2. Materials andmethodsIn vitro der

2. Materials andmethods
In vitro dermal exposure experiments were performed along the
principles of good laboratory practice and in compliance with the
OECD guidelines for in vitro dermal absorption testing (OECD, 2004).
The handling instructions and performance characteristics of EPISKIN™
3D-human skin equivalent (3D-HSE) model were also taken into
consideration. The study protocol received the required ethical approval
(# ERN_12-1502) from the University of Birmingham's Medical,
Engineering and Mathematics Ethical Review Committee.
2.1. Chemicals and standards
All solvents and reagents used for preparation, extraction, clean-up
and instrumental analysis of samples were of HPLC grade and were
obtained from Fisher Scientific (Loughborough, UK). Neat standards
(purity N 98%) of tris (2-chloroethyl) phosphate (TCEP), tris (2-
chloroisopropyl) phosphate (TCPP), tris (1,3-dichloro-2-propyl) phosphate
(TDCIPP), were purchased from Sigma-Aldrich (Gillingham,
Dorset, UK). Isotopically labelled d15-triphenyl phosphate (d15-TPhP)
and d27-tri-n-butyl phosphate (d27-TnBP) (50 μg/mL in toluene,
purity N 99%) were obtained from Wellington Laboratories (Guelph,
ON, Canada). Florisil® SPE cartridges were purchased from Supelco™
(Bellefonte, Pennsylvania, USA). All culture medium components
(Table SI-1) were purchased from Sigma-Aldrich UK (Gillingham,
Dorset, UK).
2.2. Test matrices
2.2.1. Human skin. Freshly excised, healthy human upper breast skin
was obtained via Caltag Medsystems Ltd. (Buckingham, UK) from
three consented female adults (aged 35, 37 and 34 years) following
plastic surgery. Selection criteria included: Caucasian, no stretchmarks,
no scars, no hair and full thickness skin without adipose tissue. Skin
was kept on ice for no longer than 4 h prior to the onset of the ex vivo
skin absorption studies. Upon receipt, the ex vivo skin samples were
equilibrated for 1 h with 3 mL of DMEM (Dulbecco's Modified Eagle's
Medium)-based (Sigma-Aldrich, UK) culture medium (Table SI-1) at
5% CO2 and 37 °C before use in permeation experiments.
2.2.2. EPISKIN™. The EPISKIN™ RHE/L/13 human skin equivalent kit
was purchased from SkinEthic Laboratories (Lyon, France). The RHE/L/
13 tissue constructs are 1.07 cm2 tissues shipped on the 13th day of culture
required for acceptable tissue differentiation (www.episkin.com).
The kit includes maintenance medium (MM) — which is a proprietary
DMEM-based medium that allows acceptable differentiated morphology
of the tissue for ~5 days upon receipt by end users. Upon receipt, the
EPISKIN™tissues were equilibrated overnightwith theirMM at 5% CO2
and 37 °C before use in the permeation experiments.
2.3. Dosing solutions
Two different concentration levels of (I) 50 ng/μL and (II) 10 ng/μL of
each of TCEP, TCIPP and TDCIPPwere prepared in acetone by serial dilution.
Based on the exposed surface area, a net dose of 500 ng/cm2 and
1000 ng/cm2 was applied to each of the investigated skin tissues using
10 μL/cm2 (finite dose application) of dosing solutions I and 100 μL/cm2
(infinite dose application) of dosing solution II, respectively. Acetone
was selected as the dosing vehicle based on its ability to dissolve the
test compounds at the desired levels and itsminimal effect on skin barrier
function. A previous study on the effect of organic solvents on the transepidermalwater
loss (TEWL) as indicator of skin barrier revealed both acetone
and hexane to not behave significantly differently in this context to
water, while a mixture of chloroform:methanol (2:1 v/v) caused the
greatest significant increase in TEWL (Abrams et al., 1993).
