1/AtMYC2 or AtMYB2 cDNA was overexpressed (35S:AtMYC2 and 35S:AtMYB2). In each case, we used kanamycin as a selection marker (Figure 1A). The AtMYC2 and AtMYB2 cDNAs were overexpressed under the control of the 35S promoter of Cauliflower mosaic virus. The Ω sequence of Tobacco mosaic virus was inserted upstream of these cDNAs to increase their translation level. Twenty-four and six transgenic Arabidopsis plants for AtMYB2 and AtMYC2, respectively, were generated using a vacuum infiltration method (Bechtold et al., 1993). For each line, 70 to 80 of the T2 see

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ของยีนแล้ง inducible ศึกษาวันยังมีเกิดจาก ABA ดูเหมือนว่า ความเครียดภัยแล้งก่อให้เกิดการผลิตของ ABA ซึ่ง ในทางกลับกัน ก่อให้เกิดยีนต่าง ๆ มีถูกวิเคราะห์ปัจจัย Cis และทรานส์ทำหน้าที่เกี่ยวข้องในการแสดงออกของยีนเกิด ABA (ทาน โดย Bray, 1997 Busk และ หน้า 1998 ชิโนะซะกิและยามางูจิชิโนะซะกิ 2000) ยีนหลาย ABA inducible ประกอบด้วยองค์ประกอบเป็นภัต สนอง ABA, cis ทำหน้าที่ชื่อ ABRE (ABA สนององค์ประกอบ PyACGTGGC) ในภูมิภาคของตนโปรโมเตอร์ (Guiltinan et al. 1990 Mundy et al. 1990 Yamaguchi-Shinozaki et al. 1990) เมื่อเร็ว ๆ นี้ หลายกลุ่มแยกยีนสำหรับโปรตีนรวม ABRE ที่โต้ตอบกับ ABRE และควบคุมการแสดงออกของยีน (Hobo et al. 1999 Choi et al. 2000 Finkelstein และ Lynch, 2000 โมลินานิเฟอร์โลเปซและชัว 2000 Uno et al. 2000) โปรตีนเหล่านี้ผูก ABRE ประกอบด้วยเป็นคล้ายดีเอ็นเอรวมรูปของโครงสร้างพื้นฐานเมน/ลิวซิป (bZIP) และสามภัตภูมิภาคในแตร์ของ N เหล่านี้รวมถึงข้าวโปรตีน TRAB และ Arabidopsis AREB/อาหาร เช้า และ ABI5 Phosphorylation ของโปรตีนจำเป็นสำหรับการใช้งาน (Uno et al. 2000 Lopez-Molina et al. 2001)Rd22 ยีนคือ ยีนตอบสนองต่อการคายน้ำที่เกิด โดยการใช้ ABA ภายนอกกับพืช Arabidopsis (ยามางูจิชิโนะซะกิและชิโนะซะกิ 1993) เนื่องจากการเหนี่ยวนำยีน rd22 โดย ABA ถูกห้ามโดย cycloheximide การยับยั้งการสังเคราะห์โปรตีน การเหนี่ยวนำยีนนี้นอกเหนือจากต้องมี de novo สังเคราะห์โปรตีนสำหรับการแสดงออกภายใต้เกิดปัญหาภัยแล้ง (ยามางูจิชิโนะซะกิและชิโนะซะกิ 1993) เห็นได้ชัด แม้ว่ากฎระเบียบของการแสดงออกของยีนหลาย ABA inducible มีรับ postulated จะเกี่ยวข้องกับลำดับ ABRE เขโปรโมเตอร์ rd22 ไม่ใช่ลำดับฉันทามติ ABRE ใดทั่วไปในของโปรโมเตอร์ ผลลัพธ์เหล่านี้แนะนำการดำรงอยู่ของระบบกำกับดูแลนวนิยายสำหรับการแสดงออกของยีนในการตอบสนอง