2. Material and methodsOut of pragm

2. Material and methods
Out of pragmatism and in order to have operational
names in order to communicate about monophyletic
subsets of species within the large genus Miltogramma
(sensu lato), we are here using the generic classification
of Verves (1994) at the subgeneric level. We are thus
using Pediasiomyia as a subgeneric name to cover the
assemblage of species studied in the present paper. An
alternative would have been to use informal names for
species-groups.
Adult females were collected in the northern part of
the Negev Desert (southern Israel) in May 2004.
Behavioural observations and collecting of M. chrysochlamys
(Rohdendorf) (eight specimens) and Miltogramma
przhevalskyi (Rohdendorf) (five specimens)
were carried out in Ein Avdat National Park, close to
the dry river bed of Nahal Zin. The single specimen of
Miltogramma margiana (Rohdendorf) was collected in
Makhtesh Ramon National Reserve in the dry Nahal
Ramon river bed. To obtain larvae, freshly caught
females were kept individually in 3 ml Eppendorf tubes
with finely perforated cover. During the following days,
females, if gravid, spontaneously and repeatedly larviposited,
and the first instar larvae were immediately
collected and processed as explained below. After the
death of the females, additional larvae were extracted
from their abdomen by gently squeezing the abdomen.
All females were subsequently pinned and labelled
(deposited in the Natural History Museum of Denmark,
Zoological Museum). Larvae were killed by soaking in
ARTICLE IN PRESS
260 K. Szpila, T. Pape / Zoologischer Anzeiger 247 (2008) 259–273
hot water (about 95 1C) to extend the pseudocephalon
and avoid subsequent deformation when stored in 80%
alcohol.
In the case of M. chrysochlamys, where all larvae
obtained were unhatched, the egg shell was removed
manually before the larva was prepared for SEM (only
successful in two cases).
Preserved larvae were slide-mounted in Hoyer’s
medium on concave slides for conventional light
microscopy. Preparation for SEM involved dehydration
through 80%, 90% and 99.5% ethanol and either
critical-point drying in CO2 (M. chrysochlamys,
M. margiana) or soaking for 2 30 min in hexamethyldisilazane
(HMDS) followed by air-drying under a fume
hood (M. przhevalskyi). The larvae were eventually
sputter-coated with platinum (M. chrysochlamys, M.
margiana) or carbon (M. przhevalskyi), and SEM pictures
were taken with the use of a HITACHI
S-4700 scanning microscope (Figs. 3A–G and 4A–G)
and a JEOL JSM 6335F field emission microscope (other
SEM pictures). Illustrations were produced from photographs
made with the use of a digital Nikon Coolpix 8400
camera mounted on a Nikon Eclipse E200 microscope.
Larval terminology follows Courtney et al. (2000)
with a few modifications proposed by Szpila and Pape
(2005a, b, 2007). A character matrix was produced based
on both larval and adult characters, with adult
characters retrieved for the present purpose but not
discussed further. Terminal taxa included in the ingroup
were the three species of subgenus Pediasiomyia studied
plus three European species of Miltogramma (sensu
stricto) for which first instars were available (Szpila,
unpublished). Outgroup taxa were chosen among the
few genera where first instars have been documented
(Szpila and Pape 2005a, b, 2007) and where observations
