- ข้อความ
- ประวัติศาสตร์
2. Materials and methods2.1. Isolat
2. Materials and methods
2.1. Isolation of putative probiotic strain S12
2.1.1. Shrimp, bacteria, culture media and reagents
Farmed white shrimp L. vannamei, with an average body weight
of 10 g, were obtained from the Aquatic Product Market in Zhuhai,
China. Nutrient Broth (NB) and Tryptone Soy Broth (TSB) were
bought from Land Bridge Technology Co., Ltd, Beijing, China. The
origin of pathogens was given in Table 1. Aeromonas spp. was
cultivated and maintained in Nutrient broth. All of the Vibrio spp.
was cultured in TSB supplemented with 1.5% NaCl. The incubation
temperature was at 30 C. Isolation and antibacterial activity tests
were conducted by Kemin Industries (Zhuhai).
2.1.2. Isolation and screening of putative probiotics
Shrimps were washed with 70% ethanol before sampling the
intestine with sterile tweezers. One gram of intestine with digestive
contentwas suspended into 9 ml of sterile saline (0.85%w/v, NaCl) to
prepare the homogenate by using a glass homogenizer. One milliliter
of the suspension was serially diluted to 105, for each dilution,
200 ml suspension was sampled and spread onto the surface of TSB
agar. The plates were then incubated under aerobic conditions at
30 C for 24 h. A total of 54 bacterial colonies were obtained and all
of them were screened for inhibitory effects against Aeromonas
hydrophila ZS-1 by agar well diffusion assay [32]. Based on the best
performance of inhibitory efficacy, one of these bacterial isolates
marked as S12 was chosen to conduct the following antagonistic
experiments towards other aquatic animal pathogens.
2.1.3. Determination of antibacterial activity against aquatic animal
pathogens
The antibacterial activity of bacterial isolate S12 against other
pathogens listed in Table 1 was performed using agar well diffusion
method. Briefly, pathogenic strain including A. sobria, A. caviae,
A. hydrophila X1, A. hydrophila ZS-1 and Edwardsiella tarda was
cultured in NB Vibrio species including Vibrio anguillarum, Vibrio
vulnificus, Vibrio alginolyticus, Vibrio harveyi and Vibrio parahaemolyticus
were cultured in TSB supplemented with 1.5% of NaCl.
After incubation at 30 C for 20 h, the density of bacteria was
adjusted to approximately 10 8 CFU/ml and then 100 ml of bacterial
suspension with 20 ml melted NB or TSB agar was poured on a
sterilized Petri-dish. Wells of 6.0 mm in diameter were punched in
the agar with a sterile steel borer. Bacterium S12 was cultured in
TSB containing 1.5% NaCl and incubated at 30 C by shaking at
120 rpm for 20 h, Then 5 ml of broth culture was sampled and
centrifuged for 10 min at 10,000 rpm. Then 100 ml of supernatant
was taken from the tube and added into the well of agar plates
loaded with corresponding pathogens. All of the plates were
incubated in an incubator at 30 C overnight; the diameter of inhibition
zone was measured by vernier caliper.
2.1.4. Identification of bacterium S12
The morphological and biochemical characteristics of bacterium
S12 were tested according to Bergey's Manual of Systematic
Bacteriology Eighth Edition [33]. The genetic identification was
performed using 16S rDNA gene sequencing which was performed
by the Institute of Microbiology, Chinese Academy of Sciences,
Beijing, China. The nucleotide sequences of 16S rDNA were then
compared with the available sequences in the NCBI GenBank
database using BLAST and the phylogenetic treewas constructed by
using the Mega software package (Version 4.1).
2.2. Diet preparation and feeding trial
The composition of the basal diet is given in Table 2 and supplemented
with 0.3% antibiotic (Florfenicol, Keyang Biotechnology,
Wuhan, China), 5 109 cfu kg1，5 1010 cfu kg1 and
5 1011 cfu kg1 of S12 (PS1-3) respectively. All dried ingredients
2.1. Isolation of putative probiotic strain S12
2.1.1. Shrimp, bacteria, culture media and reagents
Farmed white shrimp L. vannamei, with an average body weight
of 10 g, were obtained from the Aquatic Product Market in Zhuhai,
China. Nutrient Broth (NB) and Tryptone Soy Broth (TSB) were
bought from Land Bridge Technology Co., Ltd, Beijing, China. The
origin of pathogens was given in Table 1. Aeromonas spp. was
cultivated and maintained in Nutrient broth. All of the Vibrio spp.
was cultured in TSB supplemented with 1.5% NaCl. The incubation
temperature was at 30 C. Isolation and antibacterial activity tests
were conducted by Kemin Industries (Zhuhai).