To study the possible effect of the dosing vehicle on the percutaneous
penetration of the tested chemicals, target PFRs were dissolved in
2 different dosing vehicles of: (A) acetone, and (B) 20% Tween 80
(Sigma-Aldrich, UK) in water at a concentration of (III) 10 ng/μL. For
this strand of experiments, in vitro skin tissues were dosed with
50 μL/cm2 (infinite dose application) of dosing solution II and III for comparison. Preparation of the higher dosing level (i.e. 50 ng/μL) was
not possible due to limited solubility of target PFRs in vehicle (B).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2. วัสดุ andmethodsดำเนินการทดลองในหลอดทดลองสัมผัสที่ผิวหนังตามหลักการ ของการปฏิบัติในห้องปฏิบัติการที่ดี และสอดคล้องกับการการแนวทาง OECD การดูดซึมในหลอดทดลองแท้ทดสอบ (OECD, 2004)คำแนะนำการจัดการและลักษณะการทำงานของ EPISKIN™ผิวหนังมนุษย์ 3D (3D-HSE) ที่เทียบเท่ากับรุ่นได้ถูกนำมาพิจารณา โพรโทคอลการศึกษาได้รับการอนุมัติจริยธรรมที่จำเป็น(# ERN_12-1502) จากมหาวิทยาลัย Birmingham ทางการแพทย์วิศวกรรมศาสตร์ และคณะกรรมการจริยธรรมของคณิตศาสตร์2.1. เคมีและมาตรฐานทุกตัวทำละลายและสารรีเอเจนต์ที่ใช้สำหรับเตรียม ดูด การล้างและตัวอย่างเครื่องมือวิเคราะห์ HPLC เกรด และมีได้รับจากวิทยาศาสตร์ฟิชเชอร์ (อันดับด้วย UK) มาตรฐานเรียบร้อย(ความบริสุทธิ์ N 98%) ของฟอสเฟตทริส (2-chloroethyl) (TCEP), ทริส (2-ทริส (1, 3-dichloro-2-โพรพิล) ฟอสเฟต ฟอสเฟต chloroisopropyl) (TCPP)(TDCIPP), ซื้อจาก Sigma Aldrich (Gillinghamดอร์เซ็ท สหราชอาณาจักร) ติดป้าย isotopically d15-triphenyl ฟอสเฟต (d15-TPhP)และ d27-ไตรเอ็นบิวทิลฟอสเฟต (d27-TnBP) (50 μ/mL ในโทลูอีนความบริสุทธิ์ N 99%) ได้รับจากห้องปฏิบัติการ (กวัฟล เวลลิงตันON แคนาดา) ตลับ Florisil® SPE ซื้อจาก Supelco™(Bellefonte เพนซิลวาเนีย สหรัฐอเมริกา) ส่วนประกอบของสารทั้งหมด(ตาราง SI 1) ซื้อจาก Sigma Aldrich UK (Gillinghamดอร์เซ็ท สหราชอาณาจักร)2.2. ทดสอบเมทริกซ์2.2.1. มนุษย์ผิว ผิวสรรพสามิตสด มีสุขภาพดีบนเต้านมของมนุษย์มาจากทาง จำกัด Medsystems Caltag (บัคกิ้งแฮม สหราชอาณาจักร)สามยินยอมผู้ใหญ่หญิง (อายุ 35, 37 และ 34 ปี) ต่อไปนี้การทำศัลยกรรมพลาสติก เงื่อนไขการเลือกรวม: ผิวขาว ไม่บ่อยแค่ไม่มีรอยแผลเป็น ไม่มีผมและความหนาเต็มผิวหนังไม่ มีเนื้อเยื่อไขมัน ผิวถูกเก็บไว้บนน้ำแข็งไม่เกิน 4 ชั่วโมงก่อนการโจมตีของ ex vivoศึกษาการดูดซึมของผิว เมื่อได้รับ ex vivo