Table 1Hybrid name, Bt traits, loca

Table 1
Hybrid name, Bt traits, location, and year grown, for the corn stover analyzed in the experiment.
Isoline RMe Bt trait Location (County, MI)
2010 2011
Nutech 2A 804 104 No Ingham, Saginaw, Menominee Ingham, Saginaw, Mason, Menominee
Nutech 5N 804
(GTa
/CBb
/LLc
/RWd
)
104 Cry1AB, mCRY3 Ingham, Saginaw, Menominee Ingham, Saginaw, Mason, Menominee
Bayside 4090 90 No Mason, Menominee Ingham, Saginaw, Mason, Menominee
Bayside 3090
(GTa
/CBb
/LLc
)
90 Cry1AB Mason, Menominee Ingham, Saginaw, Mason, Menominee
RM: Relative Maturity.
a GT: Glyphosate Tolerant. b CB: Corn Borer control.
c LL: Liberty Link (Glufosinate tolerance). d RW: Root Worm control.
120 P. Tumbalam et al. / Biomass and Bioenergy 85 (2016) 119e125
triplicate, 2 mg technical replicates which were assayed using the
acetyl bromide soluble lignin (ABSL) method [20]. The ABSL
method was performed by treating cell wall material with a 25% (v/
v) solution of acetyl bromide in glacial acetic acid under gentle
heating conditions to solubilize the lignin matrix. The solubilized
lignin was volumetrically diluted with glacial acetic acid and
assayed using a photospectrometer at 280 nm (Spectromax 384
plus). For the lignin content calculation, the molar extinction coefficient
for maize (17.75 L g
1 cm
1
) was used, which was previously
determined in literature. The lignin composition analysis was
performed using the thioacidolysis method, which is utilized to
detect the p-Hydroxylphenyl (H), Guaiacyl (G), and Syringyl (S)
monomers incorporated in the lignin matrix via b-O-4 ether linkages.
Using the dried and isolated lignocellulosic material, three
2 mg replicates were weighed into glass vials and heated with a
mixture of dioxane, ethanethiol, and boron trifluoride diethyl
etherate to liberate the lignin monomers. The extracted thioether
derivatized monomers were subsequently silylated with BSA and
quantitated using GCeMS analysis (Agilent 7890A/5975C MS) according
to the published procedure [20].
2.3. Ammonia Fiber expansion pretreatment (AFEX)
AFEX is a thermochemical process for pretreating biomass to
decrystallize lignocellulose structure by removing hemicellulose
and reducing lignin content. AFEX pretreatment was performed on
individual corn stover samples as described by Bals et al., in 2010
[21], using 22 mL stainless steel reactors heated in a metal heating
block. Samples for high solid loading enzymatic hydrolysis were
pretreated using a 300 mL stainless steel Parr reactor heated in a
heating mantle. The AFEX conditions used for all samples were
0.6 g H2O/g dry sample, 1 g NH3/g dry sample, residence time
30 min, and temperature 100 C. Biomass was removed and dried in
a fume hood overnight. After AFEX treatment, enzymatic hydrolysis
was conducted where sugar monomers such as glucose and xylose
were released for fermentation in conversion to ethanol. AFEXpretreated
samples were tested for effectiveness by performing
enzymatic hydrolysis in duplicate. The samples were loaded into
20 mL scintillation vials at 1% (w/v) glucan loading with working
volume of 15 mL. The hydrolysis was performed at pH 4.8 using
50 mM sodium citrate buffer for 72 h in the incubator shaker (New
Brunswick Scientific, Enfield, CT) at 50 C with agitation speed of
250 rpm. Sodium azide was added at concentration of 0.5 mM to
prevent microbial growth. The enzymes, CTec2 (Novozymes,
Denmark), HTec2 (Novozymes, Denmark), and Multifect Pectinase
(Genencor Inc, USA) were added at 10, 2.5, and 2.5 mg protein per g
glucan, respectively. To inhibit bacteria growth 40 mg/L tetracycline
was added. Enzymes were deactivated by heating samples to 99 C.