2.1.2. Isolation and screening of putative probiotics
Shrimps were washed with 70% ethanol before sampling the
intestine with sterile tweezers. One gram of intestine with digestive
contentwas suspended into 9 ml of sterile saline (0.85%w/v, NaCl) to
prepare the homogenate by using a glass homogenizer. One milliliter
of the suspension was serially diluted to 105, for each dilution,
200 ml suspension was sampled and spread onto the surface of TSB
agar. The plates were then incubated under aerobic conditions at
30 C for 24 h. A total of 54 bacterial colonies were obtained and all
of them were screened for inhibitory effects against Aeromonas
hydrophila ZS-1 by agar well diffusion assay [32]. Based on the best
performance of inhibitory efficacy, one of these bacterial isolates
marked as S12 was chosen to conduct the following antagonistic
experiments towards other aquatic animal pathogens.
2.1.3. Determination of antibacterial activity against aquatic animal
pathogens
The antibacterial activity of bacterial isolate S12 against other
pathogens listed in Table 1 was performed using agar well diffusion
method. Briefly, pathogenic strain including A. sobria, A. caviae,
A. hydrophila X1, A. hydrophila ZS-1 and Edwardsiella tarda was
cultured in NB Vibrio species including Vibrio anguillarum, Vibrio
vulnificus, Vibrio alginolyticus, Vibrio harveyi and Vibrio parahaemolyticus
were cultured in TSB supplemented with 1.5% of NaCl.
After incubation at 30 C for 20 h, the density of bacteria was
adjusted to approximately 10 8 CFU/ml and then 100 ml of bacterial
suspension with 20 ml melted NB or TSB agar was poured on a
sterilized Petri-dish. Wells of 6.0 mm in diameter were punched in
the agar with a sterile steel borer. Bacterium S12 was cultured in
TSB containing 1.5% NaCl and incubated at 30 C by shaking at
120 rpm for 20 h, Then 5 ml of broth culture was sampled and
centrifuged for 10 min at 10,000 rpm. Then 100 ml of supernatant
was taken from the tube and added into the well of agar plates
loaded with corresponding pathogens. All of the plates were
incubated in an incubator at 30 C overnight; the diameter of inhibition
zone was measured by vernier caliper.
2.1.4. Identification of bacterium S12
The morphological and biochemical characteristics of bacterium
S12 were tested according to Bergey's Manual of Systematic
Bacteriology Eighth Edition [33]. The genetic identification was
performed using 16S rDNA gene sequencing which was performed
by the Institute of Microbiology, Chinese Academy of Sciences,
Beijing, China. The nucleotide sequences of 16S rDNA were then
compared with the available sequences in the NCBI GenBank
database using BLAST and the phylogenetic treewas constructed by
using the Mega software package (Version 4.1).
2.2. Diet preparation and feeding trial
The composition of the basal diet is given in Table 2 and supplemented
with 0.3% antibiotic (Florfenicol, Keyang Biotechnology,
Wuhan, China), 5 109 cfu kg1，5 1010 cfu kg1 and
5 1011 cfu kg1 of S12 (PS1-3) respectively. All dried ingredients
0/5000
2. Materials and methods2.1. Isolation of putative probiotic strain S122.1.1. Shrimp, bacteria, culture media and reagentsFarmed white shrimp L. vannamei, with an average body weightof 10 g, were obtained from the Aquatic Product Market in Zhuhai,China. Nutrient Broth (NB) and Tryptone Soy Broth (TSB) werebought from Land Bridge Technology Co., Ltd, Beijing, China. Theorigin of pathogens was given in Table 1. Aeromonas spp. wascultivated and maintained in Nutrient broth. All of the Vibrio spp.was cultured in TSB supplemented with 1.5% NaCl. The incubationtemperature was at 30 C. Isolation and antibacterial activity testswere conducted by Kemin Industries (Zhuhai).2.1.2. Isolation and screening of putative probioticsShrimps were washed with 70% ethanol before sampling theintestine with sterile tweezers. One gram of intestine with digestivecontentwas suspended into 9 ml of sterile saline (0.85%w/v, NaCl) toprepare the homogenate by using a glass homogenizer. One milliliterof the suspension was serially diluted to 105, for each dilution,200 ml suspension was sampled and spread onto the surface of TSBagar. The plates were then incubated under aerobic conditions at30 C for 24 h. A total of 54 bacterial colonies were obtained and allof them were screened for inhibitory effects against Aeromonashydrophila ZS-1 by agar well diffusion assay [32]. Based on the bestperformance of inhibitory efficacy, one of these bacterial isolatesmarked as S12 was chosen to conduct the following antagonistic
experiments towards other aquatic animal pathogens.