ผิวการเก็บตัวอย่างequilibrated สำหรับ h 1 กับ 3 mL ของ DMEM (ของ Dulbecco ปรับอีเกิ้ลกลาง-ขึ้นปานกลาง (Sigma Aldrich, UK) วัฒนธรรม (ตารางศรี-1)5% CO2 และ 37 ° C ก่อนที่จะใช้ในการทดลองการซึมผ่าน2.2.2. EPISKIN™ ชุดเทียบเท่าผิว EPISKIN™ RHE/L/13ซื้อจากห้องปฏิบัติการ SkinEthic (ลียง ฝรั่งเศส) RHE L /โครงสร้างของเนื้อเยื่อที่ 13 มีเนื้อเยื่อ cm2 1.07 ที่จัดส่งในวันที่ 13 ของวัฒนธรรมจำเป็นสำหรับเนื้อเยื่อที่ยอมรับความแตกต่าง (www.episkin.com)ชุดอุปกรณ์รวมถึงบำรุงรักษากลาง (MM) — ซึ่งจะเป็นกรรมสิทธิ์ของสัณฐานวิทยาที่แตกต่างปานกลางที่ใช้ DMEM ที่ช่วยให้สามารถยอมรับได้ของเนื้อเยื่อสำหรับ ~ 5 วันเมื่อได้รับโดยผู้ใช้ เมื่อได้รับ การมีเนื้อเยื่อ EPISKIN™ equilibrated overnightwith theirMM 5% CO2และ 37 ° C ก่อนที่จะใช้ในการทดลองการซึมผ่าน2.3. ปั๊มเคมีระดับความเข้มข้นแตกต่างกันสองของ (I) 50 ng/μL และ (II) 10 ฉบับ/μL ของแต่ละ TCEP, TCIPP และ TDCIPPwere ที่เตรียมในอะซีโตน โดยเจือจาง serialอิงจากพื้นที่ผิวสัมผัส ปริมาณสุทธิของ 500 ng/cm2 และใช้ 1000 ฉบับ/cm2 แต่ละเนื้อเยื่อผิวตรวจสอบโดยใช้10 μL/cm2 (จำกัดปริมาณประยุกต์) ของผมและ 100 μL/cm2 ปั๊มเคมี(อนันต์ยาประยุกต์) ของยาโซลูชัน II ตามลำดับ อะซิโตนเลือกเป็นรถยาอิงความสามารถในการละลายของทดสอบสารในระดับที่ต้องการและผิวผล itsminimalฟังก์ชัน การศึกษาผลของตัวทำละลายอินทรีย์ใน transepidermalwater ก่อนหน้านี้ขาดทุน (ใช้เครื่องสำอางเป็นตัวบ่งชี้ของผิวเผยทั้งสองอะซิโตนและเฮกเซนในการทำงานอย่างมีนัยสำคัญแตกต่างกันในบริบทนี้น้ำ ในขณะที่ส่วนผสมของคลอโรฟอร์ม: เมทานอล (2:1 v/v) เกิดจากการเพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญมากที่สุดในการใช้เครื่องสำอาง (เอบรัมส์ et al. 1993)การศึกษาได้ผลของรถยา percutaneousของสารเคมีผ่านการทดสอบการเจาะ เป้าหมาย PFRs ถูกละลายใน2 คันยาแตกต่างกันของ: อะซิโตน (A) และ (ข) 20% แต่ 80(Sigma Aldrich, UK) ในน้ำที่ความเข้มข้นของ (III) 10 ฉบับ/μL สำหรับนี้สาระของการทดลอง ถูกยากับเนื้อเยื่อผิวในหลอดทดลอง50 μL/cm2 (อนันต์ยาประยุกต์) ของยาโซลูชัน II และ III เปรียบเทียบ เตรียมระดับยาสูงขึ้น (เช่น 50 ng/μL)ไม่ได้เนื่องจากจำกัดละลายของเป้าหมายที่ PFRs ในรถยนต์ (B)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2. วัสดุ andmethods
ในหลอดทดลองการทดลองการสัมผัสทางผิวหนังได้ดำเนินการตาม
หลักการของการปฏิบัติในห้องปฏิบัติการที่ดีและสอดคล้องกับ
แนวทางของ OECD สำหรับในหลอดทดลองทดสอบการดูดซึมทางผิวหนัง (OECD, 2004).