Monomeric glucose and xylose concentrations were determined by
analyzing 1 ml of the filtered sample through HPLC. All hydrolysis
samples were run in triplicates.
2.4. Enzymatic hydrolysis
For determination of cellulosic conversion to fermentable
glucan and xylan enzymatic hydrolysis of AFEX-pretreated corn
stover samples was conducted at 6% (w/w) glucan loading of 50 g
total weight in 125 mL Erlenmeyer flask for 96 h at 250 rpm and
50 C. The enzymes, CTec2 (Novozymes, Denmark), HTec2 (Novozymes,
Denmark), and Multifect Pectinase (Genencor Inc, USA),
were added at 20, 5, and 5 mg protein per g glucan, respectively.
The pH of hydrolysis reaction was maintained at 4.8 using 12.1 M
HCl. At the completion of hydrolysis, the slurry was centrifuged at
14000 rpm for 30 min to collect the hydrolyzate which will be used
for the subsequent fermentation experiment. The pH of hydrolyzates
were adjusted to 5.5, then they were sterile filtered using
Stericup through 0.22 mm membrane. Hydrolyzate flasks were
tightly sealed with rubber stoppers and secured with tape before
being placed in an incubator set at 50 C at 250 rpm for 5 h. After
the temperature in the flasks reached 50 C, the flasks were
Table 2
Soil type and nutrient amounts calculated in Parts Per Million (PPM) of the four locations studied in Michigan for this study.
Location Soil type 20

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ตารางที่ 1ชื่อไฮบริด Bt นิสัย ตำแหน่ง และปีโต stover ข้าวโพดที่วิเคราะห์ในการทดลองลักษณะซีด RMe Bt isoline สถาน (เขต MI)2010 2011Nutech 2A 804 104 ไม่ Ingham ฮิสทอ เมสัน Ingham ฮิสทอ Menominee, MenomineeNutech 5N 804(GTa/ CBb/ LLc/ RWd)104 Cry1AB, mCRY3 Ingham ฮิสทอ Menominee Ingham ฮิสทอ เมสัน Menomineeเบย์ไซด์ 90 4090 เมสันเมสัน Menominee Ingham ฮิสทอ ไม่ Menominee3090 เบย์ไซด์(GTa/ CBb/ LLc)90 Cry1AB เมสัน Menominee Ingham ฮิสทอ เมสัน MenomineeRM: ญาติครบมี GT: ไกลโฟทน ข CB: ควบคุมมอดข้าวโพดc LL: ลิเบอร์ตี้ลิงค์ (เผื่อ Glufosinate) ดี RW: ควบคุมรากหนอนTumbalam 120 P. ร้อยเอ็ด / ชีวมวลและพลังงานชีวภาพ 85 119e125 (2016)เพิ่มขึ้นสามเท่า 2 mg เทคนิคเหมือนกับที่ถูก assayed ใช้การacetyl โบรไมด์ละลายลิกนิ (ABSL) วิธี [20] ABSLวิธีทำ โดยการรักษาวัสดุผนังเซลล์ ด้วย 25% (v /v) โซลูชันของ acetyl โบรไมด์ในกรดอะซิติกน้ำแข็งภายใต้ความอ่อนโยนเครื่องทำความร้อนเพื่อ solubilize ลิกนิเมตริกซ์ การ solubilizedลิกนิ volumetrically