ABA นอกเหนือจากระบบกำกับดูแล ABRE bZIP ในเนื้อเยื่อของพืชภายใต้ปัญหาภัยแล้งเราได้แสดงว่า บริเวณโปรโมเตอร์ 67-bp ของ rd22 สามารถควบคุมยีน inducible แล้ง (อิ et al. 1995) มี MYC แบบและไซต์การรู้ MYB ภายในภูมิภาคนี้ 67-bp เราได้รายงานว่า เว็บไซต์รู้ MYC และ MYB ทำเป็น cis-แสดงองค์ประกอบในการเกิดภัยแล้งแสดงออกของยีน rd22 (Abe et al. 1997) เราแยก cDNAs สำหรับเป็นพื้นฐานเกลียวห่วงเกลียว (bHLH) – โปรตีนที่เกี่ยวข้อง rd22BP1 (เปลี่ยนชื่อ AtMYC2), และเป็น โปรตีนที่เกี่ยวข้องกับ MYB, AtMYB2 (Urao et al. 1993 Abe et al. 1997) โปรตีน AtMYC2 และโปรตีน AtMYB2 กับเฉพาะเว็บไซต์ MYC การรู้และการรู้ไซต์ MYB ตามลำดับ ในภูมิภาค 67-bp ยีน AtMYC2 และ AtMYB2 ที่จะเกิดภัยแล้ง และ โดย ABA รักษา เป็น transactivation ชั่วคราวทดลองใช้ Arabidopsis พลาสต์ใบแสดงให้เห็นว่า ทั้ง AtMYC2 และ AtMYB2 เปิดใช้งานการถอดรหัสของยีน reporter β-glucuronidase ที่หลอมรวมเป็นเขต 67-bp ของโปรโมเตอร์ rd22 (Abe et al. 1997) นอกจากนี้ coexpression AtMYC2 และ AtMYB2 เพิ่มเติม transactivated ยีนβ-glucuronidase ฟิวชั่น (Abe et al. 1997) ควบคุมการแสดงออกของยีนโดยความร่วมมือของ bHLH และโปรตีน MYB อาจมีระบบกำกับดูแลอื่นใน ABA สัญญาณเดินภายใต้ภัยแล้งและความเครียดเกลือในการศึกษาปัจจุบัน เราวิเคราะห์จำลองพืช overexpressing cDNA AtMYC2 หรือ AtMYB2 ทั้งหมดของพืชจำลองเหล่านี้แสดงให้เห็นว่าบางแพ้ ABA พืช overexpressing cDNAs AtMYC2 และ AtMYB2 แสดงให้เห็นว่าภูมิแพ้ ABA แข็งแกร่งกว่าที่ overexpressing AtMYC2 หรือ AtMYB2 cDNA เพียงอย่างเดียว พืชเหล่านี้จำลอง ยีน ABA inducible rd22 และ AtADH1 (แอลกอฮอล์ dehydrogenase1) เพิ่มขึ้นอย่างเด่นชัด นอกจากนี้ microarray วิเคราะห์พืชจำลอง overexpressing cDNAs AtMYC2 และ AtMYB2 เปิดเผยว่า หลาย ABA inducible ยีนเป็น upregulated ในพืชจำลอง Mutant น่าพิศวงของ AtMYC2 โดย Ds transposon ถูกง่าย ABA ในนี้กลายพันธุ์ นิพจน์ ABA inducible rd22 และ AtADH1 ลดลงอย่างมีนัยสำคัญ ผลลัพธ์เหล่านี้บ่งชี้ว่า ทั้ง AtMYC2 และ AtMYB2 โปรตีนมีบทบาทสำคัญเป็นปัจจัยในการถอดรหัสในการแสดงออกของยีนที่ควบคุม ABA ภายใต้ภัยแล้งและความเครียดเกลือลุยเลย:ผลลัพธ์สร้างของจำลองพืช Overexpressing rd22BP1/AtMYC2 หรือ AtMYB2 cDNAsเราสร้างจำลองพืชที่ rd22BP1/AtMYC2 หรือ AtMYB2 cDNA คือ overexpressed (35S:AtMYC2 และ 35S:AtMYB2) ในแต่ละกรณี เราใช้กานามัยซินเป็นเครื่องหมายที่ตัวเลือก (รูปที่ 1A) CDNAs AtMYC2 และ AtMYB2 ได้ overexpressed ภายใต้การควบคุมของโปรโมเตอร์ 35S ของไวรัสโมเสกกะหล่ำ แทรกลำดับΩของยาสูบต้นน้ำของ cDNAs เหล่านี้เพื่อเพิ่มระดับการแปล ยี่สิบสี่ และหกจำลอง Arabidopsis พืชสำหรับ AtMYB2 และ AtMYC2 ตามลำดับ สร้างโดยใช้วิธีการแทรกซึมสูญญากาศ (Bechtold et al. 1993) สำหรับแต่ละบรรทัด 70-80 ของดู T2

