2. Materials and methods
This work compares the performance of intermittent and continuous UASB reactors treating dairy wastewater at a load of 12 g COD/L/day and subject to operational shocks. Two replicate laboratory-scale UASB reactors (working volume of 6 L) were operated in a continuous mode and two were operated in an intermittent mode. The intermittent cycle consisted of 48 h feed followed by 48 h feedless [46]. The feed concentration for the intermittent reactors was always double the feed concentration used for the continuous reactors, so that in a 96 h period the total COD mass admitted to each reactor was the same. The feed was composed of diluted semi-skimmed milk or whole milk, supplemented with nutrients and alkalinity. The reactors were seeded with approximately 4 L of flocculent sludge adapted to dairy wastewater from an industrial wastewater treatment plant. The inoculation sludge had a SMA (specific methanogenic activity) of 7.1 mL CH4/g VSS/day measured with sodium acetate at (35 ± 1) °C. Throughout the entire experiment, effluent from the reactors was collected in 24 h composite samples. All physical-chemical determinations were made according to Standard Methods [48]. The produced biogas was measured by wet gas meters (Schlumberger). Methane content in biogas was monitored using a Shimadzu GC – 9a gas chromatograph equipped with a Supelco Molecular Sieve 5 A column and a Thermal Conductivity Detector (T = 100 °C). Injection temperature was 45 °C and Helium was used as carrier gas (P = 4.4 kg/cm2). Volatile fatty acids determination was carried out in a Chrompack CP 9001 gas chromatograph equipped with a Chrompack CP – sil5 – CB column and a Flame Ionization Detector (T = 300 °C). The injection temperature was 270 °C and Helium was used as carrier gas with a volumetric flow of 8 mL/min. Biomass samples for FISH (Fluorescence In Situ Hybridization) analyses were collected immediately before each applied shock, at the end of the shock period, and 20 days after the end of the shock. After collection, biomass samples were immediately frozen at −20 °C. For (FISH) experiments, samples were allowed to reach room temperature and were vortexed for 5 min to disrupt granules and other aggregates, and subsequently fixed with formaldehyde (4% v/v). Fixed samples were washed 3 times with PBS (phosphate buffered saline) and stored at −20 °C in a mixture containing 50% PBS and 50% ethanol. Samples were spotted onto the surface of glass slides (2 spots per slide) and allowed to dry for 30 min at 42 °C. Samples were further dehydrated by 3 incubations of 3 min each with increasing concentrations of ethanol (50, 80 and 100% v/v) and finally dried at room temperature. Each spot was covered with 9 μL of hybridization buffer (0.9 M NaCl, 20 mM Tris buffer, 10 mM EDTA (ethylenediaminetetraacetic acid), 0.01% SDS, pH 7.2) and 1 μL of probe working solution (50 mg/mL) of each probe. Probes used were EUB338 (5′-GCGCCTCCCGTAGGAGT-3′, [49]) specific for Eubacteria, Arc915 (5′- GTGCTCCCCCGCCAATTCCT-3′, [50]) specific for Archaea, and SYNM700 (5′-ACTGGTN5TTCCTCCTGATATCTA-3′, [51]) specific for Syntrophomonadaceae. These probes were chosen to assess the microbial population composition, namely the total bacterial population including acidogenic bacteria (EUB338), the Archaea population which includes the methanogens (Arc915), and the fatty acid degraders belonging to the Syntrophomonadaceae (SYNM700). Probes labeled with FITC (EUB338), CY3 (ARC915), or CY5 (SYNM700) were acquired from Eurofins MWG Operon (Germany). Hybridization was performed in a humidified chamber for 3 h at 45 °C. After hybridization, slides were subsequently washed with washing buffer (180 mM NaCl, 20 mM Tris, 5 mM EDTA, 0.01% SDS, pH 7.2) for 30 min at 48 °C. Slides were further incubated with 10 mL of DAPI (2 mg/mL) in PBS at room temperature for 15 min, followed by 3 washes with distilled water at room temperature. The slides were analyzed with an AXIOPLAN microscope equipped with an external UV light source and filters adequate for the fluorescent dyes under use. Images were captured by a CCD camera (Ropers Scientific) and processed with the Metamorph software. The Image J software was used to quantify the fluorescence intensity obtained with each probe. Results are the mean values obtained for at least 3 slides, each spotted at least three times.
The reactors were operated in baseline conditions (HRT = 12 h; OLR (organic loading rate) = 12 g COD/L/d) for several months before the beginning of operational shock experiments. Three types of operational shocks were applied, consisting in the raise of feed fat content, feed volumetric flow, or operational temperature.