ถูกเจือจาง ด้วยกรดอะซิติกน้ำแข็ง และassayed ใช้ photospectrometer ตัวที่ 280 nm (Spectromax 384เครื่องหมายบวก) การคำนวณลิกนิเนื้อหา ค่าสัมประสิทธิ์การสูญเสียโมเลกุลข้าวโพด (17.75 L g 1 ซม. 1) ใช้ ที่มีก่อนหน้านี้กำหนดไว้ในเอกสารประกอบการ เป็นการวิเคราะห์องค์ประกอบของลิกนิดำเนินการโดยใช้วิธี thioacidolysis ซึ่งในการตรวจหา p-Hydroxylphenyl (H), Guaiacyl (G), และ Syringyl (S)อสามารถรวมในเมตริกซ์ลิกนิผ่านเชื่อมโยงอีเธอร์ b-O-4ใช้แห้ง และแยก lignocellulosic วัสดุ สาม2 มิลลิกรัมเหมือนกับชั่งลงในขวดแก้ว และอุ่นด้วยการส่วนผสมของ diethyl trifluoride dioxane, ethanethiol และโบรอนetherate จะปลดปล่อยอสามารถลิกนิ Thioether แยกอสามารถ derivatized ได้มา silylated กับบีเอสเอ และquantitated โดยใช้ GCeMS (Agilent 7890A / 5975C MS) การวิเคราะห์ตามเผยแพร่ขั้นตอน [20]2.3. ปรับสภาพขยายเส้นใยแอมโมเนีย (AFEX)AFEX เป็นกระบวนการ thermochemical สำหรับ pretreating ชีวมวลdecrystallize lignocellulose โครงสร้าง โดยการเอา hemicelluloseและลดเนื้อหาลิกนิ ทำการปรับสภาพ AFEX ตามข้าวโพดแต่ละตัวอย่าง stover ตามโดยงานใหญ่ Bals et al. 2010[21], ใช้เตาปฏิกรณ์สแตนเลส 22 mL อุ่นในความร้อนโลหะบล็อก ตัวอย่างสำหรับการโหลดไม้สูงเอนไซม์ในระบบย่อยได้pretreated ใช้ 300 มล.สแตนพารร์ปฏิกรณ์ความร้อนในการเครื่องทำความร้อนหิ้ง ถูกใช้สำหรับตัวอย่างทั้งหมดเงื่อนไข AFEX0.6 g H2O/g แห้งตัวอย่าง ตัวอย่างแห้ง 1 กรัม NH3/g เวลาเรสซิเดนซ์30 นาที และชีวมวล C. 100 ออก และอบแห้งในอุณหภูมิดูดค้างคืน หลัง AFEX เอนไซม์ในระบบย่อยดำเนินการที่น้ำตาลอสามารถเช่นกลูโคสและสารเผยแพร่สำหรับหมักในแปลงเอทานอล AFEXpretreatedตัวอย่างทดสอบประสิทธิผล โดยดำเนินการเอนไซม์ในระบบย่อยในรายการซ้ำ ตัวอย่างถูกโหลดลงใน20 mL ขวด scintillation ที่กลูแคน 1% (w/v) ที่โหลด ด้วยการทำงานปริมาณ 15 mL ทำการย่อยที่ใช้วัดค่า pH 4.8บัฟเฟอร์โซเดียมซิเตรต 50 มม.สำหรับปั่นตู้ (ใหม่ 72 ชมวิทยาศาสตร์สวิก แอนฟิวส์ CT) ที่ 50 C ความเร็วปั่นป่วน250 รอบต่อนาที โซเดียม azide เพิ่มที่ความเข้มข้นของ 0.5 มม.ป้องกันการเติบโตของจุลินทรีย์ เอนไซม์ CTec2 (Novozymesเดนมาร์ก), HTec2 (Novozymes เดนมาร์ก), และ Multifect Pectinaseเพิ่ม (Genencor Inc, USA) ที่ 10, 2.5 และโปรตีน 2.5 มิลลิกรัมต่อกรัมกลูแคน ตามลำดับ การยับยั้งแบคทีเรียเติบโต 40 mg/L เตตราไซคลีนถูกเพิ่ม เอนไซม์ถูกปิดใช้งานโดยตัวอย่างที่ค. 99ความเข้มข้นกลูโคสและสาร monomeric ถูกกำหนดโดยวิเคราะห์ 1 มิลลิลิตรของตัวอย่างที่ถูกกรองผ่าน HPLC ย่อยทั้งหมดตัวอย่างที่ถูกเรียกใช้ใน triplicates2.4. เอนไซม์ในระบบย่อยการกำหนดแปลงไลต์ fermentableกลูแคนและ xylan เอนไซม์ย่อยข้าวโพด