are directly comparable. Phylogenetic analysis was done
with TNT (version 1.0; Goloboff et al. 2003) using the
implicit enumeration algorithm under collapsing rule 4.
Resampling analyses for branch support were done with
10,000 replicates, applying standard bootstrap settings
and choosing a removal probability of 36 for the
jackknife analysis.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2. วัสดุและวิธีการจาก pragmatism และต้องดำเนินงานชื่อเพื่อการสื่อสารเกี่ยวกับ monophyleticชุดย่อยของสปีชีส์ในสกุลใหญ่ Miltogramma(sensu ลลาลา), เราอยู่ที่นี่ใช้การจัดประเภททั่วไปของ Verves (1994) ที่ระดับ subgeneric เราจะทำใช้ Pediasiomyia เป็นชื่อ subgeneric เพื่อให้ครอบคลุมการผสมผสานพันธุ์ศึกษาในเอกสารปัจจุบัน มีทางเลือกจะมีการใช้ชื่ออย่างไม่เป็นทางการกลุ่มสายพันธุ์หญิงผู้ใหญ่ถูกรวบรวมไว้ในภาคเหนือของNegev Desert (ประเทศอิสราเอล) ใน 2547 พฤษภาคมสังเกตพฤติกรรมและเก็บรวบรวม chrysochlamys เมตร(Rohdendorf) (แปด specimens) และ Miltogrammaprzhevalskyi (Rohdendorf) (ห้าไว้เป็นตัวอย่าง)ได้ดำเนินการในไอน์ Avdat อุทยานแห่งชาติ ใกล้เตียงน้ำแห้งของ Nahal Zin ตัวอย่างหนึ่งของMiltogramma margiana (Rohdendorf) รวบรวมไว้ในสงวนแห่งชาติ Ramon Makhtesh ใน Nahal แห้งRamon ริเวอร์เบด เพื่อให้ได้ตัวอ่อน สดใหม่หญิงถูกเก็บไว้แยกต่างหากในหลอด 3 ml Eppendorfมีปก perforated ประณีต ในระหว่างวันดังต่อไปนี้หญิง ถ้า gravid ธรรมชาติ และซ้ำ ๆ larvipositedและตัวอ่อน instar แรกทันทีรวบรวม และประมวลผลตามที่อธิบายไว้ด้านล่าง หลังจากถูกสกัดตายของเพศหญิง ตัวอ่อนเพิ่มเติมจากท้องของพวกเขาโดย squeezing ท้องเบา ๆหญิงทั้งหมดได้มาตรึงไว้ และมัน(ฝากในใบประวัติพิพิธภัณฑ์ของเดนมาร์กพิพิธภัณฑ์สัตว์) ตัวอ่อนเสียชีวิตอย่างบทความในวารสารSzpila คุณ 260 ต.หน้า / แอนไซ Zoologischer 247 (2008) 259-273น้ำร้อน (ประมาณ 95 1C) เพื่อขยายการ pseudocephalonและหลีกเลี่ยงต่อมาแมพเมื่อเก็บอยู่ใน 80%แอลกอฮอล์ในกรณีของ M. chrysochlamys ซึ่งตัวอ่อนทั้งหมดได้รับ unhatched เปลือกไข่ถูกเอาออกก่อนหนอนไหมถูกเตรียมไว้สำหรับ SEM (เท่านั้นเองประสบความสำเร็จในสองกรณี)รักษาตัวอ่อนถูกติดภาพนิ่งในของ Hoyerสื่อบนภาพนิ่งที่เว้าสำหรับแสงธรรมดาmicroscopy การ การเตรียมการสำหรับ SEM เกี่ยวข้องกับการคายน้ำเอทานอล 80%, 90% และ 99.5% และอย่างใดอย่างหนึ่งสำคัญจุดแห้งใน CO2 (M. chrysochlamysM. margiana) หรือแช่ 2 30 นาทีใน hexamethyldisilazane(HMDS) ตาม air-drying ภายใต้คำโตนดเครื่องดูดควัน (M. przhevalskyi) ตัวอ่อนได้ในที่สุดsputter เคลือบ ด้วยแพลทินัม (M. chrysochlamys, Mmargiana) หรือคาร์บอน (M. przhevalskyi), และรูปภาพ SEMถูกนำมาใช้ฮิตาชิเป็นS-4700 กล้องจุลทรรศน์สแกน (Figs. 3A – G และ 4A – G)และกล้องจุลทรรศน์มลพิษฟิลด์ JEOL JSM 6335F (อื่น ๆSEM ภาพ) ผลิตจากภาพถ่ายภาพประกอบทำให้ มีการใช้แบบดิจิตอล Nikon Coolpix 8400กล้องที่ติดตั้งบนกล้องจุลทรรศน์ Nikon คราส E200คำศัพท์ larval ตาม Courtney และ al. (2000)มีกี่แก้ไขที่เสนอ โดย Szpila และหน้า(2005a บี 2007) เมทริกซ์อักขระถูกผลิตตามในผู้ใหญ่ และ larval อักขระ กับผู้ใหญ่ตัวดึงข้อมูลสำหรับวัตถุประสงค์นำเสนอ แต่ไม่กล่าวเพิ่มเติม รวมในการ ingroup taxa เทอร์มินัลมีพันธุ์ subgenus Pediasiomyia ศึกษาสามพร้อมพันธุ์ยุโรปสาม Miltogramma (sensustricto) สำหรับที่ instars ได้ว่าง (Szpilaยกเลิกประกาศ) Outgroup taxa ที่ถูกเลือกในการบางสกุลที่ instars แรกมีการจัดทำเอกสาร(Szpila และหน้า 2005a บี 2007) และที่สังเกตจะเปรียบเทียบได้โดยตรง วิเคราะห์ phylogeneticด้วยภายหลัง (รุ่น 1.0 Goloboff et al. 2003) โดยใช้การขั้นตอนวิธีการแจงนับนัยภายใต้กฎ 4 ยุบเปลี่ยนความละเอียดของการวิเคราะห์การสนับสนุนสาขาทำด้วย10000 สามารถจำลอง ใช้การตั้งค่าเริ่มต้นระบบมาตรฐานและเลือกการเอาออกน่า 36 สำหรับการjackknife วิเคราะห์