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ส่วนใหญ่ของยีนแล้ง inducible ศึกษาถึงวันนอกจากนี้ยังเกิดจากสถาบันการเงิน ปรากฏว่าความเครียดภัยแล้งเป็นต้นเหตุของการผลิตของสถาบันการเงินซึ่งในการเปิดเจือจางยีนต่างๆ Cis- และทรานส์การแสดงปัจจัยที่เกี่ยวข้องใน ABA เหนี่ยวนำให้เกิดการแสดงออกของยีนได้รับการวิเคราะห์ (การตรวจสอบโดยเบรย์, 1997; Busk และหน้า 1998; Shinozaki และยามากูชิ Shinozaki, 2000) ยีน ABA-inducible จำนวนมากมีป่าสงวน ABA ตอบสนององค์ประกอบ CIS ที่ออกฤทธิ์ชื่อ Abre (ABA ตอบสนององค์ประกอบ; PyACGTGGC) ในภูมิภาคโปรโมเตอร์ของพวกเขา (Guiltinan, et al, 1990;.. Mundy, et al, 1990; ยามากูชิ Shinozaki et al., 1990) ยีนเมื่อเร็ว ๆ นี้หลายกลุ่มที่แยกสำหรับโปรตีน Abre ผูกที่โต้ตอบกับ Abre และควบคุมการแสดงออกของยีน (กุ๊ย et al, 1999;. Choi et al, 2000;. Finkelstein และลินช์ 2000 โลเปซโมลินาและ Chua 2000; Uno et al., 2000) เหล่านี้ Abre โปรตีนมีดีเอ็นเอที่คล้ายกันผูกพันบรรทัดฐานของ / Leu ซิป (bzip) โครงสร้างพื้นฐานและโดเมนสามภูมิภาคในป่าสงวนปลายทางของพวกเขายังไม่มี เหล่านี้รวมถึงข้าวและ TRAB Arabidopsis AREB / เช้าและโปรตีน ABI5 phosphorylation ของโปรตีนเป็นสิ่งจำเป็นสำหรับการเปิดใช้งานของพวกเขา (Uno et al, 2000;.. โลเปซโมลินา, et al, 2001).

ยีน rd22 เป็นยีนคายน้ำตอบสนองที่เกิดจากการประยุกต์ใช้ ABA ภายนอกเพื่อพืช Arabidopsis (ยามากูชิ Shinozaki และ Shinozaki, 1993) เพราะการเหนี่ยวนำของยีน rd22 โดยสถาบันการเงินถูกยับยั้งโดยนอกเหนือจาก cycloheximide ที่ยับยั้งการสังเคราะห์โปรตีน, การเหนี่ยวนำของยีนนี้เห็นได้ชัดว่าต้องใช้เดอโนโวสังเคราะห์โปรตีนสำหรับการแสดงออกของตนภายใต้ความเครียดภัยแล้ง (ยามากูชิและ Shinozaki Shinozaki, 1993) แม้ว่าการควบคุมการแสดงออกของยีน ABA-inducible จำนวนมากที่ได้รับการกล่าวอ้างที่จะเกี่ยวข้องกับลำดับ Abre ในภูมิภาคโปรโมเตอร์ของพวกเขา rd22 ไม่ได้มีทั่วไปลำดับฉันทามติใด ๆ ใน Abre โปรโมเตอร์ของมัน ผลการศึกษานี้ชี้ให้เห็นการดำรงอยู่ของระบบการกำกับดูแลใหม่สำหรับการแสดงออกของยีนในการตอบสนอง ABA อื่นที่ไม่ใช่ระบบการกำกับดูแล Abre-bzip ในเนื้อเยื่อพืชภายใต้ความเครียดภัยแล้ง.

