cDNA amplificationPolymerase chain

cDNA amplification
Polymerase chain reaction (PCR) was carried out in a 25
μL volume with a mix of 17.27 μL nuclease-free water, 2.5
μL 10× buffer [100 mM Tris-HCl (pH 8.3), 500 mM KCl,
15 mM MgCl2, 0.01% w/v gelatin], 1.6 μL 5 mM dNTPs, 1
μL of 25 pM of each primer, and 0.625 U of Ampli Taq
Polymerase (Roche). The primers used to amplify the conserved
region for group A that codes for the VP7 structural
protein of rotavirus (RV) were as follows: forward (5-
GGCTTTAAAAGAGAGAATTTCCGTCTGG-3) and reverse
(5-GATCCTGTTGGCCATCC-3) [24], for enterovirus (EV)
the highly conserved region among picornaviruses 5'NCR
forward (5-TCCGGCCCCTGAATGCGG-3) and reverse (5-
CACCGGATGGCCAATCCAAT-3) [24], and for astrovirus
(AST) the conserved region of ORF2 forward (5-GGTGTCACAGGACCAAAACC-
3) and reverse (5-TTAGTGAGCCACCAGCCATC-
3) [25].
The amplification conditions included denaturation at
94°C for one minute and 33 cycles at 94°C for 30 seconds,
50°C for 30 seconds and 72°C for 25 seconds, with
a final elongation at 72°C for seven minutes. Agarose gels
were stained with ethidium bromide and examined under
ultraviolet light.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ขยาย cDNAปฏิกิริยาลูกโซ่พอลิเมอเรส (PCR) ได้ดำเนินการใน 25 ตัวเสียง μL กับผสม 17.27 μL ฟรี nuclease น้ำ 2.5บัฟเฟอร์ 10 × μL [100 มม.ตรี-HCl (pH 8.3), KCl, 500 มม.15 มม. MgCl2, 0.01% w/v ตุ๋น], 1.6 dNTPs 5 มม. μL, 1ΜL 25 น.ของแต่ละสีรองพื้น และ 0.625 U ของ Ampli Taqพอลิเมอเรส (Roche) ไพรเมอร์ที่ใช้ในการขยายการนำภูมิภาคสำหรับกลุ่มที่รหัสสำหรับโครงสร้าง VP7โปรตีนของ rotavirus (RV) มีดังนี้: ไปข้างหน้า (5-GGCTTTAAAAGAGAGAATTTCCGTCTGG-3) และย้อนกลับ(5-GATCCTGTTGGCCATCC-3) [24], สำหรับเอนเทอโรไวรัส (EV)ภูมิภาคนำสูงระหว่าง picornaviruses NCR 5'ไปข้างหน้า (5-TCCGGCCCCTGAATGCGG-3) และย้อน (5-CACCGGATGGCCAATCCAAT-3) [24], และ astrovirusภูมิภาค (AST) การนำ ORF2 ไปข้างหน้า (5 - GGTGTCACAGGACCAAAACC-3) และย้อน (5 - TTAGTGAGCCACCAGCCATC-3) [25]Denaturation ที่รวมเงื่อนไขขยาย94° C ในหนึ่งนาทีและรอบ 33 ที่ 94° C เวลา 30 วินาที50° C เวลา 30 วินาทีและ 72° C 25 วินาที มีelongation ขั้นสุดท้ายที่ 72° C ที่ 7 นาที เจ Agaroseสีกับโบรไมด์ ethidium และตรวจสอบภายใต้รังสีอัลตราไวโอเลต

