PCR for Halobacteriovorax isolates.

PCR for Halobacteriovorax isolates. Cultures of Halobacteriovorax
against E. coli and S. Typhimurium were subjected to real-time PCR.
Halobacteriovorax-specific primers Bac676F and Bac1442R, as described
by Davidov et al. (30), were used to amplify a portion of the 16S rRNA
gene of the Bacteriovoraceae (Halobacteriovoraceae) family members.
Plaque plugs were picked/stored in sterile seawater and diluted 1:10 in
peptone yeast extract (PYE) buffer, and the cells were heated at 99°C for 5
min, which lysed the bacteria to release the DNA. One microliter of each
heat-treated strain was subjected to 94°C for 120 s and 45 cycles of PCR at
94°C for 60 s, 56°C for 60 s, and 72°C for 60 s. PCR was performed in 25-l
reaction tubes containing SYBR green Taq ReadyMix (Sigma-Aldrich, St.
Louis, MO) to give 10mMTris-HCl (pH 8.3), Taq DNA polymerase and
SYBR green 1 (amounts proprietary), 50 mM KCl, 3 mM MgCl, 0.2 mM
deoxynucleoside triphosphate (dNTPs), 0.2 M each primer (Integrated
DNA Technologies, Skokie, IL), and 1 l of test sample in a Cepheid
Smart Cycler (Cepheid, Sunnyvale, CA).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

PCR สำหรับแยก Halobacteriovorax วัฒนธรรมของ Halobacteriovoraxจาก E. coli และปา Typhimurium ถูกแบบเรียลไทม์ PCRไพรเมอร์เฉพาะ Halobacteriovorax Bac676F และ Bac1442R ตามที่อธิบายไว้โดย Davidov et al. (30), ใช้เพื่อขยายส่วนของ 16S rRNAยีนของสมาชิกในครอบครัว Bacteriovoraceae (Halobacteriovoraceae)คราบปลั๊กเบิก/เก็บไว้ในน้ำทะเลที่ผ่านการฆ่าเชื้อ และเจือจาง 1:10 ในยีสต์ peptone แยกบัฟเฟอร์ (PYE) และเซลล์ถูกทำให้ร้อนที่ 99° C 5นาที ซึ่งนาทีที่ 37uc แบคทีเรียจะปล่อยดีเอ็นเอ หนึ่งไมโครลิตรของแต่ละสายพันธุ์ฆ่าได้ภายใต้การ 94° C เป็นเวลา 120 วินาทีและ 45 รอบของ PCR ที่94° C สำหรับ 60 s, 56° C สำหรับ 60 s และ 72° C สำหรับ 60 คู่รัก PCR ได้ดำเนินการใน 25 ลิตรปฏิกิริยาหลอดที่มี Taq ReadyMix SYBR เขียว (Sigma Aldrich เซนต์หลุยส์ MO) ให้ 10mMTris HCl (pH 8.3), Taq DNA พอลิเมอเรส และสีเขียว SYBR 1 (เจ้าของเงิน), 50 มม. KCl, 3 มม. MgCl, 0.2 mMdeoxynucleoside triphosphate (dNTPs), 0.2 M (รวมสีรองพื้นแต่ละเทคโนโลยีดีเอ็นเอ เชื่อ IL), และ 1 l ของตัวอย่างทดสอบในแบบ Cepheidสมาร์ท Cycler (Cepheid, Sunnyvale, CA)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

