Our finding of higher extracellular

Our finding of higher extracellular cellulase activity than intracellular
one is very promising step toward the development of
recombinant cellulolytic strategy, which suffers a major setback due to limited reports of higher extracellular production of cellulase.
There are reports of 100% extracellular production of cellulase
with cloned endoglucanase from B. circulans and B. licheniformis
(Kim et al., 2003). In contrastto above mentioned report,Koide et al.
(1986) reported about 25% of the activity of the cloned endoglucanase
from B. subtilis IF03034 in the extracellular fraction of E. coli.
Even less (about 1%) has been found to be extracellular with cloned
endoglucanases from either B. subtilis DLG (Robson and Chambliss,
1986) or Clostridium thermocellum (Cornet et al., 1983). Most of the
endoglucanase activities in E. coli (Koide et al., 1986), B. subtilis DLG
(Robson and Chambliss, 1986) and C. thermocellum (Cornet et al.,
1983) were found in the periplasm or were retained inside the
cytoplasmic membrane. Production of large zone of clearance in
CMC plate assay also indicates the extracellular nature of expressed
enzyme. Extracellular production of recombinant proteins has several
advantages over secretion into the periplasm (Shokri et al.,
2003). Extracellular production does not require outer-membrane
disruption to recover target proteins, and,therefore, it avoids intracellularproteolysis
byperiplasmicproteases and allows continuous
production of recombinant proteins. The extracellular nature of
enzyme, suggests thatthe leader sequence of -1, 4-endoglucanase
of B. subtilis strain IARI-SP-1 could be utilized for extracellular
production of other recombinant proteins indicating the potential
of the E. coli system for extracellular production of bacterial
cellulases and, possibly, other enzymes, for their characterization.
The estimated molecular weight deduced from SDS PAGE was
shown to be around 54 kDa, similar to the molecular weight of
-1, 4-endoglucanase reported from other Bacillus sp. (Han et al.,
1995; Yang et al., 2010). DNA sequencing studies have earlier
revealed thatthe B. subtilis endoglucanases are formed as precursor
proteins with molecular mass of over 55 kDa, and ultimately yield
an extracellular protein of over 35 kDa after processing which also
involves removal of a peptide segment from the carboxy-terminus
(Robson and Chambliss, 1987; Park et al., 2011). The activities of
recombinant enzyme at higher pH indicate its alkaline nature. The
pH stability of the recombinant cellulase was higher than that of
cellulases produced by B. licheniformis AU 01 (Annamalai et al.,
2013), B. amyloliquefaciens DL-3 (Lee et al., 2008) and B. subtilis
subsp. subtilis A-53 (Kim et al., 2003) which were stable between
pH 7.0 and 9.0. The alkaline nature of enzyme might be due to alkaline
conditions prevailing in the soil. Feng et al. (2007) reported
that 10 of the 11 cloned cellulases from rabbit cecum exhibited
their highest activities at pH 5.5–7.0 and at 40–50 ◦C temperature,
conditions similar to those in the rabbit cecum. The optimal
temperature of the recombinant cellulase obtained in this study
was 50 ◦C and the substrate was CMC; this is similar to P. punctate
cellulase (Robertson and Koehn, 1978) and Bacillus sp. KSM-S237