2. วัสดุและวิธีการThis work compares the performance of intermittent and continuous UASB reactors treating dairy wastewater at a load of 12 g COD/L/day and subject to operational shocks. Two replicate laboratory-scale UASB reactors (working volume of 6 L) were operated in a continuous mode and two were operated in an intermittent mode. The intermittent cycle consisted of 48 h feed followed by 48 h feedless [46]. The feed concentration for the intermittent reactors was always double the feed concentration used for the continuous reactors, so that in a 96 h period the total COD mass admitted to each reactor was the same. The feed was composed of diluted semi-skimmed milk or whole milk, supplemented with nutrients and alkalinity. The reactors were seeded with approximately 4 L of flocculent sludge adapted to dairy wastewater from an industrial wastewater treatment plant. The inoculation sludge had a SMA (specific methanogenic activity) of 7.1 mL CH4/g VSS/day measured with sodium acetate at (35 ± 1) °C. Throughout the entire experiment, effluent from the reactors was collected in 24 h composite samples. All physical-chemical determinations were made according to Standard Methods [48]. The produced biogas was measured by wet gas meters (Schlumberger). Methane content in biogas was monitored using a Shimadzu GC – 9a gas chromatograph equipped with a Supelco Molecular Sieve 5 A column and a Thermal Conductivity Detector (T = 100 °C). Injection temperature was 45 °C and Helium was used as carrier gas (P = 4.4 kg/cm2). Volatile fatty acids determination was carried out in a Chrompack CP 9001 gas chromatograph equipped with a Chrompack CP – sil5 – CB column and a Flame Ionization Detector (T = 300 °C). The injection temperature was 270 °C and Helium was used as carrier gas with a volumetric flow of 8 mL/min. Biomass samples for FISH (Fluorescence In Situ Hybridization) analyses were collected immediately before each applied shock, at the end of the shock period, and 20 days after the end of the shock. After collection, biomass samples were immediately frozen at −20 °C. For (FISH) experiments, samples were allowed to reach room temperature and were vortexed for 5 min to disrupt granules and other aggregates, and subsequently fixed with formaldehyde (4% v/v). Fixed samples were washed 3 times with PBS (phosphate buffered saline) and stored at −20 °C in a mixture containing 50% PBS and 50% ethanol. Samples were spotted onto the surface of glass slides (2 spots per slide) and allowed to dry for 30 min at 42 °C. Samples were further dehydrated by 3 incubations of 3 min each with increasing concentrations of ethanol (50, 80 and 100% v/v) and finally dried at room temperature. Each spot was covered with 9 μL of hybridization buffer (0.9 M NaCl, 20 mM Tris buffer, 10 mM EDTA (ethylenediaminetetraacetic acid), 0.01% SDS, pH 7.2) and 1 μL of probe working solution (50 mg/mL) of each probe. Probes used were EUB338 (5′-GCGCCTCCCGTAGGAGT-3′, [49]) specific for Eubacteria, Arc915 (5′- GTGCTCCCCCGCCAATTCCT-3′, [50]) specific for Archaea, and SYNM700 (5′-ACTGGTN5TTCCTCCTGATATCTA-3′, [51]) specific for Syntrophomonadaceae. These probes were chosen to assess the microbial population composition, namely the total bacterial population including acidogenic bacteria (EUB338), the Archaea population which includes the methanogens (Arc915), and the fatty acid degraders belonging to the Syntrophomonadaceae (SYNM700). Probes labeled with FITC (EUB338), CY3 (ARC915), or CY5 (SYNM700) were acquired from Eurofins MWG Operon (Germany). Hybridization was performed in a humidified chamber for 3 h at 45 °C. After hybridization, slides were subsequently washed with washing buffer (180 mM NaCl, 20 mM Tris, 5 mM EDTA, 0.01% SDS, pH 7.2) for 30 min at 48 °C. Slides were further incubated with 10 mL of DAPI (2 mg/mL) in PBS at room temperature for 15 min, followed by 3 washes with distilled water at room temperature. The slides were analyzed with an AXIOPLAN microscope equipped with an external UV light source and filters adequate for the fluorescent dyes under use. Images were captured by a CCD camera (Ropers Scientific) and processed with the Metamorph software. The Image J software was used to quantify the fluorescence intensity obtained with each probe. Results are the mean values obtained for at least 3 slides, each spotted at least three times.เตาปฏิกรณ์ได้ดำเนินการในเงื่อนไขพื้นฐาน (HRT = 12 h OLR (อัตราการโหลดอินทรีย์) = 12 g COD/L/d) หลายเดือนก่อนเริ่มต้นการทดลองดำเนินงานช็อก ใช้สามชนิดของแรงกระแทกปฏิบัติ ประกอบด้วยในการเพิ่มของอาหารไขมัน อาหารไหล volumetric หรืออุณหภูมิทำงาน
การแปล กรุณารอสักครู่..