AFEX pretreatedดำเนินการตัวอย่าง stover ที่โหลดกลูแคน 6% (w/w) 50 กรัมรวมน้ำหนัก 125 mL ขวด Erlenmeyer สำหรับ h 96 ที่ 250 rpm และค. 50 เอนไซม์ CTec2 (Novozymes เดนมาร์ก), HTec2 (Novozymesเดนมาร์ก), และ Multifect Pectinase (Genencor Inc, USA),เพิ่มที่ 20, 5 และ 5 มิลลิกรัมโปรตีนต่อกลูแคน g ตามลำดับPH ของปฏิกิริยาย่อยถูกเก็บรักษาไว้ที่ 4.8 ใช้ 12.1 MHCl ที่เสร็จสิ้นสลาย ละลายถูกเหวี่ยงที่30 นาทีเก็บ hydrolyzate ซึ่งจะใช้ 14000 รอบต่อนาทีสำหรับการทดลองหมักตามมา ค่า pH ของ hydrolyzatesถูกปรับเป็น 5.5 แล้วพวกเขาก็ผ่านการฆ่าเชื้อกรองโดยใช้Stericup ผ่านเมมเบรน 0.22 มม. Hydrolyzate ขวดได้ปิดผนึกพร้อมจุกยางแน่น และปลอดภัย ด้วยเทปก่อนการวางในตู้อบที่ตั้งที่ 50 C ที่ 250 rpm สำหรับ 5 หลังมีเบ้าอุณหภูมิในขวดถึง 50 Cตารางที่ 2จำนวนชนิดและสารอาหารของดินคำนวณในส่วนต่อล้าน (PPM) ของสี่ตำแหน่งศึกษาในหัวข้อการศึกษานี้ชนิดของดินตั้ง 20

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ตารางที่ 1
ชื่อไฮบริดลักษณะบาทสถานที่และปีที่ปลูกสำหรับซากถั่วลิสงข้าวโพดวิเคราะห์ในการทดสอบ.
Isoline RME บาทลักษณะที่ตั้ง (เคาน์ตี้ MI)
2010 2011
Nutech 2A 804 104 ไม่มีอิงกัมนอว์ Menominee Ingham อว์เมสัน , Menominee
Nutech 5N 804
(GTA
/ CBB
/ LLC
/ RWD
)
104 cry1Ab, mCRY3 อิงกัมนอว์ Menominee อิงกัมนอว์เมสัน Menominee
Bayside 4090 90 ไม่มีเมสัน Menominee อิงกัมนอว์เมสัน Menominee
Bayside 3090
(GTA
/ CBB
/ LLC
)
90 Cry1Ab เมสัน Menominee อิงกัมนอว์เมสัน Menominee
RM: ครบกำหนดพัทธ.
GT: Glyphosate ทน CB B: ข้าวโพดหนอนควบคุม.
C ll: เสรีภาพการเชื่อมโยง (ความอดทน glufosinate) D RW:. การควบคุมหนอนราก
120 พี Tumbalam et al, / ชีวมวลและพลังงานชีวภาพ 85 (2016) 119e125
เพิ่มขึ้นสามเท่า 2 มิลลิกรัมซ้ำทางเทคนิคซึ่งได้รับการวิเคราะห์โดยใช้
acetyl โบรไมด์ลิกนินที่ละลายน้ำได้ (ABSL) วิธีการ [20] ABSL
วิธีการดำเนินการโดยการรักษาวัสดุผนังเซลล์ที่มี 25% (v /
v) การแก้ปัญหาของ acetyl โบรไมด์กรดอะซิติกน้ำแข็งภายใต้อ่อนโยน
เงื่อนไขความร้อนจะละลายเมทริกซ์ลิกนิน ละลาย
ลิกนินถูกเจือจาง volumetrically ด้วยกรดอะซิติกน้ำแข็งและ
assayed ใช้ photospectrometer ที่ 280 นาโนเมตร (Spectromax 384
บวก) สำหรับการคำนวณเนื้อหาลิกนินค่าสัมประสิทธิ์การสูญเสียฟันกราม
ข้าวโพด (17.75 กรัม L? 1 ซม. 1
) ถูกนำมาใช้ซึ่งก่อนหน้านี้
ที่กำหนดไว้ในวรรณคดี การวิเคราะห์องค์ประกอบของลิกนินได้รับการ
ดำเนินการโดยใช้วิธีการ thioacidolysis ซึ่งถูกนำมาใช้ในการ
ตรวจสอบ P-Hydroxylphenyl (H), Guaiacyl (G) และ Syringyl (S)
โมโนเมอร์ที่จดทะเบียนในเมทริกซ์ลิกนินผ่าน BO-4 เชื่อมโยงอีเทอร์.