(Hakamada et al., 1997).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

เราหากิจกรรม cellulase สารสูงกว่าภายในเซลล์มีแนวโน้มมากขั้นตอนการพัฒนาrecombinant cellulolytic กลยุทธ์ ซึ่งทนทุกข์ทรมานมีความล้มเหลวที่สำคัญเนื่องจากจำกัดรายงานของการผลิตสารสูง cellulaseมีรายงานของการผลิตสาร 100% cellulaseด้วยโคลน endoglucanase จาก B. circulans B. licheniformis(Kim et al. 2003) ใน contrastto ข้างต้นกล่าวรายงาน Koide et al(1986) รายงานประมาณ 25% ของกิจกรรมของ endoglucanase โคลนจาก B. subtilis IF03034 เศษส่วนสารของ E. coliแม้แต่น้อย (ประมาณ 1%) ได้พบว่าสารกับโคลนจาก B. subtilis ใดกล่องโต้ตอบ (ร็อบสันและ Chambliss, endoglucanases1986) หรือ Clostridium thermocellum (Cornet et al. 1983) ที่สุดของการกิจกรรม endoglucanase ใน E. coli (Koide et al. 1986), B. subtilis กล่องโต้ตอบ(ร็อบสันและ Chambliss, 1986) และ C. thermocellum (Cornet et al.,1983) พบในการ periplasm หรือถูกเก็บไว้ภายในการนำเยื่อหุ้ม การผลิตของเขตพื้นที่ขนาดใหญ่ของเคลียร์ในCMC แผ่นทดสอบบ่งชี้ธรรมชาติของสารแสดงเอนไซม์ การผลิต recombinant โปรตีนสารมีหลายข้อได้เปรียบกว่าหลั่งลงใน periplasm (Shokri et al.,2003) . การผลิตสารไม่ต้องใช้เมมเบรนชั้นนอกหลีกเลี่ยงการหยุดชะงักในการกู้คืนโปรตีนเป้าหมาย และ ดังนั้น มัน intracellularproteolysisbyperiplasmicproteases และให้ต่อเนื่องการผลิต recombinant โปรตีน ธรรมชาติของสารเอนไซม์ แสดงให้เห็นว่า ผู้นำลำดับของ-1, 4-endoglucanaseของ B. subtilis สายพันธุ์ IARI-SP-1 ที่สามารถใช้ได้สำหรับสารการผลิต recombinant โปรตีนตัวอื่น ๆ เพื่อแสดงศักยภาพระบบสำหรับผลิตสารแบคทีเรีย E. colicellulases และ อาจจะ เอนไซม์อื่น ๆ การจำแนกลักษณะของพวกเขาน้ำหนักโมเลกุลโดยประมาณซึ่งสามารถกล่าวได้จากหน้า SDSแสดงที่จะประมาณ 54 kDa คล้ายกับน้ำหนักโมเลกุลของ-รายงานจาก sp.เชื้ออื่น ๆ endoglucanase 4 1 (Han et al.,1995 Yang et al. 2010) ศึกษาลำดับดีเอ็นเอมีก่อนหน้านี้เปิดเผยว่า endoglucanases B. subtilis เกิดขึ้นเป็นสารตั้งต้นโปรตีนกับมวลโมเลกุลของ 55 kDa และในที่สุด ผลผลิตโปรตีนเป็นสารของ kDa กว่า 35 หลังจากประมวลผลซึ่งยังเกี่ยวข้องกับการกำจัดของเซ็กเมนต์เปปไทด์จากคาร์บ๊อกซี่เทอร์มินัส(ร็อบสันและ Chambliss, 1987 สวน et al. 2011) กิจกรรมของrecombinant เอนไซม์ที่ pH สูงขึ้นบ่งชี้ธรรมชาติของอัลคาไลน์ การความเสถียร pH ของ recombinant cellulase ได้สูงกว่าของcellulases ผลิต โดย B. licheniformis AU 01 (นามา et al.,2013), B. amyloliquefaciens DL-3 (Lee et al. 2008) และ B. subtilissubsp. subtilis A-53 (Kim et al. 2003) ซึ่งมีเสถียรภาพระหว่างpH 7.0 และ 9.0 ธรรมชาติของเอนไซม์อัลคาไลน์อาจจะเนื่องจากอัลคาไลน์เงื่อนไขแลกเปลี่ยนในดิน รายงานฮ et al. (2007)10 ของ cellulases โคลน 11 จากซีกัมกระต่ายแสดงกิจกรรมสูงสุด ที่ pH 5.5-7.0 และ อุณหภูมิ 40 – 50 ◦Cเงื่อนไขคล้ายกับในซีกัมกระต่าย ที่เหมาะสมอุณหภูมิของ cellulase recombinant ที่ได้รับในการศึกษานี้50 ◦C และพื้นผิว CMC นี้จะคล้ายกับ P. punctatecellulase (โรเบิร์ตสันและ Koehn, 1978) และ Bacillus sp. KSM S237(Hakamada et al. 1997)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

การค้นพบของเราของกิจกรรมเซลลู extracellular สูงกว่าเซลล์
หนึ่งเป็นขั้นตอนที่มีแนวโน้มมากต่อการพัฒนาของ
กลยุทธ์เซลลูโลส recombinant ซึ่งทนทุกข์ทรมานล้มเหลวที่สำคัญเนื่องจากการรายงาน จำกัด ของการผลิตสารที่สูงขึ้นของเซลลูเลส.
มีรายงานของการผลิตสาร 100% ของเซลลูเลสอยู่
กับโคลน endoglucanase จาก B. circulans และ licheniformis บี
(Kim et al., 2003) ใน contrastto เหนือรายงานกล่าว Koide et al.
(1986) รายงานประมาณ 25% ของกิจกรรมของ endoglucanase โคลน
จาก B. subtilis IF03034 ในส่วนนอกของเชื้อ E. coli.