2. Materials and methods
This work compares the performance of intermittent and continuous UASB reactors treating dairy wastewater at a load of 12 g COD/L/day and subject to operational shocks. Two replicate laboratory-scale UASB reactors (working volume of 6 L) were operated in a continuous mode and two were operated in an intermittent mode. The intermittent cycle consisted of 48 h feed followed by 48 h feedless [46]. The feed concentration for the intermittent reactors was always double the feed concentration used for the continuous reactors, so that in a 96 h period the total COD mass admitted to each reactor was the same. The feed was composed of diluted semi-skimmed milk or whole milk, supplemented with nutrients and alkalinity. The reactors were seeded with approximately 4 L of flocculent sludge adapted to dairy wastewater from an industrial wastewater treatment plant. The inoculation sludge had a SMA (specific methanogenic activity) of 7.1 mL CH4/g VSS/day measured with sodium acetate at (35 ± 1) °C. Throughout the entire experiment, effluent from the reactors was collected in 24 h composite samples. All physical-chemical determinations were made according to Standard Methods [48]. The produced biogas was measured by wet gas meters (Schlumberger). Methane content in biogas was monitored using a Shimadzu GC – 9a gas chromatograph equipped with a Supelco Molecular Sieve 5 A column and a Thermal Conductivity Detector (T = 100 °C). Injection temperature was 45 °C and Helium was used as carrier gas (P = 4.4 kg/cm2). Volatile fatty acids determination was carried out in a Chrompack CP 9001 gas chromatograph equipped with a Chrompack CP – sil5 – CB column and a Flame Ionization Detector (T = 300 °C). The injection temperature was 270 °C and Helium was used as carrier gas with a volumetric flow of 8 mL/min. Biomass samples for FISH (Fluorescence In Situ Hybridization) analyses were collected immediately before each applied shock, at the end of the shock period, and 20 days after the end of the shock. After collection, biomass samples were immediately frozen at −20 °C. For (FISH) experiments, samples were allowed to reach room temperature and were vortexed for 5 min to disrupt granules and other aggregates, and subsequently fixed with formaldehyde (4% v/v). Fixed samples were washed 3 times with PBS (phosphate buffered saline) and stored at −20 °C in a mixture containing 50% PBS and 50% ethanol. Samples were spotted onto the surface of glass slides (2 spots per slide) and allowed to dry for 30 min at 42 °C. Samples were further dehydrated by 3 incubations of 3 min each with increasing concentrations of ethanol (50, 80 and 100% v/v) and finally dried at room temperature. Each spot was covered with 9 μL of hybridization buffer (0.9 M NaCl, 20 mM Tris buffer, 10 mM EDTA (ethylenediaminetetraacetic acid), 0.01% SDS, pH 7.2) and 1 μL of probe working solution (50 mg/mL) of each probe. Probes used were EUB338 (5′-GCGCCTCCCGTAGGAGT-3′, [49]) specific for Eubacteria, Arc915 (5′- GTGCTCCCCCGCCAATTCCT-3′, [50]) specific for Archaea, and SYNM700 (5′-ACTGGTN5TTCCTCCTGATATCTA-3′, [51]) specific for Syntrophomonadaceae. These probes were chosen to assess the microbial population composition, namely the total bacterial population including acidogenic bacteria (EUB338), the Archaea population which includes the methanogens (Arc915), and the fatty acid degraders belonging to the Syntrophomonadaceae (SYNM700). Probes labeled with FITC (EUB338), CY3 (ARC915), or CY5 (SYNM700) were acquired from Eurofins MWG Operon (Germany). Hybridization was performed in a humidified chamber for 3 h at 45 °C. After hybridization, slides were subsequently washed with washing buffer (180 mM NaCl, 20 mM Tris, 5 mM EDTA, 0.01% SDS, pH 7.2) for 30 min at 48 °C. Slides were further incubated with 10 mL of DAPI (2 mg/mL) in PBS at room temperature for 15 min, followed by 3 washes with distilled water at room temperature. The slides were analyzed with an AXIOPLAN microscope equipped with an external UV light source and filters adequate for the fluorescent dyes under use. Images were captured by a CCD camera (Ropers Scientific) and processed with the Metamorph software. The Image J software was used to quantify the fluorescence intensity obtained with each probe. Results are the mean values obtained for at least 3 slides, each spotted at least three times.