2.1.3. Determination of antibacterial activity against aquatic animal
pathogens
The antibacterial activity of bacterial isolate S12 against other
pathogens listed in Table 1 was performed using agar well diffusion
method. Briefly, pathogenic strain including A. sobria, A. caviae,
A. hydrophila X1, A. hydrophila ZS-1 and Edwardsiella tarda was
cultured in NB Vibrio species including Vibrio anguillarum, Vibrio
vulnificus, Vibrio alginolyticus, Vibrio harveyi and Vibrio parahaemolyticus
were cultured in TSB supplemented with 1.5% of NaCl.
After incubation at 30 C for 20 h, the density of bacteria was
adjusted to approximately 10 8 CFU/ml and then 100 ml of bacterial
suspension with 20 ml melted NB or TSB agar was poured on a
sterilized Petri-dish. Wells of 6.0 mm in diameter were punched in
the agar with a sterile steel borer. Bacterium S12 was cultured in
TSB containing 1.5% NaCl and incubated at 30 C by shaking at
120 rpm for 20 h, Then 5 ml of broth culture was sampled and
centrifuged for 10 min at 10,000 rpm. Then 100 ml of supernatant
was taken from the tube and added into the well of agar plates
loaded with corresponding pathogens. All of the plates were
incubated in an incubator at 30 C overnight; the diameter of inhibition
zone was measured by vernier caliper.
2.1.4. Identification of bacterium S12
The morphological and biochemical characteristics of bacterium
S12 were tested according to Bergey's Manual of Systematic
Bacteriology Eighth Edition [33]. The genetic identification was
performed using 16S rDNA gene sequencing which was performed
by the Institute of Microbiology, Chinese Academy of Sciences,
Beijing, China. The nucleotide sequences of 16S rDNA were then
compared with the available sequences in the NCBI GenBank
database using BLAST and the phylogenetic treewas constructed by
using the Mega software package (Version 4.1).
2.2. Diet preparation and feeding trial
The composition of the basal diet is given in Table 2 and supplemented
with 0.3% antibiotic (Florfenicol, Keyang Biotechnology,
Wuhan, China), 5 109 cfu kg1，5 1010 cfu kg1 and
5 1011 cfu kg1 of S12 (PS1-3) respectively. All dried ingredients
experiments towards other aquatic animal pathogens.
2.1.3. Determination of antibacterial activity against aquatic animal
pathogens
The antibacterial activity of bacterial isolate S12 against other
pathogens listed in Table 1 was performed using agar well diffusion
method. Briefly, pathogenic strain including A. sobria, A. caviae,
A. hydrophila X1, A. hydrophila ZS-1 and Edwardsiella tarda was
cultured in NB Vibrio species including Vibrio anguillarum, Vibrio
vulnificus, Vibrio alginolyticus, Vibrio harveyi and Vibrio parahaemolyticus
were cultured in TSB supplemented with 1.5% of NaCl.
After incubation at 30 C for 20 h, the density of bacteria was
adjusted to approximately 10 8 CFU/ml and then 100 ml of bacterial
suspension with 20 ml melted NB or TSB agar was poured on a
sterilized Petri-dish. Wells of 6.0 mm in diameter were punched in
the agar with a sterile steel borer. Bacterium S12 was cultured in
TSB containing 1.5% NaCl and incubated at 30 C by shaking at
120 rpm for 20 h, Then 5 ml of broth culture was sampled and
centrifuged for 10 min at 10,000 rpm. Then 100 ml of supernatant
was taken from the tube and added into the well of agar plates
loaded with corresponding pathogens. All of the plates were
incubated in an incubator at 30 C overnight; the diameter of inhibition
zone was measured by vernier caliper.
2.1.4. Identification of bacterium S12
The morphological and biochemical characteristics of bacterium
S12 were tested according to Bergey's Manual of Systematic
Bacteriology Eighth Edition [33]. The genetic identification was
performed using 16S rDNA gene sequencing which was performed
by the Institute of Microbiology, Chinese Academy of Sciences,
Beijing, China. The nucleotide sequences of 16S rDNA were then
compared with the available sequences in the NCBI GenBank
database using BLAST and the phylogenetic treewas constructed by
using the Mega software package (Version 4.1).
2.2. Diet preparation and feeding trial
The composition of the basal diet is given in Table 2 and supplemented
with 0.3% antibiotic (Florfenicol, Keyang Biotechnology,
Wuhan, China), 5 109 cfu kg1，5 1010 cfu kg1 and
5 1011 cfu kg1 of S12 (PS1-3) respectively. All dried ingredients
การแปล กรุณารอสักครู่..