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2. วัสดุและวิธีการ
ออกจากการปฏิบัติและเพื่อให้มีการดำเนินงานที่
ชื่อเพื่อสื่อสารเกี่ยวกับไฟย์เลติ
ย่อยของสปีชีส์ที่อยู่ในประเภทที่มีขนาดใหญ่ Miltogramma
(วงศ์) เราอยู่ที่นี่โดยใช้การจัดหมวดหมู่ทั่วไป
ของ Verves (1994) ที่ระดับ subgeneric . เราจึง
ใช้ Pediasiomyia เป็นชื่อ subgeneric เพื่อให้ครอบคลุม
การชุมนุมของสายพันธุ์ที่ศึกษาในกระดาษในปัจจุบัน
ทางเลือกที่จะได้รับในการใช้ชื่อทางการสำหรับ
สายพันธุ์กลุ่ม.
หญิงผู้ใหญ่ถูกเก็บไว้ในทางตอนเหนือของ
ทะเลทรายเนเกฟ (ทางตอนใต้ของอิสราเอล) พฤษภาคม 2004.
การสังเกตพฤติกรรมและการจัดเก็บภาษีของ M. chrysochlamys
(Rohdendorf) (แปดตัวอย่าง) และ Miltogramma
przhevalskyi (Rohdendorf) (ห้าตัวอย่าง)
ได้ดำเนินการใน Ein Avdat อุทยานแห่งชาติใกล้กับ
แม่น้ำเตียงแห้งของ Nahal Zin ตัวอย่างเดียวของ
Miltogramma MARGIANA (Rohdendorf) ได้รับการรวบรวมไว้ใน
Makhtesh สงวนแห่งชาติในรามอน Nahal แห้ง
แม่น้ำเตียงรามอน ที่จะได้รับตัวอ่อนสดๆ
หญิงถูกเก็บไว้เป็นรายบุคคลใน 3 หลอดมล Eppendorf
กับปกพรุนประณีต ในช่วงวันที่ต่อไปนี้
หญิงตั้งครรภ์ถ้า, ธรรมชาติและซ้ำ ๆ larviposited,
และตัวอ่อนวัยแรกทันที
ที่เก็บรวบรวมและประมวลผลตามที่อธิบายไว้ด้านล่าง หลังจาก
การตายของหญิงตัวอ่อนเพิ่มเติมสกัด
จากท้องของพวกเขาโดยการบีบเบา ๆ ท้อง.
หญิงทั้งหมดถูกตรึงต่อมาและติดป้าย
(ฝากไว้ในพิพิธภัณฑ์ประวัติศาสตร์ธรรมชาติของเดนมาร์ก,
พิพิธภัณฑ์สัตว์และแมลง) ตัวอ่อนที่ถูกฆ่าตายโดยการแช่ใน
บทความในข่าว
260 เค Szpila ต Pape / Zoologischer Anzeiger 247 (2008) 259-273
น้ำร้อน (ประมาณ 95 1C) เพื่อขยาย pseudocephalon
และหลีกเลี่ยงความผิดปกติต่อมาเมื่อเก็บไว้ใน 80%
เครื่องดื่มแอลกอฮอล์.
ใน กรณีของเอ็ม chrysochlamys ที่ตัวอ่อนทั้งหมด
ที่ได้รับเป็น unhatched, เปลือกไข่จะถูกลบออก
ด้วยตนเองก่อนที่ตัวอ่อนกำลังเตรียมพร้อมสำหรับการ SEM (เฉพาะ
ที่ประสบความสำเร็จในสองกรณี).
ตัวอ่อนดองถูกสไลด์ติดตั้งในของ Hoyer
กลางบนสไลด์เว้าสำหรับแสงธรรมดา
กล้องจุลทรรศน์ การเตรียมการสำหรับ SEM ที่เกี่ยวข้องกับการสูญเสียน้ำ
ผ่าน 80%, 90% และเอทานอล 99.5% และทั้ง
การอบแห้งที่สำคัญจุดใน CO2 (M. chrysochlamys,
M. MARGIANA) หรือแช่สำหรับ 2 30 นาทีใน hexamethyldisilazane
(HMDS) ตามด้วยเครื่องอบแห้งภายใต้ ควัน
เครื่องดูดควัน (เอ็ม przhevalskyi) ตัวอ่อนที่ถูกที่สุดก็
พ่นเคลือบด้วยทองคำขาว (เอ็ม chrysochlamys, M.
MARGIANA) หรือคาร์บอน (เอ็ม przhevalskyi) และภาพ SEM
ถูกถ่ายด้วยการใช้ HITACHI
S-4700 กล้องจุลทรรศน์สแกน (มะเดื่อ. 3A-G และ 4A -G)
และข้อมูล JEOL JSM 6335F กล้องจุลทรรศน์ปล่อยก๊าซเรือนกระจกอื่น ๆ (
ภาพ SEM) ภาพประกอบที่ผลิตจากภาพถ่าย
ที่ทำด้วยการใช้ดิจิตอล Nikon Coolpix 8400
กล้องติดตั้งอยู่บนกล้องจุลทรรศน์ Nikon คราส E200.
คำศัพท์ตัวอ่อนต่อไปนี้ Courtney และคณะ (2000) ได้
มีการปรับเปลี่ยนไม่กี่ที่เสนอโดย Szpila และ Pape
(2005a, B, 2007) เมทริกซ์ตัวละครที่ถูกผลิตตาม
ตัวอักษรทั้งตัวอ่อนและตัวเต็มวัยมีผู้ใหญ่
ดึงตัวอักษรเพื่อวัตถุประสงค์ในปัจจุบัน แต่ไม่ได้
กล่าวถึงต่อไป แท็กซ่าร์มินัลรวมอยู่ในกลุ่มภายใน
มีสามชนิดของ subgenus Pediasiomyia ศึกษา
บวกสามสายพันธุ์ยุโรป Miltogramma (sensu
stricto) ที่วัยแรกที่มีอยู่ (Szpila,
ไม่ถูกเผยแพร่) แท็กซ่า outgroup ได้รับการแต่งตั้งในหมู่
จำพวกไม่กี่ที่ที่แรกวัยได้รับการรับรอง
(Szpila และ Pape 2005a, B, 2007) และการสังเกตที่
มีการเทียบเคียงโดยตรง การวิเคราะห์ความสัมพันธ์ทางวิวัฒนาการที่ทำ
กับทีเอ็นที (รุ่น 1.0; Goloboff et al, 2003.) โดยใช้
ขั้นตอนวิธีการแจงนับนัยภายใต้การปกครองยุบ 4.
Resampling วิเคราะห์สำหรับการสนับสนุนสาขาได้ทำกับ
10,000 ซ้ำการประยุกต์ใช้การตั้งค่าการบูตมาตรฐาน
และการเลือกน่าจะเป็นการกำจัดของ 36
การวิเคราะห์พับ