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ขยายยีนโพลีเมอปฏิกิริยาลูกโซ่ (PCR) ได้ดำเนินการใน 25 ปริมาณไมโครลิตรด้วยการผสมผสานของ 17.27 ไมโครลิตรน้ำ Nuclease ฟรี 2.5 ไมโครลิตร 10 ×บัฟเฟอร์ [100 มิลลิ Tris-HCl (pH 8.3) 500 มิลลิ KCl, 15 มิลลิ MgCl2 0.01% w / v เจลาติน] 1.6 ไมโครลิตร 5 มิลลิ dNTPs 1 ไมโครลิตร 25 นของแต่ละไพรเมอร์และ 0.625 U ของ Ampli Taq โพลิเมอร์ (Roche) ไพรเมอร์ที่ใช้ในการขยายป่าสงวนภูมิภาคสำหรับกลุ่มที่รหัสสำหรับโครงสร้าง VP7 โปรตีนของโรตาไวรัส (RV) มีดังนี้ไปข้างหน้า (5 GGCTTTAAAAGAGAGAATTTCCGTCTGG-3) และย้อนกลับ(5 GATCCTGTTGGCCATCC-3) [24] สำหรับ enterovirus (EV) ภูมิภาคอนุรักษ์อย่างมากในหมู่ picornaviruses 5'NCR ไปข้างหน้า (5 TCCGGCCCCTGAATGCGG-3) และย้อนกลับ (5 CACCGGATGGCCAATCCAAT-3) [24] และสำหรับ astrovirus (AST) ภูมิภาคอนุรักษ์ของ ORF2 ไปข้างหน้า (5 GGTGTCACAGGACCAAAACC- 3) และย้อนกลับ (5 TTAGTGAGCCACCAGCCATC- 3) [25]. เงื่อนไขการขยายรวมถึงการสูญเสียสภาพธรรมชาติที่94 องศาเซลเซียสเป็นเวลาหนึ่งนาทีและ 33 รอบที่ 94 ° C เป็นเวลา 30 วินาที50 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 30 วินาทีและ 72 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 25 วินาทีที่มียืดตัวสุดท้ายที่72 ° C เป็นเวลาเจ็ดนาที เจล Agarose ถูกย้อมด้วย ethidium bromide และตรวจสอบภายใต้แสงอัลตราไวโอเลต

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

cDNA amplification
ปฏิกิริยาลูกโซ่ถูกหามออกใน 25
μ L ปริมาณที่มีส่วนผสมของ 17.27 μลิตรนิวเคลียสน้ำฟรี , 2.5
μ L 10 ×บัฟเฟอร์ [ 100 มม. หรือ HCl ( pH 8.3 ) KCl 500 มม.
ชุด 15 มม. , 0.01 % W / V เจลาติน ] 1.6 μชั้น 5 dntps มม. 1
μ L 25 PM ของแต่ละสี และ 0.625 U ของ ampli แทค
Polymerase ( โรช ) ไพรเมอร์ใช้ขยายการอนุรักษ์
ภูมิภาคสำหรับกลุ่มที่รหัสสำหรับ vp7 โครงสร้าง
โปรตีนของโรตา ( RV ) ดังนี้ไปข้างหน้า ( 5 -
ggctttaaaagagagaatttccgtctgg-3 ) และย้อนกลับ
( 5-gatcctgttggccatcc-3 ) [ 24 ] , เอนเทอโรไวรัส ( EV )

picornaviruses เขตอนุรักษ์สูงใน 5'ncr ไปข้างหน้า ( 5-tccggcccctgaatgcgg-3 ) และกลับ ( 5 -
caccggatggccaatccaat-3 ) [ 24 ] และ astrovirus
( AST ) เขตอนุรักษ์ของ orf2 ไปข้างหน้า ( 5-ggtgtcacaggaccaaaacc -
3 ) และกลับ ( 5-ttagtgagccaccagccatc -
3 ) [ 25 ] .
เงื่อนไขแบบรวมที่ 94 ° C (
1 นาที 33 รอบที่ 94 °องศาเซลเซียส 30 วินาที
50 ° C เป็นเวลา 30 วินาทีและ 72 ° C สำหรับ 25 วินาที กับการยืดตัวสุดท้ายที่ 72 ° C เป็นเวลา 7 นาที ( เจล
ถูกย้อมด้วยสีทิเดียมโบรไมด์และตรวจสอบภายใต้
แสงอัลตราไวโอเลต