ใช้แห้ง และวัสดุลิกโนเซลลูโลสที่แยกสาม
2 มิลลิกรัมซ้ำชั่งเข้าไปในขวดแก้วและให้ความร้อนที่มี
ส่วนผสมของ dioxane, ethanethiol และโบรอน trifluoride diethyl
etherate เพื่อปลดปล่อยโมโนเมอร์ลิกนิน ที่สกัดเทียบกับโมเลกุล
โมโนเมอร์ derivatized ถูก silylated ต่อมากับบีเอสเอและ
quantitated โดยใช้การวิเคราะห์ GCeMS (Agilent 7890A / 5975C MS) ตาม
ขั้นตอนการตีพิมพ์ [20].
2.3 แอมโมเนียขยายตัวไฟเบอร์ปรับสภาพ (AFEX)
AFEX เป็นกระบวนการความร้อนสำหรับ pretreating ชีวมวลเพื่อ
decrystallize โครงสร้างลิกโนเซลลูโลสเฮมิเซลลูโลสโดยการลบ
และลดเนื้อหาลิกนิน AFEX ปรับสภาพได้รับการดำเนินการเกี่ยวกับ
ตัวอย่างซากถั่วลิสงข้าวโพดบุคคลตามที่อธิบาย Bals et al., ในปี 2010
[21] โดยใช้เครื่องปฏิกรณ์มลสแตนเลส 22 ร้อนในเครื่องทำความร้อนโลหะ
บล็อก ตัวอย่างที่เป็นของแข็งการย่อยสลายของเอนไซม์โหลดสูงได้รับการ
ปรับสภาพการใช้ขนาด 300 มลสแตนเลสพาร์ปฏิกรณ์ร้อนใน
เสื้อคลุมร้อน เงื่อนไข AFEX ใช้สำหรับทุกตัวอย่างมี
0.6 กรัม H2O / g ตัวอย่างแห้ง 1 กรัม NH3 / g ตัวอย่างแห้งที่อยู่อาศัยเวลา
30 นาทีและอุณหภูมิ 100 องศาเซลเซียสชีวมวลจะถูกลบออกและแห้งใน
ตู้ดูดควันข้ามคืน หลังจากการรักษา AFEX, เอนไซม์ย่อยสลาย
ได้ดำเนินการที่โมโนเมอร์น้ำตาลเช่นกลูโคสและไซโลส
ถูกปล่อยออกมาสำหรับการหมักในแปลงเอทานอล AFEXpretreated
ตัวอย่างได้รับการทดสอบเพื่อให้เกิดประสิทธิภาพโดยการดำเนินการ
ย่อยโปรตีนในที่ซ้ำกัน ตัวอย่างถูกโหลดลงใน
20 มลขวดประกายที่ 1% (w / v) โหลดกลูแคนกับการทำงาน
ปริมาณ 15 มิลลิลิตร การย่อยได้ดำเนินการที่ pH 4.8 โดยใช้
ขนาด 50 มมบัฟเฟอร์โซเดียมซิเตรตเป็นเวลา 72 ชั่วโมงในศูนย์บ่มเพาะปั่น (New
Brunswick วิทยาศาสตร์ฟีลด์, CT) ที่ 50 C ที่มีความเร็วในการกวน
250 รอบต่อนาที โซเดียม azide ถูกเพิ่มเข้ามาในช่วงความเข้มข้น 0.5 มิลลิเมตรเพื่อ
ป้องกันการเจริญเติบโตของเชื้อจุลินทรีย์ เอนไซม์, CTec2 (Novozymes,
เดนมาร์ก), HTec2 (Novozymes, เดนมาร์ก) และ Multifect เพคติเนส
(Genencor Inc, สหรัฐอเมริกา) มีการเพิ่มที่ 10, 2.5, และโปรตีน 2.5 มิลลิกรัมต่อกรัม
กลูแคนตามลำดับ ในการยับยั้งการเจริญเติบโตของแบคทีเรีย 40 มิลลิกรัม / ลิตร tetracycline
ถูกเพิ่มเข้ามา เอนไซม์ถูกปิดการใช้งานตามตัวอย่างร้อนถึง 99 องศาเซลเซียส
monomeric กลูโคสและไซโลสความเข้มข้นได้รับการพิจารณาโดย
การวิเคราะห์ 1 มิลลิลิตรของกลุ่มตัวอย่างที่กรองผ่าน HPLC จองจำทั้งหมด
ตัวอย่างที่ถูกเรียกใช้ใน triplicates.