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2 . วัสดุและวิธีการ
ออกจากที่และเพื่อมีชื่อปฏิบัติการ
เพื่อสื่อสารเกี่ยวกับ monophyletic
ย่อยชนิดภายในขนาดใหญ่สกุล miltogramma
( เซ็นสุ lato ) ที่นี่เราใช้ทั่วไปหมวดหมู่
ของ verves ( 1994 ) ที่ระดับ subgeneric . เราจึงใช้ชื่อตาม pediasiomyia

subgeneric ครอบคลุมประชาคมของสายพันธุ์ที่ศึกษาในกระดาษปัจจุบัน
เป็นทางเลือกก็คงจะใช้ชื่ออย่างไม่เป็นทางการสำหรับ

กลุ่มชนิด ผู้ใหญ่เพศหญิง ศึกษาในภาคเหนือของ
Negev ทะเลทราย ( ภาคใต้ของอิสราเอล ) ในเดือนพฤษภาคม 2547
สังเกตพฤติกรรมการเก็บของ chrysochlamys
( rohdendorf ) ( 8 ชิ้น ) และ miltogramma
przhevalskyi ( rohdendorf ) ( 5 ชิ้น )
) ดำเนินการในอุทยานแห่งชาติไอน์ฟดัตปิด

,เตียงแม่น้ำแห้งของ nahal ซิน . ตัวเดียว
miltogramma margiana ( rohdendorf ) เก็บข้อมูลใน
makhtesh ราโมนป่าสงวนแห่งชาติในบริการ nahal
ราโมนแม่น้ำ เพื่อให้ได้ตัวอ่อน จับสด
เพศเมีย เก็บไว้เป็นรายบุคคลใน 3 ml เพนดอร์ฟหลอด
ปกเจาะอย่างประณีต ในช่วงต่อไปนี้วัน
เพศหญิง ถ้าตั้งครรภ์เอง และหลายครั้ง larviposited
,และตัวอ่อนวัยแรกทันที
เก็บรวบรวมและประมวลผลตามที่อธิบายไว้ด้านล่าง หลังจากการตายของหญิง