The reactors were operated in baseline conditions (HRT = 12 h; OLR (organic loading rate) = 12 g COD/L/d) for several months before the beginning of operational shock experiments. Three types of operational shocks were applied, consisting in the raise of feed fat content, feed volumetric flow, or operational temperature.
การแปล กรุณารอสักครู่..

2 . วัสดุและวิธีการ
งานนี้เปรียบเทียบสมรรถนะของเครื่องปฏิกรณ์แบบ UASB เลี้ยงโคนมอย่างต่อเนื่อง และน้ำเสียที่โหลด 12 กรัมซีโอดี / ลิตร / วัน และอาจมีการกระแทก ) 2 ทำซ้ำระดับห้องปฏิบัติการ ( ปริมาณการทำงานของถังปฏิกรณ์ UASB 6 L ) ดำเนินการในโหมดต่อเนื่อง และสอง ดำเนินการในโหมดต่อเนื่อง .วงจรต่อเนื่อง จำนวน 48 ชั่วโมงอาหารตามด้วยชั่วโมง 48 feedless [ 46 ] ปริมาณอาหารสำหรับเครื่องปฏิกรณ์แบบมักจะเพิ่มความเข้มข้นที่ใช้ในเครื่องปฏิกรณ์แบบต่อเนื่อง ดังนั้นในเวลา 96 ชั่วโมงเท่ากับร้อยละมวลรวม ยอมรับว่า แต่ละเครื่องเป็นแบบเดียวกัน อาหารประกอบด้วย กึ่งเจือจางนมหรือนมเสริมด้วยสารอาหารและเป็นด่างเครื่องปฏิกรณ์ถูก seeded ที่มีประมาณ 4 ลิตร flocculent กากับน้ำเสียจากอุตสาหกรรมบำบัดน้ำเสียจากโรงงาน การใช้กากตะกอนมี SMA ( กิจกรรมจุลินทรีย์เฉพาะ ) ของร่าง / g VSS / วันวัดด้วยโซเดียมอะซิเตตที่ 7.1 กรัม ( 35 ± 1 ) องศา ตลอดการทดลองทั้งหมด ในน้ำทิ้งจากถังเก็บข้อมูลใน 24 ชั่วโมง คอมโพสิตตัวอย่างใช้ฟิสิกส์เคมีทั้งหมดตามมาตรฐานวิธี [ 48 ] ผลิตก๊าซชีวภาพเป็นวัดโดยเครื่องวัดก๊าซเปียก ( ลงตัว ) ก๊าซมีเทนในก๊าซชีวภาพปริมาณการใช้ก๊าซโครมาโตกราฟ ( Shimadzu GC จำนวนพร้อมกับ supelco ตะแกรงโมเลกุล 5 คอลัมน์และตรวจจับการนำความร้อน ( t = 100 ° C )อุณหภูมิ 45 ° C และฉีดฮีเลียมถูกใช้เป็นแก๊สตัวพา ( P = 4.4 kg / cm2 ) กรดไขมันที่ระเหยได้กำหนดดำเนินการใน chrompack CP 9001 แก๊สโครมาโตกราฟพร้อมกับคอลัมน์ chrompack CP – sil5 – CB และเฟลมไอออไนเซชันตรวจจับ ( t = 300 ° C ) อุณหภูมิคือ 270 ° C และฉีดฮีเลียมถูกใช้เป็นแก๊สตัวพาที่มีการไหลเชิงปริมาตร 8 มล. / นาทีชีวมวลตัวอย่างปลา ( เรืองแสงใน situ hybridization ) และเก็บทันทีก่อนที่จะใช้แต่ละช็อตในช่วงปลายของช็อกและ 20 วัน หลังจากสิ้นสุดของช็อก หลังจากการเก็บตัวอย่างน้ำถูกแช่แข็งที่อุณหภูมิ 20 ° C −ทันที ( ปลา ) การทดลองจำนวนที่ได้รับอนุญาตถึงอุณหภูมิห้อง และ vortexed เป็นเวลา 5 นาที และกลุ่มอื่น ๆที่จะทำลายเม็ดและต่อมาคงที่กับฟอร์มาลดีไฮด์ 