2.3.4. Quantitative PCRqPCR was car

2.3.4. Quantitative PCR
qPCR was carried out using the 7500 Fast Real-time PCR System
(Applied Biosystems). The expression of the target gene was analyzed
in triplicates in a presence of both reference genes and a non-template
control. The reaction mix (20 μl) was composed of 10 μl of 1× Fast
SYBR green PCR Master Mix (Applied Biosystems, Foster City, CA), 1 μl
of each primer (10 pmol/μl), 5 μl of cDNA and nuclease-free water up
to 20 μl. The qPCR temperature profile was as follows: 10 min at 95 °C
followed by 45 cycles of 10 s at 95 °C, 30 s at 57 °C and 30 s at 72 °C.
Subsequent to the amplification, a melting curve analysis was performed.
A sample was considered to be below the detection limit
when the fluorescence threshold was not reached within 45 cycles. All
reactions were performed in duplicate using two independent RNA
isolations.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.3.4 การ PCR เชิงปริมาณqPCR ทำออกใช้ 7500 เร็ว Real-time PCR ระบบ(Biosystems ใช้) มีวิเคราะห์ค่าของยีนเป้าหมายใน triplicates ในสถานะของยีนอ้างอิงและไม่แม่ควบคุม ผสมปฏิกิริยา (20 μl) ประกอบด้วย 10 μl ของ 1 ×อย่างรวดเร็วสีเขียว SYBR PCR หลักผสม (ใช้ Biosystems ฟอสเตอร์ซิตี้ CA), 1 μlแต่ละพื้น (10 pmol/μl), μl 5 ของ cDNA และ nuclease ฟรีน้ำค่าการ 20 μl ค่าอุณหภูมิ qPCR มีดังนี้: 10 นาทีที่ 95 ° Cตามวงจร 45 10 s ที่ 95 ° C, 30 s 57 ° C และ 30 s ที่ 72 องศาเซลเซียสมีดำเนินการวิเคราะห์โค้งละลาย subsequent to ขยายตัวอย่างถือว่าเป็นขีดจำกัดการตรวจสอบเมื่อขีดจำกัด fluorescence ไม่ครบภายในรอบ 45 ทั้งหมดปฏิกิริยาดำเนินในใช้อาร์เอ็นเออิสระสองซ้ำisolations

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.3.4 . qpcr PCR
เชิงปริมาณการใช้ 7500 อย่างรวดเร็วเวลาจริงระบบ PCR
( Applied Biosystems ) การแสดงออกของยีนเป้าหมายวิเคราะห์
3 ซ้ำในการแสดงตนของอ้างอิงทั้งยีนและไม่ใช่แม่แบบ
ควบคุม ปฏิกิริยาผสม ( 20 μ L ) ประกอบด้วย 10 μ L 1 ×เร็ว
SYBR สีเขียว PCR Master Mix ( Applied Biosystems ฟอสเตอร์ ซิตี้ ( CA ) , 1 μ L
ของแต่ละสี ( 10 pmol / μ L )5 ลิตร และน้ำμ cDNA นิวเคลียสฟรี
20 μล. qpcr อุณหภูมิดังนี้ 10 นาทีที่ 95 องศา C
ตามด้วย 45 รอบ 10 ที่ 95 องศา C 30 s ที่ 57 องศา C และ 30 อยู่ที่ 72 องศา
ภายหลังการขยายหลอม โค้ง การวิเคราะห์ .
ตัวอย่างก็ถือว่าต่ำกว่าขีดจำกัด
เมื่อการเริ่มไม่ถึงภายใน 45 รอบ ทั้งหมด
ปฏิกิริยาการทำซ้ำโดยใช้สอง isolations RNA
อิสระ