แม้แต่น้อย (ประมาณ 1%) ได้รับพบว่ามี extracellular กับโคลน
endoglucanases จากทั้ง B. subtilis DLG (ร็อบสันและแชมบลิ,
1986) หรือ Clostridium thermocellum (Cornet et al., 1983) ส่วนใหญ่ของ
กิจกรรม endoglucanase ใน E. coli (Koide et al., 1986), B. subtilis DLG
(ร็อบสันและแชมบลิ, 1986) และ C thermocellum (Cornet et al.,
1983) ที่พบใน periplasm หรือถูกเก็บไว้ภายใน
เยื่อหุ้มนิวเคลียส การผลิตของโซนที่มีขนาดใหญ่ของการกวาดล้างใน
CMC แผ่นทดสอบยังแสดงให้เห็นถึงธรรมชาติของสารแสดงความ
เอนไซม์ การผลิตนอกของโปรตีนมีหลาย
ข้อได้เปรียบกว่าการหลั่งเข้า periplasm นี้ (Shokri et al.,
2003) การผลิตนอกไม่ต้องนอกเยื่อหุ้มเซลล์
เกิดการหยุดชะงักในการกู้คืนโปรตีนเป้าหมายและจึงหลีกเลี่ยง intracellularproteolysis
byperiplasmicproteases อย่างต่อเนื่องและช่วยให้
การผลิตของโปรตีน ธรรมชาติ extracellular ของ
เอนไซม์ที่แสดงให้เห็นลำดับผู้นำ thatthe -1, 4 endoglucanase
ของ B. subtilis สายพันธุ์ IARI-SP-1 สามารถใช้สำหรับ extracellular
การผลิตโปรตีนอื่น ๆ ระบุศักยภาพ
ของระบบอีโคไลในการผลิตสารของ แบคทีเรีย
เซลลูและอาจจะเป็นเอนไซม์อื่น ๆ สำหรับตัวละครของพวกเขา.
โดยประมาณน้ำหนักโมเลกุล deduced จาก SDS หน้าถูก
แสดงให้เห็นว่าจะอยู่ที่ประมาณ 54 กิโลดาลตันคล้ายกับน้ำหนักโมเลกุลของ
-1 4 endoglucanase รายงานจาก Bacillus SP อื่น ๆ (ฮัน, et al.,
1995;. ยาง et al, 2010) การศึกษาลำดับดีเอ็นเอก่อนหน้านี้ได้มีการ
เปิดเผย B. subtilis thatthe endoglucanases จะเกิดขึ้นเป็นสารตั้งต้น
โปรตีนที่มีมวลโมเลกุลมากกว่า 55 กิโลดาลตันและในที่สุดผลผลิต
โปรตีน extracellular กว่า 35 กิโลดาลตันหลังจากการประมวลผลซึ่งยัง
เกี่ยวข้องกับการกำจัดของส่วนเปปไทด์จาก Carboxy ปลายทาง
( ร็อบสันและแชมบลิ 1987. สวน et al, 2011) กิจกรรมของ
เอนไซม์ที่ pH สูงบ่งบอกถึงธรรมชาติของอัลคาไลน์
เสถียรภาพค่า pH ของเซลลู recombinant สูงกว่าของ
เซลลูผลิตโดย B. licheniformis AU 01 (Annamalai et al.,
2013), B. amyloliquefaciens DL-3 (Lee et al., 2008) และ B. subtilis
subsp subtilis A-53 (Kim et al., 2003) ซึ่งเป็นที่มั่นคงระหว่าง
ค่า pH 7.0 และ 9.0 ลักษณะเป็นด่างของเอนไซม์อาจเนื่องมาจากอัลคาไลน์
เงื่อนไขในดิน ฮ et al, (2007) รายงาน
ว่า 10 จาก 11 เซลลูโคลนจากกระต่ายลำไส้ใหญ่ส่วนต้นแสดง
กิจกรรมสูงสุดของพวกเขาที่ pH 5.5-7.0 และ 40-50 ◦Cอุณหภูมิ
สภาพคล้ายกับผู้ที่อยู่ในลำไส้ใหญ่ส่วนต้นกระต่าย อัตราส่วน
อุณหภูมิของเซลลู recombinant ที่ได้รับในการศึกษาครั้งนี้
เป็น 50 ◦Cและสารตั้งต้นเป็น CMC; นี้จะคล้ายกับพี punctate
เซลลูเลส (โรเบิร์ตและ Koehn, 1978) และ Bacillus SP KSM-S237