2.4 เอนไซม์
สำหรับการกำหนดของการแปลงเซลลูโลสเพื่อย่อย
กลูแคนและไซแลนย่อยโปรตีนของ AFEX-ปรับสภาพข้าวโพด
ตัวอย่าง Stover ได้ดำเนินการที่ 6% (w / w) โหลดกลูแคนจาก 50 กรัม
น้ำหนักรวม 125 มล Erlenmeyer ขวด 96 ชั่วโมงที่ 250 รอบต่อนาที
50 องศาเซลเซียสเอนไซม์ CTec2 (Novozymes, เดนมาร์ก) HTec2 (Novozymes,
เดนมาร์ก) และ Multifect เพคติเนส (Genencor Inc, USA)
มีการเพิ่มที่ 20, 5 และ 5 โปรตีนมิลลิกรัมต่อกรัมกลูแคนตามลำดับ.
ค่า pH ของ ปฏิกิริยาการย่อยสลายได้รับการเก็บรักษาไว้ที่ 4.8 ใช้ 12.1 M
HCl ที่เสร็จสิ้นการไฮโดรไลซิสารละลายที่ถูกหมุนเหวี่ยงที่
14,000 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 30 นาทีในการเก็บรวบรวมไฮโดรไลเสทซึ่งจะถูกนำมาใช้
สำหรับการทดสอบการหมักตามมา ค่า pH ของ hydrolyzates
มีการปรับเป็น 5.5 แล้วพวกเขาก็ถูกกรองผ่านการฆ่าเชื้อโดยใช้
Stericup ผ่านเมมเบรน 0.22 มิลลิเมตร ขวดไฮโดรไลถูก
ปิดผนึกอย่างแน่นหนากับ stoppers ยางและรักษาความปลอดภัยด้วยเทปก่อนที่จะ
ถูกวางไว้ในศูนย์บ่มเพาะที่ตั้งอยู่ที่ 50 C ที่ 250 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 5 ชั่วโมง หลังจากที่
อุณหภูมิในขวดถึง 50 C, ขวดเป็น
ตารางที่ 2
ชนิดของดินและปริมาณสารอาหารการคำนวณในส่วนต่อล้านส่วน (PPM) สถานที่สี่ศึกษาในมิชิแกนศึกษานี้.
