All yeast specieswere evaluated for their ability to growunder stress
conditions that occur during the wet fermentation of coffee beans according
to the procedure described by Pereira et al. (2012). The isolates
were transferred fromYEPG plates to pre-culture 10 ml YEPG broth and
incubated at 30 °C for 24 h, 120 rpm. Subsequently, 1ml of the resulting
yeast cultures were transferred to 50-ml Erlenmeyer flasks containing
10 ml YEPG broth and grown for 3 h at 120 rpm (until early exponential
phase). At this point, cellswere harvested and diluted in sterilewater to
Abs600 of 0.2. Spots of 3 μL were placed onto stress plates, which were
incubated for at least 48 h at 30 °C.
The test medium used was composed of basal medium [0.05% yeast
extract (Sigma), 0.3% (w/v) vitamin-free Casamino Acids (Difco) and
2.5% agar (Difco)] and 5% glucose (Merck). The basal medium without
an added carbon source was used as a negative control. The heat stress
plates were incubated at 25, 30, 37 or 43 °C. Plates with different glucose
or fructose concentration were prepared by adjusting the sugar
concentration of the basal medium to 15, 30 or 50% (w/w) hexoseequivalent;
the sugar being added by sterile filtration. Ethanol, acetic
acid and lactic acid stress plates were composed of basal medium with
glucose supplemented with 6, 8 or 10% (v/w) ethanol (Sigma); 1, 2 or
3% (v/w) lactic acid (Sigma); 1, 2 or 3% (v/w) acetic acid (Sigma)
(added aseptically). Acidic stress plates were composed of basal medium
with glucose in the pH 2.0, 4.0, 6.0 or 8.0; pH adjustments were
made with sterile 1 M H2SO4 or 1 M NaOH.
All yeast specieswere evaluated for their ability to growunder stressconditions that occur during the wet fermentation of coffee beans accordingto the procedure described by Pereira et al. (2012). The isolateswere transferred fromYEPG plates to pre-culture 10 ml YEPG broth andincubated at 30 °C for 24 h, 120 rpm. Subsequently, 1ml of the resultingyeast cultures were transferred to 50-ml Erlenmeyer flasks containing10 ml YEPG broth and grown for 3 h at 120 rpm (until early exponentialphase). At this point, cellswere harvested and diluted in sterilewater toAbs600 of 0.2. Spots of 3 μL were placed onto stress plates, which wereincubated for at least 48 h at 30 °C.The test medium used was composed of basal medium [0.05% yeastextract (Sigma), 0.3% (w/v) vitamin-free Casamino Acids (Difco) and2.5% agar (Difco)] and 5% glucose (Merck). The basal medium withoutan added carbon source was used as a negative control. The heat stressplates were incubated at 25, 30, 37 or 43 °C. Plates with different glucoseor fructose concentration were prepared by adjusting the sugarconcentration of the basal medium to 15, 30 or 50% (w/w) hexoseequivalent;the sugar being added by sterile filtration. Ethanol, aceticacid and lactic acid stress plates were composed of basal medium withglucose supplemented with 6, 8 or 10% (v/w) ethanol (Sigma); 1, 2 or3% (v/w) lactic acid (Sigma); 1, 2 or 3% (v/w) acetic acid (Sigma)(added aseptically). Acidic stress plates were composed of basal mediumwith glucose in the pH 2.0, 4.0, 6.0 or 8.0; pH adjustments weremade with sterile 1 M H2SO4 or 1 M NaOH.
การแปล กรุณารอสักครู่..