(Hakamada et al., 1997)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ของเราหาที่สูงและกิจกรรมของเอนไซม์ในเซลล์มากกว่าหนึ่งคือสัญญาขั้นตอนมากต่อการพัฒนาของทดลองใช้กลยุทธ์ที่ประสบความล้มเหลวที่สำคัญเนื่องจากการรายงาน จำกัด การผลิตและสูงกว่าของเอนไซม์ .มีรายงานพบว่า 100% ของการผลิตเซลลูเลสด้วยโคลน endoglucanase จาก B . circulans และ B . licheniformis( Kim et al . , 2003 ) ใน contrastto ดังกล่าวข้างต้นรายงานสัตวแพทย์ et al .( 1986 ) รายงานเกี่ยวกับ 25% ของกิจกรรมของยีน endoglucanaseจาก B . subtilis if03034 ในส่วนภายนอกเซลล์ของ E . coliแม้แต่น้อย ( ประมาณ 1% ) ได้รับการพบจะพบว่ามีโคลนendoglucanases จาก B . subtilis กล่องโต้ตอบและ แชมบลิส ( ร็อบสัน ,1986 ) หรือ Clostridium thermocellum ( คอร์ เน็ต et al . , 1983 ) มากที่สุดของกิจกรรม endoglucanase ใน E . coli ( สัตวแพทย์ et al . , 1986 ) , B . subtilis กล่องโต้ตอบ( ร็อบสันและ แชมบลิส , 1986 ) และ C thermocellum ( คอร์ เน็ต et al . ,1983 ) พบใน periplasm หรือถูกเก็บไว้ภายในพบเยื่อ การผลิตขนาดใหญ่ของพิธีการในโซนทดสอบจาน CMC ยังบ่งชี้และธรรมชาติของแสดงเอนไซม์ การผลิตรีคอมบิแนนท์โปรตีน พบว่า มีหลายข้อได้เปรียบกว่าการหลั่งเข้าไปใน periplasm ( shokri et al . ,2003 ) การผลิตที่สำคัญ ไม่ต้องใช้เยื่อหุ้มชั้นนอกการกู้คืนโปรตีนเป้าหมายและ ดังนั้น จึงหลีกเลี่ยง intracellularproteolysisbyperiplasmicproteases และช่วยให้ต่อเนื่องการผลิตโปรตีนรีคอมบิแนนท์ . ที่สำคัญ ธรรมชาติของเอนไซม์ พบว่า ผู้นำลำดับ - 1 , 4-endoglucanaseของ B . subtilis iari-sp-1 ความเครียดสามารถใช้สำหรับภายนอกการผลิตรีคอมบิแนนท์โปรตีนแสดงศักยภาพอื่น ๆของระบบสำหรับการผลิตแบคทีเรีย E . coli พบว่าได้และอาจเอนไซม์อื่น ๆ สำหรับคุณสมบัติของพวกเขาน้ำหนักโมเลกุลประมาณ deduced จาก SDS หน้าคือแสดงอยู่ที่ 54 กิโล คล้ายๆกับโมเลกุลของ- 1 , 4-endoglucanase รายงานจาก Bacillus sp . ( Han et al . ,1995 ; ยาง et al . , 2010 ) ดีเอ็นเอลำดับการศึกษาก่อนหน้านี้พบว่า B . subtilis endoglucanases มีรูปแบบเป็นสารตั้งต้นโปรตีนที่มีมวลโมเลกุลมากกว่า 55 kDa และในที่สุดผลผลิตเป็นโปรตีนที่สำคัญกว่า 150 kDa หลังจากการประมวลผลซึ่งยังเกี่ยวข้องกับการกำจัดของกลุ่มเปปไทด์จากคาร์บเทอร์มินัส( และ ร็อบสัน แชมบลิส , 1987 ; ปาร์ค et al . , 2011 ) กิจกรรมของโปรตีนเอนไซม์ที่ pH เป็นด่างสูงถึงธรรมชาติของมัน ที่เสถียรภาพ pH ของเอนไซม์โปรตีน พบว่าได้ผลิตโดย B . licheniformis au 01 ( annamalai et al . ,2013 ) , วท. amyloliquefaciens dl-3 ( ลี et al . , 2008 ) และ B . subtilissubsp . ชุด a-53 ( Kim et al . , 2003 ) ซึ่งมีเสถียรภาพระหว่างpH 7.0 และ 9.0 . ธรรมชาติของเอนไซม์อัลคาไลน์อาจเนื่องจากด่างเงื่อนไขที่เกิดในดิน ฟง et al . ( 2007 ) รายงานที่ 10 ของ 11 โคลนได้จากลำไส้ใหญ่ส่วนต้นมีกระต่ายสูงสุดที่ pH 5.5 และกิจกรรมจำนวน 40 – 50 ◦ C อุณหภูมิเงื่อนไขที่คล้ายกับผู้ที่อยู่ในลำไส้ใหญ่ส่วนต้นกระต่าย . ที่เหมาะสมอุณหภูมิของรีคอมบิแนนท์เอนไซม์ที่ได้ในการศึกษานี้50 ◦ C และพื้นผิว คือ บริษัท นี้จะคล้ายกับ punctate Pเซลลูเลส ( โรเบิร์ต และ Koehn , 1978 ) และ Bacillus sp . ksm-s237( ฮาคามาดะ et al . , 1997 )