จาก ตัวอ่อนเพิ่มเติมที่ท้อง โดยค่อย ๆ บีบท้อง เพศเมีย และต่อมา
ทั้งหมดตรึง labelled
( ฝากในพิพิธภัณฑ์ประวัติศาสตร์ธรรมชาติของเดนมาร์ก
Zoological Museum ) ตัวอ่อนที่ถูกฆ่าตายโดยการแช่ในบทความใน 260 K .

กด szpila Tเพ็ป / zoologischer anzeiger 247 ( 2008 ) 259 – 273
น้ำอุ่น ( ประมาณ 95 1C ) เพื่อขยายและหลีกเลี่ยงการ pseudocephalon
ตามมาเมื่อเก็บไว้ในแอลกอฮอล์ 80%
.
ในกรณีที่ของ chrysochlamys ที่ทุกคนที่ได้ยังไม่ฟักเป็นตัวหนอน

, เปลือกไข่จะถูกลบออกด้วยตนเองก่อนลูกเตรียมสำหรับ SEM ( เฉพาะ
ประสบความสำเร็จในทั้งสองกรณี ) .
ดอง ~ i ) ติดตั้งใน ฮอยเออร์ของ
สไลด์สไลด์กลางบนเว้าสำหรับกล้องจุลทรรศน์แสง
ปกติ การเตรียมการสำหรับ SEM เกี่ยวข้อง dehydration
ผ่าน 80% , 90% และเอทานอล 99.5% และทั้ง
จุดวิกฤติแห้ง CO2 ( ม. chrysochlamys
M , margiana ) หรือแช่ 2 30 นาทีในเฮกซาเมทิลไดซิลาเซน
( hmds ) ตามด้วยอากาศแห้งภายใต้ควันเครื่องดูดควัน ( เมตร
przhevalskyi ) ตัวอ่อนในที่สุด
ละล่ำละลักเคลือบด้วยแพลทินัม ( chrysochlamys เมตร ,M .
margiana ) หรือ คาร์บอน ( ม. przhevalskyi ) และภาพ SEM
ถูก ด้วยการใช้ของ Hitachi
s-4700 กล้องจุลทรรศน์ ( Figs 3A 4A G ( g ) และ (
และจอล JSM 6335f ด้านมลพิษกล้องจุลทรรศน์ ( ภาพ SEM อื่น
) ภาพประกอบที่ถูกผลิตจากภาพถ่าย
ด้วยการใช้ดิจิตอล Nikon Coolpix 8400
กล้องเมาท์ Nikon คราส
e200 กล้องจุลทรรศน์คำศัพท์ตัวอ่อนตาม Courtney et al . ( 2000 )
ด้วยการปรับเปลี่ยนบางอย่างที่เสนอโดย szpila และ Pape
( 2005a , B , 2007 ) ตัวอักษรเมทริกซ์ถูกผลิตจากทั้งหนอนและผู้ใหญ่

ตัวละคร ตัวละคร กับผู้ใหญ่ในวัตถุประสงค์ปัจจุบันแต่ไม่ใช่
กล่าวเพิ่มเติม เทอร์มินัลและรวมอยู่ในกลุ่ม
เป็นสามชนิดของ subgenus pediasiomyia เรียน
บวกสามชนิดของยุโรป miltogramma ( เซ็นสุ
stricto ) ซึ่งวัยแรกเป็นใช้ได้ ( szpila
, ประกาศ ) กลุ่มและเลือกระหว่างสกุลที่วัยน้อย

( ก่อนได้รับเอกสารและ szpila Pape 2005a , B , 2007 ) และที่สังเกต
เทียบได้โดยตรง การวิเคราะห์ phylogenetic า
กับ TNT ( รุ่น 1.0 ; goloboff et al . 2003 ) โดยใช้
ขั้นตอนวิธีการยุบโดยปริยาย ภายใต้กฎ 4 .
สุ่มซ้ำวิเคราะห์สนับสนุนสาขาเสร็จ

10 ซ้ำ การใช้มาตรฐานและการเลือกการตั้งค่าบูตสแตรปความน่าจะเป็น 36 สำหรับ

การวิเคราะห์มีดพับ .