2.5.2. Multiplex primer extension r

2.5.2. Multiplex primer extension reaction
Detection of the 10 HBA2 mutations was performed using two 10-
plex PEXT reactions covering 5 of the mutations (10 alleles) each.
Multiplex 10-plex primer extension reactions were performed in a
total volume of 20 μL containing 1 U of Amplitaq DNA polymerase,
Stoffel fragment, 1 × PCR buffer (10 mM Tris–HCl, 10 mM KCl,
pH 8.3), 4 mM MgCl2, 0.1 pmol of amplified DNA, 1 pmol each of 10
allele-specific primers, 10 μM each of dATP, dCTP, dGTP and 5 μM
dTTP and biotin-11-dUTP. The cycling conditions for the extension reactions
were as follows: initial denaturation 95 °C for 2 min, followed by
10 cycles of 95 °C for 15 s, 60 °C for 15 s, 72 °C for 15 s. All primer extension
reaction products were subjected to a final denaturation step at
95 °C for 10 min and placed immediately on ice before the dipstick
assay.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.5.2 การ multiplex ปฏิกิริยาต่อพื้นตรวจหาการกลายพันธุ์ HBA2 10 ทำใช้สอง 10-ครอบคลุม 5 ของการกลายพันธุ์ (10 alleles) แต่ละปฏิกิริยา PEXT เพล็กซ์ปฏิกิริยาต่อรองพื้น 10-เพล็กซ์ multiplex ได้ดำเนินการในการปริมาตรรวมของ 20 μL ประกอบด้วย 1 U Amplitaq เอ็นเอพอลิเมอเรสส่วน Stoffel บัฟเฟอร์ 1 × PCR (10 mM ตรี – HCl, KCl, 10 มม.pH 8.3), 4 mM MgCl2, pmol 0.1 เอ็นเอาต์ 1 pmol ละ 10allele เฉพาะไพรเมอร์ 10 μM ละ dATP, dCTP, dGTP และ 5 μMdTTP และ dUTP ไบโอติน-11 เงื่อนไขสำหรับปฏิกิริยาต่อการขี่จักรยานมีดังนี้: denaturation เริ่มต้น 95 ° C สำหรับ 2 นาที ตามด้วยรอบ 10 ของ 95 ° C 15 s, 60 ° C 15 s, 72 ° C 15 s ส่วนขยายของพื้นทั้งหมดผลิตภัณฑ์ปฏิกิริยาถูกต้องขั้นตอน denaturation ขั้นสุดท้ายที่95 ° C น้ำแข็งวางไว้ในทันทีก่อน dipstick และ 10 นาทีวิเคราะห์

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.5.2 ไพรเมอร์ขยาย Multiplex
ปฏิกิริยาการตรวจหาการกลายพันธุ์10 HBA2 ได้ดำเนินการโดยใช้สอง 10
ปฏิกิริยา PEXT เพล็กซ์ที่ครอบคลุมที่ 5 ของการกลายพันธุ์ (10 อัลลีล) แต่ละ.
Multiplex ไพรเมอร์ 10
เพล็กซ์ปฏิกิริยาขยายได้ดำเนินการในปริมาณรวมของ20 ไมโครลิตรมี 1 ยู Amplitaq ดีเอ็นเอโพลิเมอร์,
ส่วน Stoffel 1 ×บัฟเฟอร์ PCR (10 มิลลิ Tris-HCl 10 มิลลิ KCl,
pH 8.3) 4 มิลลิ MgCl2 0.1 pmol ดีเอ็นเอขยาย 1 pmol แต่ละ 10
ไพรเมอร์อัลลีลที่เฉพาะเจาะจง 10 ไมครอนแต่ละ dATP, dCTP, dGTP และ 5 ไมครอน
dTTP และไบโอติน-11-dUTP เงื่อนไขการขี่จักรยานสำหรับปฏิกิริยาการขยายมีดังนี้ denaturation เริ่มต้น 95 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 2 นาทีตามด้วย 10 รอบของ 95 ° C เป็นเวลา 15 วินาที, 60 ° C เป็นเวลา 15 วินาที, 72 ° C เป็นเวลา 15 วินาที ไพรเมอร์ส่วนขยายทั้งหมดผลิตภัณฑ์ปฏิกิริยาถูกยัดเยียดให้เป็นขั้นตอนสุดท้าย denaturation ที่ 95 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 10 นาทีและวางไว้บนน้ำแข็งก่อนที่จะ dipstick ทดสอบ

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

งานวาง . การตรวจหาปฏิกิริยา PCR ไพรเมอร์
10 hba2 การกลายพันธุ์ การใช้สอง 10 -
เพล็กซ์ pext ปฏิกิริยาครอบคลุม 5 ของการกลายพันธุ์ ( 10 อัลลีล ) แต่ละ มัลติเพล็กซ์ ขยาย 10
รองพื้นปฏิกิริยาแสดงใน
ปริมาณ 20 μ L มี 1 U ของ amplitaq DNA polymerase
stoffel PCR ส่วน บัฟเฟอร์ 1 × ( 10 มม. หรือ 10 มม. และ HCl , KCl
pH 8.3 มม. ) 4 ชุด , 0 .1 pmol ดีเอ็นเอ amplified 1 pmol แต่ละอัลลีลไพรเมอร์จำเพาะ 10
10 μ M แต่ละ datp dctp dgtp , , และ 5 μ M
dttp และ biotin-11-dutp . จักรยานเงื่อนไขสําหรับปฏิกิริยาส่งเสริม
ดังนี้ ( เริ่มต้นที่ 95 องศา C เป็นเวลา 2 นาที ตามด้วย
10 รอบ 95 องศา C เป็นเวลา 15 วินาที , 60 ° C เป็นเวลา 15 วินาที , 72 ° C เป็นเวลา 15 วินาที ใช้นามสกุล
ทั้งหมดปฏิกิริยาของผลิตภัณฑ์ถูกขั้นตอนสุดท้าย ( ที่ 95 องศา C
10 นาทีและอยู่ได้ทันทีบนน้ำแข็งก่อนโง่
( . . .