2. วัสดุและวิธีการ
2.1 การแยกสายพันธุ์โปรไบโอติกสมมุติ S12
2.1.1
กุ้งแบคทีเรียสื่อวัฒนธรรมและน้ำยาเพาะเลี้ยงกุ้งขาวกุ้งขาวที่มีน้ำหนักตัวเฉลี่ย
10
กรัมที่ได้รับจากตลาดสินค้าสัตว์น้ำในจูไห่ประเทศจีน ธาตุอาหารน้ำซุป (NB) และ Tryptone ถั่วเหลืองน้ำซุป (TSB)
ได้รับซื้อมาจากที่ดินสะพานเทคโนโลยีจำกัด , ปักกิ่ง, จีน
ที่มาของเชื้อโรคที่ได้รับในตารางที่ 1 Aeromonas spp
ได้รับการปลูกและเก็บรักษาไว้ในน้ำซุปสารอาหาร ทั้งหมดของเอสพีพี Vibrio.
ได้รับการเพาะเลี้ยงใน TSB เสริมด้วย 1.5% โซเดียมคลอไรด์ บ่มที่อุณหภูมิอยู่ที่ 30 องศาเซลเซียส
การแยกและการทดสอบฤทธิ์ต้านแบคทีเรียได้ดำเนินการโดย Kemin อุตสาหกรรม (Zhuhai). 2.1.2 การแยกและการตรวจคัดกรองของโปรไบโอติกสมมุติกุ้งถูกล้างด้วยเอทานอล 70% ก่อนที่จะสุ่มตัวอย่างลำไส้กับแหนบผ่านการฆ่าเชื้อ หนึ่งกรัมของลำไส้มีการย่อยอาหารcontentwas ระงับเป็น 9 มล. น้ำเกลือปลอดเชื้อ (0.85% w / v, โซเดียมคลอไรด์) เพื่อเตรียมความพร้อมhomogenate โดยใช้แก้วโฮโมจีไน หนึ่งมิลลิลิตรของการระงับถูกเจือจางลำดับ 10? 5 สำหรับการเจือจางแต่ละ 200 มลระงับเป็นตัวอย่างและการแพร่กระจายลงบนพื้นผิวของ TSB วุ้น แผ่นถูกบ่มแล้วภายใต้เงื่อนไขแอโรบิกที่30 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 24 ชั่วโมง รวมเป็น 54 โคโลนีของเชื้อแบคทีเรียที่ได้รับทั้งหมดของพวกเขาถูกคัดเลือกสำหรับผลยับยั้งเชื้อAeromonas hydrophila ZS-1 ด้วยวิธีการแพร่กระจายได้ดีวุ้น [32] ขึ้นอยู่กับการที่ดีที่สุดในการปฏิบัติงานของการรับรู้ความสามารถยับยั้งหนึ่งของเชื้อแบคทีเรียเหล่านี้ทำเครื่องหมายเป็นS12 ได้รับเลือกให้ดำเนินการดังต่อไปนี้ปฏิปักษ์ทดลองต่อเชื้อโรคสัตว์น้ำอื่นๆ . 2.1.3 ความมุ่งมั่นของฤทธิ์ต้านแบคทีเรียกับสัตว์น้ำเชื้อโรคกิจกรรมต้านเชื้อแบคทีเรียของแบคทีเรียที่แยกS12 กับอื่น ๆเชื้อโรคที่ระบุไว้ในตารางที่ 1 ได้รับการดำเนินการโดยใช้อาหารเลี้ยงเชื้อแพร่กระจายได้ดีวิธีการ สั้น ๆ , สายพันธุ์ที่ทำให้เกิดโรครวมทั้ง sobria เอเชื้อ Aeromonas เอเอ hydrophila X1, A. hydrophila ZS-1 และ Edwardsiella tarda เป็นที่เลี้ยงในNB ชนิดเชื้อ Vibrio anguillarum รวมทั้งเชื้อ Vibrio, Vibrio vulnificus, Vibrio alginolyticus, Vibrio harveyi และ Vibrio parahaemolyticus ถูกเลี้ยงใน TSB เสริมด้วย 1.5% ของโซเดียมคลอไรด์. หลังจากการบ่มที่อุณหภูมิ 30 องศาเซลเซียส 20 ชั่วโมงความหนาแน่นของเชื้อแบคทีเรียที่ได้รับการปรับประมาณ10 8 CFU / มล. และ 100 มล. แล้วของแบคทีเรียระงับ20 มล. ละลาย NB หรืออาหารเลี้ยงเชื้อ TSB ถูกเทในการฆ่าเชื้อโลจาน เวลส์ 6.0 มมถูกเจาะในอาหารเลี้ยงเชื้อที่มีหนอนเจาะเหล็กผ่านการฆ่าเชื้อ S12 เป็นแบคทีเรียที่เลี้ยงในTSB