The present work has several implic

The present work has several implications for the chemistry of heme proteins. (1) The existence of the PTM in GlbN [40] and its engineered presence in GlbN [22] and CtrHb cautions that the PTM may occur in additional heme proteins, not only wild-type but also unwittingly in His-tagged versions, (histidine) variants, or designed proteins. (2) In preparing the histidine Nε2–heme vinyl Cα crosslink, care must be exercised in the choice of a reducing agent to avoid heme and protein damage, as occasionally caused by the oxidative by-products of aerobic DT reduction. Anaerobic DT treatment or reduction with alternative agents such as a ferredoxin system [56] if sufficiently powerful may be preferable. (3) It is possible to engineer the crosslink in a b heme protein using relatively mild reaction conditions. Although detailed kinetic analysis was not performed on CtrHb variants, the products are consistent with the mechanism described previously [21], in which case the pKa of the reactive histidine, in addition to its ability to adopt the geometry of the product, is an important factor.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

งานนำเสนอมีผลกระทบหลายสำหรับวิชาเคมีของโปรตีน heme (1) ข้อควรระวังการดำรงอยู่ของ PTM ใน GlbN [40] และแสดงการออกแบบใน GlbN [22] และ CtrHb ว่า PTM ที่อาจเกิดขึ้นใน heme เพิ่มโปรตีน ไม่เฉพาะป่าชนิด แต่ยังไม่ในรุ่นของเขาติดแท็ก ย่อย (histidine) หรือโปรตีนออก (2) ในการเตรียม histidine Nε2 – heme ไวนิล Cα crosslink ต้องใช้ดูแลในหลากหลายตัวแทนลดลงเพื่อหลีกเลี่ยงการเสีย heme และโปรตีน เป็นบางครั้งเกิดจากผลิตภัณฑ์ของแอโรบิก DT ลด oxidative ไม่ใช้ DT รักษาหรือลดกับตัวแทนอื่นเช่นระบบ ferredoxin [56] ถ้า sufficiently มีประสิทธิภาพอาจจะดีกว่า (3) นั้นเป็นที่ต้องวิศวกร crosslink โปรตีน heme b การใช้เงื่อนไขปฏิกิริยาค่อนข้างอ่อน แม้ว่าการวิเคราะห์เดิม ๆ ไม่ได้ทำในตัวแปร CtrHb ผลิตภัณฑ์สอดคล้องกับกลไกนี้อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ [21], ในกรณี pKa histidine ปฏิกิริยา นอกจากความสามารถในการนำมาใช้ในเรื่องเรขาคณิตของผลิตภัณฑ์ เป็นปัจจัยสำคัญ

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

งานปัจจุบันมีผลกระทบหลายเคมีของโปรตีนมากกว่า ( 1 ) การมีอยู่ของ PTM ใน glbn [ 40 ] และออกแบบการแสดงใน glbn [ 22 ] และ ctrhb ข้อควรระวังว่า PTM อาจเกิดขึ้นในโปรตีนฮีมเพิ่มเติม ไม่เพียง แต่ผลิตแต่ยังเซื่องในแท็กรุ่น ( โล่งอก ) ตัวแปร หรือการออกแบบโปรตีน( 2 ) ในการเตรียมตัวเมื่อ n ε 2 –ฮีมไวนิล C αพันธะข้าม , การดูแลจะต้องใช้สิทธิในการเลือก รีดิวซ์ เพื่อหลีกเลี่ยงความเสียหายและฮีมโปรตีน เช่นบางครั้งเกิดจากผลพลอยได้ออกซิเดชันลด DT แอโรบิค การรักษาหรือการใช้แฟรช กับตัวแทนของทางเลือกเช่นระบบ [ 56 ] ถ้า ferredoxin ซุฟจึงมีประสิทธิภาพ ciently อาจจะดีกว่า( 3 ) มันเป็นไปได้ที่จะวิศวกรพันธะข้ามใน บีฮีมโปรตีนโดยใช้เงื่อนไขปฏิกิริยาค่อนข้างอ่อน . แม้ว่าการวิเคราะห์จลนศาสตร์รายละเอียดไม่แสดงบน ctrhb แปร ผลิตภัณฑ์ที่สอดคล้องกับกลไกที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ [ 21 ] , ซึ่งในกรณีที่ pKa ของฮิสติดีนปฏิกิริยา , นอกเหนือไปจากความสามารถในการใช้รูปทรงเรขาคณิตของผลิตภัณฑ์เป็นปัจจัยที่สำคัญ