ยีสต์ทั้งหมด specieswere การประเมินความสามารถในการ growunder ความเครียด
เงื่อนไขที่เกิดขึ้นระหว่างการหมักเปียกของเมล็ดกาแฟตาม
ขั้นตอนที่อธิบายโดยราและคณะ (2012) ไอโซเลท
ถูกถ่ายโอนไปยังแผ่น fromYEPG ก่อนวัฒนธรรม 10 น้ำซุปมล YEPG และ
บ่มที่อุณหภูมิ 30 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 24 ชั่วโมง, 120 รอบต่อนาที ต่อมา 1ml ของผล
ยีสต์ถูกย้ายไปขวดรูปกรวย 50 มิลลิลิตรบรรจุ
10 มิลลิลิตร YEPG น้ำซุปและเติบโตขึ้นเป็นเวลา 3 ชั่วโมงที่ 120 รอบต่อนาที (จนกระทั่งชี้แจงต้น
เฟส) ณ จุดนี้ cellswere เก็บเกี่ยวและเจือจางใน sterilewater เพื่อ
Abs600 0.2 จุดที่ 3 ไมโครลิตรถูกวางลงบนแผ่นความเครียดซึ่งถูก
บ่มเป็นเวลาอย่างน้อย 48 ชั่วโมงที่อุณหภูมิ 30 องศาเซลเซียส
กลางการทดสอบที่ใช้ประกอบด้วยฐานกลาง [0.05% ยีสต์
สกัด (Sigma) 0.3% (w / v) vitamin- ฟรีกรดคาซามิ (Difco) และ
2.5% agar (Difco)] และกลูโคส 5% (เมอร์) กลางฐานโดยไม่มี
แหล่งคาร์บอนเพิ่มถูกนำมาใช้เป็นตัวควบคุมเชิงลบ ความร้อนความเครียด
แผ่นไปบ่มที่อุณหภูมิ 25, 30, 37 หรือ 43 ° C แผ่นที่มีน้ำตาลกลูโคสที่แตกต่างกัน
ความเข้มข้นหรือฟรุกโตสได้รับการจัดทำขึ้นโดยการปรับน้ำตาล
ความเข้มข้นของกลางพื้นฐานถึง 15, 30 หรือ 50% (w / W) hexoseequivalent;
น้ำตาลที่เพิ่มเข้ามาโดยการกรองผ่านการฆ่าเชื้อ เอทานอลอะซิติก
กรดและความเครียดกรดแลคติกแผ่นประกอบด้วยสื่อพื้นฐานที่มี
น้ำตาลกลูโคสเสริมด้วย 6, 8 หรือ 10% (V / w) เอทานอล (Sigma); 1, 2 หรือ
3% (V / w) กรดแลคติก (Sigma); 1, 2 หรือ 3% (V / w) กรดอะซิติก (Sigma)
(เพิ่มในขวดทดลอง) แผ่นความเครียดที่เป็นกรดประกอบด้วยสื่อพื้นฐาน
ที่มีระดับน้ำตาลในค่า pH 2.0, 4.0, 6.0 หรือ 8.0; การปรับค่า pH ถูก
สร้างขึ้นมาด้วยการฆ่าเชื้อ 1 M H2SO4 หรือ 1 M NaOH
การแปล กรุณารอสักครู่..

ทั้งหมด ยีสต์มีการประเมินความสามารถของตนในการ growunder สภาพความเครียดที่เกิดขึ้นระหว่างการหมักเปียก
ของเมล็ดกาแฟตามวิธีการที่อธิบายโดย Pereira et al . ( 2012 ) แยกได้
โอน fromyepg จานวัฒนธรรมก่อน 10 ซุป yepg มิลลิลิตรและบ่มที่อุณหภูมิ 30 องศา C
24 ชม. 120 รอบต่อนาที ต่อมา 1ml ของที่เกิด
เชื้อยีสต์ที่ถูกโอนไปยัง 50 ml ขวดที่มีน้ำซุป yepg เออร์เลนเมเยอร์
10 มิลลิลิตร และโต 3 H ที่ 120 รอบต่อนาที ( จนกว่าต้นแทน
เฟส ) ณจุดนี้ระดับการเก็บเกี่ยวและเจือจางใน sterilewater
abs600 ของ 0.2 จุดที่ 3 μผมถูกวางลงบนจาน ความเครียด ซึ่ง
บ่มอย่างน้อย 48 ชั่วโมง ที่ 30 ° C .
ทดสอบเครื่องมือที่ใช้ประกอบด้วย พื้นฐานปานกลาง [ 0.05 %
ยีสต์สารสกัด ( Sigma ) 0.3% ( w / v ) วิตามินฟรี casamino กรด ( difco ) และ 2.5 %
( difco ) ] และ 5% glucose ( Merck ) สูตรอาหารที่ไม่
เป็นแหล่งคาร์บอน ใช้เป็นชุดควบคุมลบ ความร้อนความเครียด
แผ่นอุณหภูมิ 25 , 30 , 37 หรือ 43 องศา จานกับกลูโคสหรือฟรุคโตสความเข้มข้นแตกต่างกัน
เตรียมปรับน้ำตาลความเข้มข้นของตัวกลางแรกเริ่ม 1530 หรือ 50 % ( w / w ) hexoseequivalent ;
น้ำตาลที่ถูกเพิ่มโดยการกรองที่เป็นหมัน แอลกอฮอล์ กรดอะซิติก กรดแลกติกและความเครียด
จาน ได้แก่ อาหารที่มีน้ำตาลผสม (
6 , 8 หรือ 10 เปอร์เซ็นต์ ( v / w ) เอทานอล ( Sigma ) ; 1 , 2 หรือ 3 %
( v / w ) กรดแลกติก ( Sigma ) ; 1 , 2 หรือ 3 เปอร์เซ็นต์ ( v / w ) กรดน้ำส้ม ( Sigma )
( เพิ่ม aseptically ) จานที่เป็นกรดได้แก่ความเครียด
ขนาดกลางแรกเริ่มกับกลูโคสใน อ 20 , 4.0 , 6.0 และ 8.0 ; Ph ปรับเป็น
ทําหมัน 1 M กรดซัลฟิวริก หรือ 1 M NaOH
การแปล กรุณารอสักครู่..