ที่มีโซเดียมคลอไรด์ 1.5% และบ่มที่อุณหภูมิ 30 องศาเซลเซียสโดยการเขย่าที่120 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 20 ชั่วโมงจากนั้น 5 มล. ของวัฒนธรรมน้ำซุปเป็นตัวอย่างและปั่นเป็นเวลา10 นาทีที่ 10,000 รอบต่อนาที แล้ว 100 มิลลิลิตรใสถูกนำมาจากท่อและเพิ่มเข้าไปในบ่อที่แผ่นวุ้นเต็มไปด้วยเชื้อโรคที่สอดคล้องกัน ทั้งหมดของแผ่นที่ถูกบ่มในตู้อบที่ 30 องศาเซลเซียสในชั่วข้ามคืน; เส้นผ่าศูนย์กลางยับยั้งโซนโดยวัดจาก vernier caliper. 2.1.4 บัตรประจำตัวของแบคทีเรีย S12 ลักษณะทางสัณฐานวิทยาและชีวเคมีของแบคทีเรียS12 ได้รับการทดสอบตามคู่มือ Bergey ของระบบแบคทีเรียแปดฉบับ[33] บัตรประจำตัวทางพันธุกรรมที่ได้รับการดำเนินการโดยใช้ 16S rDNA ลำดับยีนซึ่งดำเนินการโดยสถาบันจุลชีววิทยาจีนAcademy of Sciences, กรุงปักกิ่งประเทศจีน ลำดับเบสของ 16S rDNA ถูกแล้วเมื่อเทียบกับลำดับที่มีอยู่ในGenBank NCBI ฐานข้อมูลโดยใช้ระเบิดและ treewas phylogenetic สร้างขึ้นโดยใช้แพคเกจซอฟต์แวร์เมกะ(เวอร์ชั่น 4.1). 2.2 การเตรียมอาหารและการทดลองให้อาหารองค์ประกอบของอาหารพื้นฐานที่จะได้รับในตารางที่ 2 และตบท้ายด้วยยาปฏิชีวนะที่0.3% (Florfenicol, Keyang เทคโนโลยีชีวภาพ, หวู่ฮั่น, จีน) 5? 109 กก. cfu? 1.5? 1010 cfu กก. 1 และ5? 1,011 กิโลกรัม cfu 1 ของ S12 (PS1-3) ตามลำดับ ส่วนผสมทั้งหมดแห้ง
2.1 การแยกสายพันธุ์โปรไบโอติกสมมุติ S12
2.1.1
กุ้งแบคทีเรียสื่อวัฒนธรรมและน้ำยาเพาะเลี้ยงกุ้งขาวกุ้งขาวที่มีน้ำหนักตัวเฉลี่ย
10
กรัมที่ได้รับจากตลาดสินค้าสัตว์น้ำในจูไห่ประเทศจีน ธาตุอาหารน้ำซุป (NB) และ Tryptone ถั่วเหลืองน้ำซุป (TSB)
ได้รับซื้อมาจากที่ดินสะพานเทคโนโลยีจำกัด , ปักกิ่ง, จีน
ที่มาของเชื้อโรคที่ได้รับในตารางที่ 1 Aeromonas spp
ได้รับการปลูกและเก็บรักษาไว้ในน้ำซุปสารอาหาร ทั้งหมดของเอสพีพี Vibrio.
ได้รับการเพาะเลี้ยงใน TSB เสริมด้วย 1.5% โซเดียมคลอไรด์ บ่มที่อุณหภูมิอยู่ที่ 30 องศาเซลเซียส
การแยกและการทดสอบฤทธิ์ต้านแบคทีเรียได้ดำเนินการโดย Kemin อุตสาหกรรม (Zhuhai). 2.1.2 การแยกและการตรวจคัดกรองของโปรไบโอติกสมมุติกุ้งถูกล้างด้วยเอทานอล 70% ก่อนที่จะสุ่มตัวอย่างลำไส้กับแหนบผ่านการฆ่าเชื้อ หนึ่งกรัมของลำไส้มีการย่อยอาหารcontentwas ระงับเป็น 9 มล. น้ำเกลือปลอดเชื้อ (0.85% w / v, โซเดียมคลอไรด์) เพื่อเตรียมความพร้อมhomogenate โดยใช้แก้วโฮโมจีไน หนึ่งมิลลิลิตรของการระงับถูกเจือจางลำดับ 10? 