เราได้แสดงให้เห็นว่าภูมิภาคโปรโมเตอร์ 67 bp ของ rd22 สามารถควบคุมยีนแล้ง inducible การแสดงออก (Iwasaki et al., 1995) มี MYC และเว็บไซต์ที่ได้รับการยอมรับ MYB ภายในภูมิภาคนี้ 67 bp เป็น เราได้รายงานว่า MYC และ MYB เว็บไซต์การรับรู้ทำงานเป็นองค์ประกอบ CIS ที่ออกฤทธิ์ในการแสดงออกของภัยแล้งที่เกิดขึ้นของยีน rd22 นี้ (เอ็บ et al., 1997) เราแยก cDNAs สำหรับพื้นฐานเกลียววงเกลียว (bHLH) โปรตีนที่เกี่ยวข้องกับ, rd22BP1 (เปลี่ยนชื่อ AtMYC2) และโปรตีน MYB ที่เกี่ยวข้องกับ AtMYB2 (Urao et al, 1993;.. อาเบะ, et al, 1997) โปรตีน AtMYC2 และโปรตีน AtMYB2 ผูกพันเฉพาะไปยังเว็บไซต์ที่ได้รับการยอมรับ MYC และเว็บไซต์ที่ได้รับการยอมรับ MYB ตามลำดับในภูมิภาค 67 bp ทั้งสอง AtMYC2 และ AtMYB2 ยีนที่เกิดจากภัยแล้งและการรักษา ABA การทดลอง transactivation ชั่วคราวโดยใช้โปรโตพลา Arabidopsis ใบแสดงให้เห็นว่าทั้งสอง AtMYC2 และ AtMYB2 เปิดใช้งานการถอดรหัสยีนนักข่าวβ-glucuronidase หลอมละลายไปยังภูมิภาค 67 bp ของ rd22 โปรโมเตอร์ (เอ็บ et al., 1997) นอกจากนี้ coexpression ของทั้งสอง AtMYC2 และ AtMYB2 เพิ่มเติม transactivated ยีนβ-glucuronidase ฟิวชั่น (อาเบะ et al., 1997) กฎระเบียบของการแสดงออกของยีนโดยความร่วมมือของ bHLH และโปรตีน MYB อาจจะเป็นอีกระบบการกำกับดูแลสถาบันการเงินในเส้นทางการส่งสัญญาณภายใต้ภัยแล้งและความเครียดเกลือ.

ในการศึกษาปัจจุบันเราวิเคราะห์พืชดัดแปรพันธุกรรม overexpressing AtMYC2 และ / หรือ AtMYB2 cDNA ทั้งหมดของพืชดัดแปรพันธุกรรมเหล่านี้แสดงให้เห็นว่าบางโรคภูมิแพ้ ABA พืช overexpressing ทั้ง AtMYC2 และ AtMYB2 cDNAs แสดงให้เห็นว่าภาวะภูมิไวเกิน ABA แข็งแกร่งกว่าผู้ overexpressing ทั้ง AtMYC2 หรือ AtMYB2 ยีนเพียงอย่างเดียว ในพืชดัดแปรพันธุกรรมเหล่านี้การแสดงออกของยีน ABA-inducible ของ (dehydrogenase1 แอลกอฮอล์) และ rd22 AtADH1 เพิ่มขึ้นอย่างเห็นได้ชัด นอกจากนี้การวิเคราะห์ microarray ของพืชดัดแปรพันธุกรรม overexpressing ทั้ง AtMYC2 และ AtMYB2 cDNAs เปิดเผยว่ายีนหลาย ABA-inducible ยัง upregulated ในพืชดัดแปรพันธุกรรม กลายพันธุ์ที่น่าพิศวงของ AtMYC2 โดย Ds transposon น้อยไวต่อ ABA ในกลายพันธุ์นี้แสดงออก ABA-inducible ของ rd22 และ AtADH1 ลดลงอย่างมีนัยสำคัญ ผลการศึกษานี้แสดงให้เห็นว่าทั้งสอง AtMYC2 และ AtMYB2 โปรตีนมีบทบาทสำคัญเป็นถอดความปัจจัยในการแสดงออกของยีน ABA ควบคุมภายใต้ภัยแล้งและความเครียดเกลือ.