PCR สำหรับ Halobacteriovorax แยก วัฒนธรรม Halobacteriovorax
กับ E. coli และ S. Typhimurium ถูกยัดเยียดให้ Real-time PCR.
ไพรเมอร์ Halobacteriovorax เฉพาะ Bac676F และ Bac1442R ตามที่อธิบายไว้
โดย Davidov et al, (30) ถูกนำมาใช้เพื่อขยายส่วนหนึ่งของ 16S rRNA
ยีนของ Bacteriovoraceae (Halobacteriovoraceae) สมาชิกในครอบครัว.
ปลั๊กโล่ถูกหยิบ / เก็บไว้ในน้ำทะเลที่ผ่านการฆ่าเชื้อและปรับลด 01:10 ใน
สารสกัดจากยีสต์เปปโตน (PYE) บัฟเฟอร์และเซลล์ ถูกความร้อนที่ 99 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 5
นาทีซึ่ง lysed แบคทีเรียที่จะปล่อยดีเอ็นเอ หนึ่งไมโครลิตรของแต่ละ
สายพันธุ์ที่ได้รับความร้อนถูกยัดเยียดถึง 94 ° C เป็นเวลา 120 วินาทีและ 45 รอบของ PCR ที่
94 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 60 วินาที, 56 ° C เป็นเวลา 60 วินาทีและ 72 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 60 วินาที PCR ที่ได้ดำเนินการใน 25? L
หลอดปฏิกิริยาที่มีสีเขียว SYBR Taq Readymix (Sigma-Aldrich, St.
Louis, มิสซูรี) เพื่อให้ 10mMTris-HCl (pH 8.3) โพลิเมอร์ Taq DNA และ
SYBR สีเขียว 1 (จำนวนเงินที่เป็นกรรมสิทธิ์) ขนาด 50 มม โพแทสเซียมคลอไรด์, 3 mm MgCl 0.2 มิลลิ
deoxynucleoside triphosphate (dNTPs) 0.2? M แต่ละไพรเมอร์ (แบบบูรณาการ
เทคโนโลยีดีเอ็นเอ, สโกกี, IL) และ 1 ลิตรตัวอย่างการทดสอบใน Cepheid
สมาร์ท Cycler (Cepheid ซันนีเวล, แคลิฟอร์เนีย)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ซึ่ง halobacteriovorax เชื้อ วัฒนธรรมของ halobacteriovoraxกับ E . coli และ S . typhimurium ถูก PCR แบบเรียลไทม์halobacteriovorax ที่เฉพาะเจาะจงและไพรเมอร์ bac676f bac1442r ตามที่อธิบายโดย ดาวีดอฟ et al . ( 30 ) , ถูกใช้เพื่อขยายส่วนของ 16S rRNAยีนของ bacteriovoraceae ( halobacteriovoraceae ) สมาชิกในครอบครัวหินปูนปลั๊กถูกเลือกจัดเก็บไว้ในน้ำทะเลฆ่าเชื้อและเจือจาง 1 : 10 ในสารสกัดจากยีสต์เปปโตน ( พาย ) บัฟเฟอร์ และเซลล์ก็อุ่นที่ 99 ° C 5มิน ซึ่ง lysed แบคทีเรียปล่อย DNA ในหนึ่งไมโครลิตรความเครียดความร้อนภายใต้ 94 ° C 120 และ 45 รอบของ PCR ที่94 ° C 60 ° C 56 60 และ 72 ° C เป็นเวลา 60 วินาที ซึ่งในการปฏิบัติ 25-lปฏิกิริยาของหลอดที่มีสีเขียว SYBR ทัค readymix ( ซิกม่า Aldrich เซนต์หลุยส์ โม ) เพื่อให้ 10mmtris HCl ( pH 8.3 ) , แท็ก DNA polymerase และSYBR กรีน 1 ( ยอดเงินที่เป็นกรรมสิทธิ์ ) , โพแทสเซียมคลอไรด์ 50 มม. 3 มม. , 0.2 มม.deoxynucleoside ไตรฟอสเฟต ( dntps ) 0.2 M แต่ละสีรองพื้น ( แบบบูรณาการดีเอ็นเอเทคโนโลยี นิวยอร์ก อิลลินอยส์ ) และ 1 ลิตรของตัวอย่างการทดสอบในเซฟีดสมาร์ทรอบ ( Cepheid Sunnyvale , CA )