4 เปอร์เซ็นต์ ( v / v ) แก้ไขจำนวนล้าง 3 ครั้ง ( ฟอสเฟตบัฟเฟอร์ ( PBS ) และเก็บรักษาที่อุณหภูมิ 20 ° C −ในส่วนผสมที่มี PBS 50% เอธานอล 50%ตัวอย่างที่พบบนพื้นผิวของกระจกสไลด์ ( 2 จุด ต่อสไลด์ ) และอนุญาตให้แห้งเป็นเวลา 30 นาทีที่ 42 ° C จำนวนเพิ่มเติมแห้งโดย 3 incubations 3 นาทีแต่ละเพิ่มความเข้มข้นของเอทานอล ( 50 , 80 และ 100 % v / v ) และในที่สุดแห้งที่อุณหภูมิห้อง แต่ละจุดที่ถูกปกคลุมด้วยชั้นของ 9 μเซบัฟเฟอร์ ( 0.9 M NaCl และบัฟเฟอร์หรือ 20 มม.10 mM EDTA ( บอนกรด ) , 0.01 % SDS , pH 7.2 ) และ 1 μผมสอบสวนทำงานแก้ปัญหา ( 50 mg / ml ) ของแต่ละคนด้วย ฟิวส์ที่ใช้เป็น eub338 ( 5 ’ - ’ gcgcctcccgtaggagt-3 [ 49 ] ) เฉพาะแบคทีเรีย arc915 ( , 5 gtgctcccccgccaattcct-3 ’ - ’ [ 50 ] ) เฉพาะอาร์เคียและ synm700 ( 5 ’ - ’ actggtn5ttcctcctgatatcta-3 [ 51 ] ) โดยเฉพาะสำหรับ syntrophomonadaceae .วัดเหล่านี้ถูกเลือกเพื่อศึกษาองค์ประกอบของประชากรของจุลินทรีย์ ได้แก่ จำนวนประชากรแบคทีเรียรวมทั้งกากสับปะรด แบคทีเรีย ( eub338 ) , ดาร์เรน ยัง ประชากร ซึ่งรวมถึงการสร้างมีเทน ( arc915 ) และความสามารถในการย่อยสลายไขมันกรดที่เป็นของ syntrophomonadaceae ( synm700 ) ตรวจสอบชื่อกับ fitc ( eub338 ) cy3 ( arc915 )หรือ cy5 ( synm700 ) ได้มาจาก eurofins mwg โอเปอรอน ( เยอรมนี ) ( แสดงใน humidified ห้อง 3 H ที่ 45 องศา หลังจากทำ สไลด์ จัดการล้างด้วยล้างบัฟเฟอร์ ( 180 มม. ขนาด 20 มม. หรือ 5 mM EDTA 0.01 % SDS , pH 7.2 ) สำหรับ 30 นาทีที่ 48 องศา ภาพนิ่งได้แยก 10 มิลลิลิตร dapi ( 2 มิลลิกรัมต่อลิตร มล. ) ใน PBS ที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 15 นาทีตามด้วย 3 ล้างด้วยน้ำที่อุณหภูมิห้อง ภาพนิ่ง วิเคราะห์ด้วยกล้องจุลทรรศน์ axioplan ติดตั้งภายนอกตัวกรองแสงยูวีที่มาและเพียงพอสำหรับเรืองแสงสีภายใต้การใช้ ภาพที่ถูกบันทึกโดยกล้อง CCD ( ropers ทางวิทยาศาสตร์ ) และประมวลผลด้วย metamorph ซอฟต์แวร์ภาพ J มีใช้ซอฟต์แวร์ที่มีการเรืองแสงได้ แต่ละความเข้มด้วย ผลลัพธ์ที่ได้คืออย่างน้อย 3 ภาพนิ่งแต่ละเห็นอย่างน้อยสามครั้ง . . . .
เครื่องปฏิกรณ์ทำงานในเงื่อนไขพื้นฐาน ( HRT = 12 H ; อัตรา ( อัตราภาระบรรทุกสารอินทรีย์ ) = 12 กรัมซีโอดี / L / D ) เป็นเวลาหลายเดือนก่อนที่จะเริ่มต้นของการทดลองช็อก )สามประเภทของการดำเนินงานที่ใช้กระแทก ซึ่งในยกอาหารไขมัน , อาหารการไหลเชิงปริมาตร หรืออุณหภูมิ
)
การแปล กรุณารอสักครู่..