ไปที่:
ผล
การสร้างพืชดัดแปรพันธุกรรม overexpressing rd22BP1 / AtMYC2 และ / หรือ AtMYB2 cDNAs

เราสร้างพืชดัดแปรพันธุกรรมใน ซึ่ง rd22BP1 / AtMYC2 หรือ AtMYB2 cDNA ถูก overexpressed (35S: AtMYC2 และ 35S: AtMYB2) ในแต่ละกรณีที่เราใช้เป็นเครื่องหมายกานามัยซิเลือก (รูปที่ 1A) AtMYC2 และ AtMYB2 cDNAs ถูก overexpressed ใต้การควบคุมของผู้ก่อการ 35S กะหล่ำไวรัสกระเบื้องโมเสค ลำดับΩของยาสูบไวรัสโมเสกถูกแทรกต้นน้ำของ cDNAs เหล่านี้เพื่อเพิ่มระดับการแปลของพวกเขา ยี่สิบสี่หกพืชดัดแปรพันธุกรรมสำหรับ Arabidopsis AtMYB2 และ AtMYC2 ตามลำดับถูกสร้างขึ้นโดยใช้วิธีการแทรกซึมสูญญากาศ (Bechtold et al., 1993) สำหรับแต่ละบรรทัด 70-80 ของ T2 เห็น

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ที่สุดของภัยแล้ง inducible ยีนเรียนวันที่ก็จะเกิดจาก 2 . ปรากฎว่าภาวะแล้ง ก่อให้เกิดการผลิต การเงิน ซึ่ง จะทำให้ยีนต่าง ๆ ทรานส์ - รักษาการ CIS และปัจจัยที่เกี่ยวข้องใน aba กระตุ้นการแสดงออกของยีนได้ถูกวิเคราะห์ ( ตรวจสอบโดย Bray , 1997 ; แสดงละครหรือดนตรีในที่สาธารณะและหน้า , 1998 ; ชิโนซากิ ชิโนซากิ และ ยามากูจิ , 2000 ) หลาย inducible ABA ยีนประกอบด้วยป่าสงวน ABA , ตอบสนอง , CIS ( ABA อ่อนไหวเปิดการแสดงองค์ประกอบของชื่อองค์ประกอบ pyacgtggc ) ในภูมิภาคโปรโมเตอร์ของพวกเขา ( guiltinan et al . , 1990 ; Mundy et al . , 1990 ; ยามาชิโนะซากิ et al . , 1990 ) เมื่อเร็ว ๆนี้หลายกลุ่มแยกยีนสำหรับโปรตีนที่จับเปิดที่โต้ตอบกับเปิดและการควบคุมการแสดงออกของยีน ( กุ๊ย et al . , 1999 ; Choi et al . , 2000 ; ฟิงกัลสไตน์ และ ลินช์ , 2000 ; โลเปซ และ โมลิน่า ฉั่ว , 2000 ; องค์การสหประชาชาติ et al . , 2000 ) เหล่านี้เปิดผูกพันโปรตีนประกอบด้วยคล้ายดีเอ็นเอมัดโดเมนแม่ลายของซิป / ลิวพื้นฐาน ( Bzip ) โครงสร้างและสามบริเวณอนุรักษ์ของ N แทร์มินี่ . เหล่านี้รวมถึง trab ข้าวและ Arabidopsis areb / อาหารเช้าและโปรตีน abi5 . ปฏิกิริยาฟอสโฟรีเลชันของโปรตีนเป็นสิ่งจำเป็นสำหรับการเปิดใช้งานของพวกเขา ( อูโน่ et al . , 2000 ; โลเปซ โมลิน่า et al . , 2001 )การ rd22 ยีนเป็นยีนที่เกิดจากการขาดการตอบสนองของ ABA ถึงภายนอก Arabidopsis พืช ( ยามางุจิ ชิโนซากิ ชิโนซากิและ , 1993 ) เนื่องจากการเหนี่ยวนำของ rd22 ยีนโดย ABA คือ ยับยั้ง โดยนอกเหนือจาก ร้อยเรียง การยับยั้งของการสังเคราะห์โปรตีน , การชักนำให้ยีนนี้เห็นได้ชัดว่าต้องมี de โนโวโปรตีนระดับในการแสดงออกภายใต้แล้ง ( ชิโนซากิ ชิโนซากิ ยามากูจิ และ พ.ศ. 2536 ) แม้ว่าการควบคุมการแสดงออกของยีนหลาย ABA inducible ได้ซึ่งเกี่ยวข้องกับเปิดลำดับในภูมิภาคโปรโมเตอร์ของพวกเขา rd22 ไม่ประกอบด้วยลำดับเอกฉันท์เปิดปกติของโปรโมเตอร์ ผลลัพธ์เหล่านี้ชี้ให้เห็นการมีอยู่ของระบบกฎระเบียบใหม่สำหรับการแสดงออกของยีนที่ตอบสนองต่อ ABA นอกจากเปิด Bzip ระบบกฎหมายในเนื้อเยื่อพืช ภายใต้ภาวะแล้ง .