คำแนะนำการจัดการและลักษณะการทำงานของ EPISKIN ™
ผิว 3 มิติมนุษย์ เทียบเท่า (3D-HSE) รูปแบบนอกจากนี้ยังได้นำเข้าสู่การ
พิจารณา โปรโตคอลการศึกษาที่ได้รับการอนุมัติจริยธรรมที่จำเป็น
(# ERN_12-1502) จากมหาวิทยาลัยเบอร์มิงแฮมแพทย์,
วิศวกรรมและคณิตศาสตร์คณะกรรมการตรวจสอบจริยธรรม.
2.1 สารเคมีและมาตรฐาน
ตัวทำละลายและสารเคมีทั้งหมดที่ใช้สำหรับการเตรียมการสกัดการทำความสะอาด
และการวิเคราะห์ด้วยเครื่องมือของกลุ่มตัวอย่างเป็นของเกรด HPLC และ
ได้รับจากฟิชเชอร์ทางวิทยาศาสตร์ (Loughborough สหราชอาณาจักร) มาตรฐานเรียบร้อย
(ความบริสุทธิ์ N 98%) ของ บริษัท ทริส (2 chloroethyl) ฟอสเฟต (TCEP) ทริส (2-
chloroisopropyl) ฟอสเฟต (TCPP) ทริสเรทติ้ง (1,3-dichloro-2-propyl) ฟอสเฟต
(TDCIPP) กำลังซื้อ จาก Sigma-Aldrich (จิลลิ่ง,
ดอร์เซตสหราชอาณาจักร) ที่มีป้ายกำกับ isotopically D15-triphenyl ฟอสเฟต (D15-TPhP)
และ D27 Tri-n-butyl ฟอสเฟต (D27-TnBP) (50 ไมโครกรัม / มิลลิลิตรในโทลูอีน
บริสุทธิ์ N 99%) ที่ได้รับจากเวลลิงตันห้องปฏิบัติการ (กู
ON, Canada) . ตลับFlorisil® SPE ที่ซื้อมาจาก Supelco ™
(เบลลาฟอน, Pennsylvania, USA) ทุกองค์ประกอบกลางวัฒนธรรม
(ตารางที่ SI-1) ที่ซื้อมาจาก Sigma-Aldrich สหราชอาณาจักร (จิลลิ่ง,
ดอร์เซตสหราชอาณาจักร).
2.2 การฝึกอบรมการทดสอบ
2.2.1 ผิวหนังของมนุษย์ สดตัดผิวหนังเต้านมบนมนุษย์มีสุขภาพดี
ที่ได้รับผ่านทาง Caltag Medsystems จำกัด (บักกิ้งแฮม, สหราชอาณาจักร) จาก
สามยินยอมผู้ใหญ่เพศหญิง (อายุ 35, 37 และ 34 ปี) ต่อไปนี้
การทำศัลยกรรมพลาสติก เกณฑ์การคัดเลือกรวม: คนผิวขาวไม่ stretchmarks,
ไม่มีรอยแผลเป็นไม่มีผมและผิวหนาเต็มโดยไม่ต้องเนื้อเยื่อไขมัน ผิวหนัง
ถูกเก็บไว้บนน้ำแข็งไม่เกิน 4 ชั่วโมงก่อนที่จะเริ่มมีอาการของอดีตร่างกาย
การศึกษาการซึมผ่านผิวหนัง เมื่อได้รับการ ex vivo ตัวอย่างผิวถูก
equilibrated เป็นเวลา 1 ชั่วโมงมี 3 มล DMEM (Dulbecco ของ Modified นกอินทรี
ขนาดกลาง) -based (Sigma-Aldrich สหราชอาณาจักร) กลางวัฒนธรรม (ตารางที่ SI-1) ที่
5% CO2 และ 37 องศาเซลเซียสก่อน ใช้ในการทดลองการซึมผ่าน.