5 สำหรับการเจือจางแต่ละ 200 มลระงับเป็นตัวอย่างและการแพร่กระจายลงบนพื้นผิวของ TSB วุ้น แผ่นถูกบ่มแล้วภายใต้เงื่อนไขแอโรบิกที่30 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 24 ชั่วโมง รวมเป็น 54 โคโลนีของเชื้อแบคทีเรียที่ได้รับทั้งหมดของพวกเขาถูกคัดเลือกสำหรับผลยับยั้งเชื้อAeromonas hydrophila ZS-1 ด้วยวิธีการแพร่กระจายได้ดีวุ้น [32] ขึ้นอยู่กับการที่ดีที่สุดในการปฏิบัติงานของการรับรู้ความสามารถยับยั้งหนึ่งของเชื้อแบคทีเรียเหล่านี้ทำเครื่องหมายเป็นS12 ได้รับเลือกให้ดำเนินการดังต่อไปนี้ปฏิปักษ์ทดลองต่อเชื้อโรคสัตว์น้ำอื่นๆ . 2.1.3 ความมุ่งมั่นของฤทธิ์ต้านแบคทีเรียกับสัตว์น้ำเชื้อโรคกิจกรรมต้านเชื้อแบคทีเรียของแบคทีเรียที่แยกS12 กับอื่น ๆเชื้อโรคที่ระบุไว้ในตารางที่ 1 ได้รับการดำเนินการโดยใช้อาหารเลี้ยงเชื้อแพร่กระจายได้ดีวิธีการ สั้น ๆ , สายพันธุ์ที่ทำให้เกิดโรครวมทั้ง sobria เอเชื้อ Aeromonas เอเอ hydrophila X1, A. hydrophila ZS-1 และ Edwardsiella tarda เป็นที่เลี้ยงในNB ชนิดเชื้อ Vibrio anguillarum รวมทั้งเชื้อ Vibrio, Vibrio vulnificus, Vibrio alginolyticus, Vibrio harveyi และ Vibrio parahaemolyticus ถูกเลี้ยงใน TSB เสริมด้วย 1.5% ของโซเดียมคลอไรด์. หลังจากการบ่มที่อุณหภูมิ 30 องศาเซลเซียส 20 ชั่วโมงความหนาแน่นของเชื้อแบคทีเรียที่ได้รับการปรับประมาณ10 8 CFU / มล. และ 100 มล. แล้วของแบคทีเรียระงับ20 มล. ละลาย NB หรืออาหารเลี้ยงเชื้อ TSB ถูกเทในการฆ่าเชื้อโลจาน เวลส์ 6.0 มมถูกเจาะในอาหารเลี้ยงเชื้อที่มีหนอนเจาะเหล็กผ่านการฆ่าเชื้อ S12 เป็นแบคทีเรียที่เลี้ยงในTSB ที่มีโซเดียมคลอไรด์ 1.5% และบ่มที่อุณหภูมิ 30 องศาเซลเซียสโดยการเขย่าที่120 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 20 ชั่วโมงจากนั้น 5 มล. ของวัฒนธรรมน้ำซุปเป็นตัวอย่างและปั่นเป็นเวลา10 นาทีที่ 10,000 รอบต่อนาที แล้ว 100 มิลลิลิตรใสถูกนำมาจากท่อและเพิ่มเข้าไปในบ่อที่แผ่นวุ้นเต็มไปด้วยเชื้อโรคที่สอดคล้องกัน ทั้งหมดของแผ่นที่ถูกบ่มในตู้อบที่ 30 องศาเซลเซียสในชั่วข้ามคืน; เส้นผ่าศูนย์กลางยับยั้งโซนโดยวัดจาก vernier caliper. 2.1.4 บัตรประจำตัวของแบคทีเรีย S12 ลักษณะทางสัณฐานวิทยาและชีวเคมีของแบคทีเรียS12 ได้รับการทดสอบตามคู่มือ Bergey ของระบบแบคทีเรียแปดฉบับ[33] บัตรประจำตัวทางพันธุกรรมที่ได้รับการดำเนินการโดยใช้ 16S rDNA ลำดับยีนซึ่งดำเนินการโดยสถาบันจุลชีววิทยาจีนAcademy of Sciences, กรุงปักกิ่งประเทศจีน ลำดับเบสของ 16S rDNA ถูกแล้วเมื่อเทียบกับลำดับที่มีอยู่ในGenBank NCBI ฐานข้อมูลโดยใช้ระเบิดและ treewas phylogenetic สร้างขึ้นโดยใช้แพคเกจซอฟต์แวร์เมกะ(เวอร์ชั่น 4.1). 2.2 การเตรียมอาหารและการทดลองให้อาหารองค์ประกอบของอาหารพื้นฐานที่จะได้รับในตารางที่ 2 และตบท้ายด้วยยาปฏิชีวนะที่0.3% (Florfenicol, Keyang เทคโนโลยีชีวภาพ, หวู่ฮั่น, จีน) 5? 109 กก. cfu? 1.5? 1010 cfu กก. 1 และ5? 1,011 กิโลกรัม cfu 1 ของ S12 (PS1-3) ตามลำดับ ส่วนผสมทั้งหมดแห้ง
การแปล กรุณารอสักครู่..