เราได้แสดงให้เห็นว่าการ rd22 BP 67 เขต สามารถควบคุมการแสดงออกของยีน ( ภัยแล้ง inducible ในต่าง et al . , 1995 ) มีมิคและ myb รับรู้ภายในเว็บไซต์นี้ 67 / ภูมิภาค เรามีรายงานว่ามิค myb รับรู้และฟังก์ชันที่เป็นองค์ประกอบในการแสดงเว็บไซต์ CIS แล้งชักนำการแสดงออกของยีน ( rd22 อาเบะ et al . , 1997 ) เราแยก cdnas สำหรับพื้นฐานเกลียววงเกลียว ( bhlh ) - โปรตีนที่เกี่ยวข้อง rd22bp1 ( เปลี่ยนชื่อ atmyc2 ) และ myb เกี่ยวข้องกับโปรตีน atmyb2 ( urao et al . , 1993 ; อาเบะ et al . , 1997 ) การ atmyc2 โปรตีนและโปรตีน atmyb2 ผูกพันเฉพาะเพื่อมิครับรู้เว็บไซต์และเว็บไซต์ที่ได้รับการยอมรับ myb ตามลำดับ ใน 67 / ภูมิภาค และทั้ง atmyc2 atmyb2 ยีนที่เกิดจากภัยแล้งและ ABA บำบัด มี transactivation ทดลองใช้โปรโตพลาสต์ใบ Arabidopsis แสดงให้เห็นว่าทั้ง atmyc2 atmyb2 เปิดและ mRNA ของยีนบีตา - นักข่าวที่มีอวัยวะผสมกับ 67 BP ภูมิภาคของ rd22 โปรโมเตอร์ ( อาเบะ et al . , 1997 ) นอกจากนี้ coexpression ทั้ง atmyc2 atmyb2 เพิ่มเติมและ transactivated และบีตา - ยีนฟิวชั่นที่มีอวัยวะ ( อาเบะ et al . , 1997 ) การควบคุมการแสดงออกของยีนโดยความร่วมมือของ bhlh myb โปรตีนและอาจอีกระบบกฎหมายใน ABA ส่งสัญญาณทางภายใต้ความแห้งแล้งและเกลือ ความเครียดในการศึกษาครั้งนี้เราวิเคราะห์พันธุกรรมพืช overexpressing atmyc2 และ / หรือ atmyb2 ยีน . ทั้งหมดของพืชดัดแปลงพันธุกรรมเหล่านี้ ABA พบ 1 . พืชและ overexpressing ทั้ง atmyc2 atmyb2 พบ 1 cdnas ABA แข็งแกร่งกว่า overexpressing ให้ atmyc2 หรือ atmyb2 cDNA คนเดียว ในพืชดัดแปรพันธุกรรมเหล่านี้ ABA inducible การแสดงออกของยีนและ rd22 atadh1 ( แอลกอฮอล์ dehydrogenase1 ) เพิ่มขึ้นอย่างเห็นได้ชัด นอกจากนี้การวิเคราะห์ microarray ของพืชทั้งต้นและ overexpressing atmyc2 atmyb2 cdnas เปิดเผยว่า หลาย inducible ABA ยัง upregulated ยีนในพืชข้ามพันธุ์ . สุดยอด atmyc2 กลายพันธุ์โดย DS คือความไวน้อยไป ? ? ? ? ? 2 . ใน aba inducible กลายพันธุ์ และการแสดงออกของ rd22 atadh1 ลดลงอย่างมีนัยสำคัญ ผลลัพธ์เหล่านี้บ่งชี้ว่า ทั้ง atmyc2 atmyb2 โปรตีน และมีบทบาทสำคัญที่เป็นปัจจัยการถอดความในการควบคุมการแสดงออกของยีน ABA ภายใต้ความแห้งแล้งและเกลือ ความเครียดไปที่ :ผลลัพธ์การสร้างพืชข้ามพันธุ์ overexpressing ที่ rd22bp1 / atmyc2 และ / หรือ atmyb2 cdnasเราสร้างโรงงานอุตสาหกรรม ซึ่งใน rd22bp1 / atmyc2 หรือ atmyb2 cDNA ถูกกับ ( และ 35s : atmyc2 35s : atmyb2 ) ในแต่ละกรณี เราใช้เหตุผล เป็นเครื่องหมายที่เลือก ( รูปที่ 1A ) และที่ atmyc2 atmyb2 กับ cdnas อยู่ภายใต้การควบคุมของโปรโมเตอร์ 35s ของกะหล่ำดอก mosaic virus การΩลำดับของยาสูบทำด้วยโมเสคไวรัสถูกแทรกเหนือ cdnas เหล่านี้เพื่อเพิ่มระดับการแปลของตนเอง ยี่สิบสี่และหกพืช Arabidopsis ยีนและสำหรับ atmyb2 atmyc2 ตามลำดับ ถูกสร้างขึ้นโดยใช้วิธีดูดซึม ( เบ็กโทลด์ et al . , 1993 ) สำหรับแต่ละบรรทัด 70 ถึง 80 ของ T2 ดู