2.2.2 EPISKIN ™ EPISKIN ™ RHE / L / 13 ผิวหนังของมนุษย์ชุดเทียบเท่า
ซื้อจาก SkinEthic ห้องปฏิบัติการ (ลียง, ฝรั่งเศส) RHE / L /
13 สร้างเนื้อเยื่อเป็น 1.07 cm2 เนื้อเยื่อจัดส่งในวันที่ 13 ของวัฒนธรรม
. ที่จำเป็นสำหรับความแตกต่างของเนื้อเยื่อที่ยอมรับได้ (www.episkin.com)
ชุดรวมถึงสื่อการบำรุงรักษา (mm) - ซึ่งเป็นกรรมสิทธิ์ของ
กลาง DMEM ตามที่ ช่วยให้ได้รับการยอมรับความแตกต่างทางสัณฐานวิทยา
ของเนื้อเยื่อสำหรับ ~ 5 วันเมื่อได้รับโดยผู้ใช้ เมื่อได้รับการ
เนื้อเยื่อ EPISKIN ™ถูก equilibrated overnightwith theirMM ที่ 5% CO2
และ 37 ° C ก่อนที่จะใช้ในการทดลองการซึมผ่านได้.
2.3 ยาแก้ปัญหา
สองระดับความเข้มข้นแตกต่างกันของ (I) 50 ng / ไมโครลิตรและ (ii) 10 ng / ไมโครลิตรของ
แต่ละ TCEP, TCIPP และ TDCIPPwere เตรียมในอะซีโตนโดยเจือจางอนุกรม.
จากพื้นที่ผิวสัมผัสปริมาณสุทธิ 500 NG / cm2 และ
1000 ng / cm2 ถูกนำไปใช้แต่ละเนื้อเยื่อผิวโดยใช้การตรวจสอบ
10 ไมโครลิตร / cm2 (Application ปริมาณ จำกัด ) ของการแก้ปัญหายาฉันและ 100 ไมโครลิตร / cm2
(Application ยาอนันต์) ของการแก้ปัญหาการใช้ยาครั้งที่สองตามลำดับ อะซิโตน
ได้รับเลือกเป็นรถยาขึ้นอยู่กับความสามารถในการละลาย
สารทดสอบในระดับที่ต้องการและผล itsminimal บนผิวหนัง
ฟังก์ชั่น การศึกษาก่อนหน้านี้เกี่ยวกับผลของตัวทำละลายอินทรีย์ใน transepidermalwater
การสูญเสีย (TEWL) เป็นตัวบ่งชี้ของผิวหนังเปิดเผยทั้งอะซีโตน
และเฮกเซนที่จะไม่ประพฤติอย่างมีนัยสำคัญที่แตกต่างกันในบริบทนี้
น้ำในขณะที่มีส่วนผสมของคลอโรฟอร์ม: เมทานอล (2: 1 V / V) ก่อให้เกิด
.. เพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญยิ่งใหญ่ที่สุดใน TEWL (อับราฮัม, et al, 1993)
เพื่อศึกษาผลกระทบที่เป็นไปได้ของยานพาหนะยาบนลวด
รุกของสารเคมีทดสอบ, PFRs เป้าหมายถูกกลืนหายไปใน
2 ยานพาหนะยาแตกต่างกันของ: (A) อะซิโตนและ (ข) 20% Tween 80
(Sigma-Aldrich สหราชอาณาจักร) ในน้ำที่ระดับความเข้มข้น (III) 10 ng / ไมโครลิตร สำหรับ
สาระของการทดลองนี้ในหลอดทดลองเนื้อเยื่อผิวได้รับยาที่มี
50 ไมโครลิตร / cm2 (Application ยาอนันต์) ของการแก้ปัญหายา II และ III สำหรับการเปรียบเทียบ การเตรียมความพร้อมของระดับยาสูงขึ้น (เช่น 50 ng / ไมโครลิตร) เป็น