2 . วัสดุและวิธีการ2.1 . การแยกสายพันธุ์ s12 กรดอะมิโนโพรไบโอติก2.1.1 . กุ้ง , แบคทีเรีย , อาหารเลี้ยงเชื้อและสารเคมีฟาร์มกุ้งขาว L . vannamei มีน้ำหนักตัวเฉลี่ย10 กรัม ได้จากตลาดสินค้าสัตว์น้ำในจูไห่ ,ประเทศจีน ซุปสารอาหาร ( NB ) และทริพโทนซุปถั่วเหลือง ( TSB ) ได้แก่ซื้อจาก แลนด์บริดจ์ เทคโนโลยี จำกัด , ปักกิ่ง , จีน ที่ต้นกำเนิดของเชื้อโรคได้ในตารางที่ 1 เชื้อ spp . คือการปลูกและดูแลรักษาน้ำสารอาหาร ทั้งหมดของ Vibrio spp .เลี้ยงใน TSB เสริมด้วย 1.5% เกลือ บ่มเพาะอุณหภูมิ 30 C . การแยกและยับยั้งแบคทีเรียทดสอบกิจกรรมได้ดำเนินการโดยอุตสาหกรรม Kemin ( Zhuhai )2.1.2 . การแยกและการกรดอะมิโนโพรไบโอติกกุ้งที่ถูกล้างด้วยแอลกอฮอล์ 70% ก่อนตัวอย่างไส้กับแหนบที่เป็นหมัน หนึ่งกรัมของลำไส้กับการย่อยอาหารcontentwas ระงับ 9 มิลลิลิตร ( เป็นหมันน้ำเกลือ 0.85 % W / V NaCl )เตรียมแยกโดยใช้เครื่องปั่นแก้ว หนึ่งมิลลิลิตรของถูกระงับเป็นประมาณ 105 , แต่ละเจือจาง200 ml ระงับตัวอย่างและกระจายลงบนพื้นผิวของ TSBวุ้น จาน แล้วบ่มภายใต้สภาวะแอโรบิก ที่30 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 24 ชั่วโมง รวม 54 แบคทีเรียโคโลนีที่ได้รับและของพวกเขาจากผลการยับยั้งต่อเชื้อใน zs-1 โดยวุ้นก็แพร่ ) [ 32 ] ขึ้นอยู่กับที่ดีที่สุดประสิทธิภาพของการยับยั้งความสามารถหนึ่งของเหล่านี้แบคทีเรียไอโซเลททำเครื่องหมายเป็น s12 ถูกเลือกเพื่อดำเนินการต่อไปนี้ปฏิปักษ์ทดลองต่อเชื้อโรคอื่น ๆ สัตว์น้ําทาง . การกำหนดกิจกรรมของแบคทีเรียกับสัตว์น้ำเชื้อโรคฤทธิ์ต้านแบคทีเรียของแบคทีเรียที่แยก s12 กับอื่น ๆเชื้อโรคที่ระบุไว้ในตารางที่ 1 แสดงการใช้วุ้นด้วยการแพร่วิธี สั้น ๆ , สายพันธุ์เชื้อโรครวมทั้ง sobria ทาง A , A . ,A . hydrophila x1 A . hydrophila และ zs-1 edwardsiella tarda คือมาเพาะเลี้ยงในอาหาร NB Vibrio ชนิดได้แก่ Vibrio anguillarum จำนวนเลือก , Vibrio alginolyticus , Vibrio harveyi และ Vibrio parahaemolyticusเพาะเลี้ยงใน TSB เสริมด้วย 1.5% เกลือหลังจากบ่มที่อุณหภูมิ 30 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 20 ชั่วโมง ความหนาแน่นของแบคทีเรียคือปรับประมาณ 10 8 cfu / ml และ 100 ml ของแบคทีเรียช่วงล่างกับ 20 มล. ละลาย NB หรือ TSB วุ้นถูกเทบนฆ่าเชื้อจานเพาะเชื้อ บ่อ 6.0 มม. ถูกชกในใช้กับหนอนเหล็กที่เป็นหมัน แบคทีเรีย s12 เลี้ยงในTSB ที่มีโซเดียมคลอไรด์ 1.5 บ่มที่อุณหภูมิ 30 C โดย ที่ตัว120 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 20 ชั่วโมง แล้ว 5 ml ของน้ำตัวอย่าง และ วัฒนธรรมไฟฟ้าสำหรับ 10 นาทีที่ 10 , 000 รอบต่อนาที จากนั้นนำ 100 มิลลิลิตรถ่ายจากหลอด และเพิ่มลงในบ่อน้ำของวุ้นแผ่นเต็มไปด้วยเชื้อโรคที่สอดคล้องกัน ทั้งหมดของจานคือเลี้ยงในตู้อบที่อุณหภูมิ 30 องศาเซลเซียสในชั่วข้ามคืน ; เส้นผ่าศูนย์กลางของการยับยั้งโซนวัดด้วยเวอร์เนียร์คาลิปเปอร์ .2.1.4 . การจำแนกชนิดของแบคทีเรีย s12การศึกษาลักษณะสัณฐานวิทยาและชีวเคมีของแบคทีเรียs12 ทดสอบตามวิธีของตนเองอย่างเป็นระบบแบคทีเรียวิทยารุ่นที่ 33 [ 8 ] รหัสทางพันธุกรรมคือโดยใช้ 16S rDNA ยีนซึ่งมีการจัดลำดับโดยสถาบันจุลชีววิทยา , จีน Academy of Sciences ,ปักกิ่ง , จีน โดยลำดับนิวคลีโอไทด์ของ 16S rDNA ได้แล้วเมื่อเทียบกับระบบที่มีอยู่ใน ncbi ขนาดฐานข้อมูลการใช้ระเบิดและสร้าง phylogenetic treewas โดยการใช้แพคเกจซอฟต์แวร์ที่เมกา ( เวอร์ชั่น 4.1 )2.2 . การเตรียมอาหารและการให้อาหาร การทดลององค์ประกอบของอาหารฐานจะได้รับในตารางที่ 2 และ อาหาร0.3% ยาปฏิชีวนะ ( florfenicol Keyang , เทคโนโลยีชีวภาพหวู่ฮั่น , จีน ) , 5 109 CFU CFU kg1 kg1,5 1010 และ5 ชั้น kg1 โคโลนีของ s12 ( ps1-3 ) ตามลำดับ ส่วนผสมแห้งทั้งหมด
การแปล กรุณารอสักครู่..