สถานที่ตั้งของดินชนิด 20

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ตารางที่ 1ไฮบริด ชื่อ ลักษณะ ที่ตั้ง บีที และ ปี ปลูกข้าวโพดฝักสำหรับข้อมูลในการทดลองIsoline RME บีทีคุณลักษณะสถานที่ ( มณฑล มิ )2010 2011nutech 2A นี่ไม่ Ingham , Saginaw Menominee , Ingham , Saginaw เมสัน เมโนมินีnutech 5N แล้ว( จีทีเอ/ cbb/ แ/ rwd)cry1ab mcry3 104 , Ingham , Saginaw Menominee , Ingham , Saginaw เมสัน เมโนมินีเบย์ไซด์ สินค้าไม่ เมสัน เมโนมินี Ingham , Saginaw เมสัน เมโนมินี3090 เบย์ไซด์( จีทีเอ/ cbb/ แ)90 cry1ab เมสัน เมโนมินี Ingham , Saginaw เมสัน เมโนมินีRM : ความสัมพันธ์เป็น GT : เสทใจกว้าง . B CB : ควบคุมหนอนเจาะข้าวโพดC ll : เสรีภาพลิงค์ ( ความอดทนกลูโฟซิเนต ) D ถ้าควบคุมหนอนบอน120 หน้า tumbalam et al . / ชีวมวลและพลังงาน 85 ( 2016 ) 119e125ทำสำเนาสามฉบับ 2 มิลลิกรัม ซึ่งเป็นปริมาณการใช้เทคนิคซ้ำทิลโบรไมด์ละลายในน้ำ ( absl ) [ 20 ] การ abslวิธีทำโดยการรักษาวัสดุผนังเซลล์ด้วย 25% ( v /5 ) โซลูชั่นของทิลโบรไมด์ในกรดแอซีติกภายใต้อ่อนโยนเครื่องสภาพ solubilize และลิกนินเมทริกซ์ การสร้างลิกนินด้วยการวัดปริมาตรเจือจางกับกรดแอซีติกและปริมาณการใช้ photospectrometer ที่ 280 nm ( spectromax 384พลัส ) สำหรับลิกนินลดลง ค่าสัมประสิทธิ์การสูญพันธุ์ฟันกรามข้าวโพด ( 17.75 ผม G1 CM1) มาใช้ ซึ่งก่อนหน้านี้มุ่งมั่นในวรรณคดี การวิเคราะห์องค์ประกอบและลิกนินการใช้ thioacidolysis วิธีซึ่งใช้ตรวจสอบ p-hydroxylphenyl ( H ) , ไกวซิล ( G ) และ syringyl ( S )แบบรวมในน้ำ b-o-4 เมทริกซ์ผ่านอีเทอร์บริการสาธารณะใช้แห้งและแยก lignocellulosic วัสดุ , สาม2 มก. ซ้ำได้ชั่งน้ำหนักในขวดแก้ว และอุ่นด้วยส่วนผสมของไดออกเซน ethanethiol , และไดโบรอนไตรฟลูออไรด์etherate ปลดปล่อยปริมาณโมโนเมอร์ . สกัดไทโออีเทอร์derivatized โมโนเมอร์ จัดการและ silylated กับบีเอสเอที่ผ่านการวิเคราะห์ gcems ( Agilent 7890a / 5975c MS ) ตามเพื่อเผยแพร่กระบวนการ [ 20 ]2.3 การขยายเส้นใย ( Afex ) แอมโมเนียAfex คือกระบวนการเคมีความร้อนสำหรับ pretreating จำนวนสิ่งมีชีวิตต่อหน่วยพื้นที่decrystallize ลิกโนเซลลูโลส เฮมิเซลลูโลส โครงสร้าง ด้วยการและการลดลิกนิน . คือใช้ Afex ขั้นต้นแต่ละฝักข้าวโพดตัวอย่างตามที่อธิบายไว้โดย bals et al . , ใน 2010[ 21 ] ใช้ 22 ml สแตนเลสอุ่นในเตาปฏิกรณ์ความร้อนโลหะบล็อก ตัวอย่างสูงทึบโหลดเอนไซม์คือผ่าน 300 มล. ใช้อุ่นในเตาสแตนเลส .