ไปไม่ได้เนื่องจากการละลายที่ จำกัด ของ PFRs เป้าหมายในรถ (B)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2 . วัสดุและวิธีการในหลอดทดลองตามเนื้อสัมผัสหลักปฏิบัติที่ดีในห้องปฏิบัติการและในสอดคล้องกับโออีซีดีแนวทางในการทดสอบการดูดซึมทางผิวหนัง ( OECD , 2004 )การจัดการคำสั่งและลักษณะงานของ episkin ™3 มิติของมนุษย์ผิวเทียบเท่า ( 3d-hse ) รุ่นยังามาการพิจารณา การศึกษาขั้นตอนได้รับอนุมัติเป็นจริยธรรม( # ern_12-1502 ) จากมหาวิทยาลัยเบอร์มิงแฮมของแพทย์คณิตศาสตร์และวิศวกรรมจริยธรรมคณะกรรมการตรวจสอบ .2.1 . สารเคมี และ มาตรฐานตัวทำละลายและสารเคมีที่ใช้ในการเตรียม , การสกัด , ทำความสะอาดและการวิเคราะห์ของเครื่องมือ HPLC และจำนวนของนักเรียนชั้นประถมศึกษาปีที่ที่ได้รับจากฟิชเชอร์ทางวิทยาศาสตร์ ( Loughborough , UK ) มาตรฐานเรียบร้อย( ความบริสุทธิ์ ( 98% ) ของบริษัท ( 2-chloroethyl ) ฟอสเฟต ( เกี่ยวกับ ) , ทริส ( 2chloroisopropyl ) ฟอสเฟต ( tcpp ) , ทริส ( 1,3-dichloro-2-propyl ) ฟอสเฟต( tdcipp ) ซื้อมาจากซิกม่า Aldrich ( Gillingham ,เดวอน สหราชอาณาจักร ) isotopically labelled d15 ไตรฟีนิลฟอสเฟต ( d15 tphp )และ d27-tri-n-butyl ฟอสเฟต ( d27 tnbp ) ( 50 μ g / ml ในโทลูอีนความบริสุทธิ์ ( 99% ) ที่ได้รับจากห้องปฏิบัติการ ( Guelph , เวลลิงตันในแคนาดา ) florisil ®ตลับเอสพี ซื้อมาจาก supelco ™( bellefonte , Pennsylvania , สหรัฐอเมริกา ) ทั้งหมดส่วนประกอบของอาหารเลี้ยงเชื้อ( โต๊ะ si-1 ) ซื้อจาก ซิกม่า Aldrich ( Gillingham , สหราชอาณาจักรเดวอน สหราชอาณาจักร )2.2 . ทดสอบเมทริกซ์2.2.1 . ผิวหนังของมนุษย์ ตัดสด ๆบนผิวหนังมนุษย์สุขภาพเต้านม ,ได้ผ่าน caltag medsystems จำกัด ( Buckingham , สหราชอาณาจักร ) จากสามยินยอมผู้ใหญ่เพศหญิง ( อายุ 35 , 37 และ 34 ปี ) ต่อไปศัลยกรรมพลาสติก เกณฑ์การคัดเลือกรวม : ผิวขาว ไม่มี stretchmarks ,ไม่มีแผลเป็น ไม่มีขนและผิวหนังหนาเต็มโดยไม่ต้องไขมันเนื้อเยื่อ ผิวถูกเก็บไว้ในที่เย็นไม่เกิน 4 ชั่วโมง ก่อนที่จะเริ่มมีอาการของร่างกาย แฟนเก่าการศึกษาการดูดซึมของผิวหนัง เมื่อได้รับอาหารผิวตัวอย่างแฟนเก่าequilibrated เป็นเวลา 1 ชั่วโมง กับ 3 มล. ของ dmem ( ดัลเบโค่ก็ดัดแปลงของนกอินทรีขนาดกลาง ) - based ( ซิกม่า Aldrich UK ) อาหารเลี้ยงเชื้อ ( ตาราง si-1 )5% CO2 และ 37 ° C ก่อนที่จะใช้ในการศึกษาทดลอง2.2.2 . episkin ™ . การ episkin ™ rhe / L / 13 ชุดเทียบเท่าผิวหนังมนุษย์ซื้อมาจากห้องปฏิบัติการ skinethic ( Lyon , ฝรั่งเศส ) ส่วนผู้ถูก / ลิตร13 เนื้อเยื่อโครงสร้างเป็น 1.07 CM2 เนื้อเยื่อจัดส่งในวันที่ 13 ของวัฒนธรรมที่จำเป็นสำหรับการยอมรับเนื้อเยื่อ ( www.episkin . com )ชุดรวมถึงการบำรุงรักษา medium ( MM ) - ซึ่งเป็นกรรมสิทธิ์dmem กลางที่ช่วยให้ยอมรับความแตกต่างตามสัณฐานจากเนื้อเยื่อ ~ 5 วันเมื่อได้รับโดยผู้ใช้ เมื่อได้รับแล้วepiskin ™เนื้อเยื่อถูก equilibrated overnightwith theirmm คาร์บอนไดออกไซด์ 5% ที่และ 37 ° C ก่อนที่จะใช้ในการศึกษาทดลอง2.3 ใช้ โซลูชั่นที่แตกต่างกันสองระดับความเข้มข้นของ ( ผม ) 50 กรัม / ลิตรและμ ( 2 ) 10 ng / μล.แต่ละเกี่ยวกับ tcipp , และเตรียม tdcippwere ) โดยซีเรียลเจือจางขึ้นอยู่กับพื้นที่ผิวสัมผัส , ตาข่ายขนาด 500 กรัม / ตร. ซม. และ1000 ng / cm2 การประยุกต์ใช้ของแต่ละชนิดเนื้อเยื่อผิวโดยใช้10 μ L / cm2 ( การใช้ยาของยาโซลูชั่นจำกัด ) และ 100 μลิตร / ตร. ซม.( การใช้ยาอนันต์ ) ของยาโซลูชั่นที่ 2 ตามลำดับ อะซิโตนได้รับเลือกเป็นรถจ่ายตามความสามารถในการละลายทดสอบสารในระดับที่ต้องการและผล itsminimal บนผิวหนังฟังก์ชัน การศึกษาก่อนหน้านี้จากผลของตัวทำละลายอินทรีย์ที่มีต่อ transepidermalwaterขาดทุน ( tewl ) เป็นตัวชี้วัดของผิวหนัง พบทั้งอะซิโตนเฮกเซนไม่ทำตัวอย่างและแตกต่างกันในบริบทนี้น้ำ ในขณะที่ส่วนผสมของคลอโรฟอร์ม : เมทานอล ( 2 : 1 v / v ) ที่เกิดการเปลี่ยนแปลงที่ยิ่งใหญ่ที่สุดใน tewl ( Abrams et al . , 1993 )เพื่อศึกษาผลที่เป็นไปได้ของการใช้ยานพาหนะบนทดสอบการซึมผ่านของสารเคมี pfrs เป้าหมายถูกละลายใน2 ต่างใช้ยานพาหนะของ ( ก ) และ ( ข ) อะซิโตน Tween 20 % 80( ซิกม่า Aldrich , UK ) ในน้ำที่ความเข้มข้น ( III ) 10 ng / μ L สำหรับนี้กลุ่มการทดลองในเนื้อเยื่อผิวหลอดถูกวางยาด้วย50 μ L / cm2 ( การใช้ยาอนันต์ ) ของยาโซลูชั่นที่ 2 และ 3 เพื่อเปรียบเทียบ การเตรียมยาระดับที่สูงขึ้น ( เช่น 50 นาโนกรัม / μ L ) คือไม่ได้เนื่องจากการละลายของ pfrs จำกัดเป้าหมายในยานพาหนะ ( B )