ภาษาอื่น ๆ
การสนับสนุนเครื่องมือแปลภาษา: กรีก, กันนาดา, กาลิเชียน, คลิงออน, คอร์สิกา, คาซัค, คาตาลัน, คินยารวันดา, คีร์กิซ, คุชราต, จอร์เจีย, จีน, จีนดั้งเดิม, ชวา, ชิเชวา, ซามัว, ซีบัวโน, ซุนดา, ซูลู, ญี่ปุ่น, ดัตช์, ตรวจหาภาษา, ตุรกี, ทมิฬ, ทาจิก, ทาทาร์, นอร์เวย์, บอสเนีย, บัลแกเรีย, บาสก์, ปัญจาป, ฝรั่งเศส, พาชตู, ฟริเชียน, ฟินแลนด์, ฟิลิปปินส์, ภาษาอินโดนีเซี, มองโกเลีย, มัลทีส, มาซีโดเนีย, มาราฐี, มาลากาซี, มาลายาลัม, มาเลย์, ม้ง, ยิดดิช, ยูเครน, รัสเซีย, ละติน, ลักเซมเบิร์ก, ลัตเวีย, ลาว, ลิทัวเนีย, สวาฮิลี, สวีเดน, สิงหล, สินธี, สเปน, สโลวัก, สโลวีเนีย, อังกฤษ, อัมฮาริก, อาร์เซอร์ไบจัน, อาร์เมเนีย, อาหรับ, อิกโบ, อิตาลี, อุยกูร์, อุสเบกิสถาน, อูรดู, ฮังการี, ฮัวซา, ฮาวาย, ฮินดี, ฮีบรู, เกลิกสกอต, เกาหลี, เขมร, เคิร์ด, เช็ก, เซอร์เบียน, เซโซโท, เดนมาร์ก, เตลูกู, เติร์กเมน, เนปาล, เบงกอล, เบลารุส, เปอร์เซีย, เมารี, เมียนมา (พม่า), เยอรมัน, เวลส์, เวียดนาม, เอสเปอแรนโต, เอสโทเนีย, เฮติครีโอล, แอฟริกา, แอลเบเนีย, โคซา, โครเอเชีย, โชนา, โซมาลี, โปรตุเกส, โปแลนด์, โยรูบา, โรมาเนีย, โอเดีย (โอริยา), ไทย, ไอซ์แลนด์, ไอร์แลนด์, การแปลภาษา.
- ฉันไม่รู้จะทำอะไรดี
- miss and mourn those who have love
- คุณมีความสามารถหลายอย่าง
- text coherence
- มนุษย์โตมากับแม่
- กาโด กาโด (Gado Gado) เป็นหนึ่งในอาหารยอ
- We print a lot of promotional bags for m
- I have finished novels and movie scripts
- So flock swam up fish farming combined w
- Administration with OPSattenuated OVA ch
- Hi,Victor. How r u? 3月1日-4日 i will go to
- วันที่ 12 - 15 เมษายน ซึ่งเป็นวันสงกานต์
- • Please use variable “RespID” to export
- ป้ายประกาศ
- There were no significant differences in
- In designing and building the car leaves
- โดย
- one with and one without
- Methods ResultsDiscussionConclusion
- ฉันกินข้าวผัดที่ร้านขาวฃยข้าวข้างหอพัก
- prospects simplycannot happen over three
- In designing and building the car leaves
- คนใช้ขวาน
- The northern people have penchant for me