เสื้อคลุมของความร้อน การใช้ตัวอย่าง Afex เงื่อนไข0.6 กรัม / กรัมตัวอย่าง h2o แห้ง 1 กรัม / กรัม แห้ง nh3 ตัวอย่าง , ระยะเวลา30 นาทีและอุณหภูมิ 100 องศาเซลเซียสสามารถถูกเอาออก และแห้งในเป็นตู้ดูดควันในชั่วข้ามคืน หลังจาก Afex เอนไซม์บําบัดดำเนินการที่น้ำตาลกลูโคสและไซโลส แบบ เช่นถูกปล่อยตัวในการแปลงสำหรับการหมักเอทานอล afexpretreatedตัวอย่างทดสอบประสิทธิภาพโดยการแสดงเอนไซม์ในที่ซ้ำกัน จำนวนโหลดลงข้อมูล 20 ml ขวดที่ 1% ( w / v ) กลูแคนโหลดกับการทํางานปริมาณ 15 มิลลิลิตรเอนไซม์ที่ pH 4.8 การใช้50 มิลลิเมตรโซเดียมซิเตรตบัฟเฟอร์สำหรับ 72 ชั่วโมงใน incubator shaker ( ใหม่บรุนซ์ทางวิทยาศาสตร์ Enfield , CT ) ที่ 50 องศาเซลเซียสอัตราการกวนของ250 รอบต่อนาที โซเดียมเป็นไซด์ที่ความเข้มข้น 0.5 มม.ป้องกันการเจริญเติบโตของจุลินทรีย์ เอนไซม์ ctec2 ( กุ้ง , ,เดนมาร์ก ) , htec2 ( กุ้ง , เดนมาร์ก ) , และ multifect เพคติเนส( genencor Inc . , USA ) เพิ่ม 10 , 2.5 , 2.5 มิลลิกรัม / กรัมโปรตีนกลูแคน ตามลำดับ ยับยั้งการเจริญเติบโตของแบคทีเรีย 40 มก. / ล. เตตราไซคลีนถูกเพิ่มเข้ามา เอนไซม์หยุดการทำงาน โดยตัวอย่างร้อนถึง 99 องศาเซลเซียสกลูโคสและไซโลสโดยวิธีวิเคราะห์โดยวิเคราะห์ 1 มิลลิลิตร กรองด้วย HPLC ตัวอย่าง . ย่อยทั้งหมดกลุ่มตัวอย่างที่ใช้ในการล้อม .2.4 . เอนไซม์สำหรับการกำหนดแปลงเซลลูโลสเพื่อหมักกลูแคน และ เอนไซม์ไซแลนเนส Afex ผ่านของข้าวโพดตัวอย่างซากดำเนินการที่ 6 % ( w / w ) กลูแคนโหลด 50 กรัมน้ำหนักรวม 125 ml ในขวดเออร์เลนเมเยอร์สำหรับ 96 H ที่ 250 รอบต่อนาที และ50 องศาเซลเซียสเอนไซม์ ctec2 ( กุ้ง , กุ้ง , htec2 ( เดนมาร์ก ) ,เดนมาร์ก ) , และ multifect เพคติเนส ( genencor Inc . , USA )เพิ่ม 20 , 5 และ 5 มิลลิกรัม / กรัมโปรตีน กลูแคน ตามลำดับpH ของปฏิกิริยาการย่อยสลายไว้ที่ 4.8 ใช้ 12.1 เมตรHCL . ที่สมบูรณ์ของความเข้มข้นที่ระดับไฮโดรคือ14 , 000 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 30 นาที เพื่อรวบรวม hydrolyzate ซึ่งจะใช้สำหรับการทดลองหมักต่อ pH ของ hydrolyzatesกำลังปรับ 5.5 , แล้วพวกเขาปลอดเชื้อกรองโดยใช้stericup ผ่านเมมเบรน 0.22 มิลลิเมตร hydrolyzate ขวดคือผนึกแน่นด้วยยาง และมีความปลอดภัยกับเทปก่อนถูกวางไว้ในตู้อบที่ตั้งไว้ ที่ 250 รอบต่อนาที 50 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 5 ชั่วโมง หลังจากอุณหภูมิในขวดถึง 50 C ขวดคือตารางที่ 2ชนิดของดินและธาตุอาหารในปริมาณที่คำนวณในส่วน ต่อล้านส่วน ( ppm ) สี่สถานที่เรียนใน Michigan สำหรับการศึกษานี้ชนิดของดิน 20 สถานที่