A50-12 AMERICAN WOOD PROTECTION ASS

A50-12
AMERICAN WOOD PROTECTION ASSOCIATION STANDARD
© 2015 All Rights Reserved
STANDARD METHOD FOR DETERMINATION OF PERCENT BOUND
ACETYL AND FREE ACETIC ACID IN ACETYLATED WOOD
BY HIGH PERFORMANCE LIQUID CHROMATOGRAPHY

Jurisdiction: AWPA Technical Committee P-5
Adopted in 2011, revised in 2012.
This AWPA Standard is promulgated according to an open, consensus procedure. Using this standard in no way signifies standardization of a
chemical or wood protection system in AWPA Standard U1.
1. Scope and Significance:
1.1 This liquid chromatographic method is used for the
determination of percent bound acetyl and/or percent free
acetic acid in acetylated wood shavings. The range of
applicability of the method is 0.01% to 40.00% free acid or
bound acetyl.

2. Summary of Method:
2.1 A sample of acetylated wood shavings is divided into
two portions. The first portion of acetylated wood shavings
is treated with sodium bicarbonate to extract free acetic acid
creating an aqueous solution of acetate ions. The second
portion is dried to remove free acetic acid and other volatiles
then saponified with hot NaOH to convert bound acetyl
groups to acetate ions. Aliquots of each solution are diluted
further then filtered and injected onto a reverse phase HPLC
column. The acetate ion is separated isocratically from other
UV-absorbing wood components using dilute phosphoric
acid. A UV photometric detector is used to monitor the
elution of the acetate. The integrated area of the acetate peak
is used along with a previously generated linear calibration
plot to determine the concentration of percent bound acetyl
and percent free acetic acid in the original wood shaving
sample.

3. Definitions:
3.1 The terms employed in this method are commonly used
in normal laboratory procedure and require no special
comment.

4. Precision and Bias:
4.1 Precision. The standard deviation for the bound acetyl
for samples in the range of 10 to 20% is approximately 0.4%
(RSD=2%).
4.2 Bias. No other method has been evaluated for this
analysis.

5. Safety Precautions:
5.1 Normal safety precautions and safe handling practices
should be observed. Consult the Material Safety Data Sheet
for full hazard information.

6. Sources of Error:
6.1 Materials containing substances that would co-elute with
acetate under the conditions specified would interfere.
Minimum times have been determined for saponification,
acetic acid extraction, and sample drying. Failure to do so
will cause low results for percent free acetic acid, percent
total acetic acid, and percent bound acetyl due to incomplete
saponification of sample, incomplete extraction, or
incomplete drying. Also, saponification of percent free
acetic acid (Section 10.2) should occur at or below room
temperature. High temperatures cause deacetylation in
acetylated wood samples and give erroneously high results
for percent free acetic acid. Wood samples must be
thoroughly dried in order to obtain the correct percent bound
acetyl values on a dry weight basis. Inter-laboratory
comparison of percent bound acetyl results can only be done
on samples that have been dried to the same extent as
described in this method.

7. Apparatus:
The following HPLC system has been used successfully for
this determination. A system with the same specifications
and capabilities may also be used.
7.1 Mobile Phase Delivery System
7.1.1 Pump - Agilent, or equivalent pump capable of binary
gradient
7.1.2 Eluent - isocratic, 50 mM H 3PO 4, 10 minutes run time
7.1.3 Gradient program used to clean the column:
Time (min)
0.0
7.0
11.0
18.0
20.0
30.0
(CH 3OH)
0.0
0.0
100
100
0.0
0.0
%C (50 mM H 3PO 4)
100
100
0.0
0.0
100
100
7.1.4 Flow-rate - 1.0 mL/min
7.1.5 Run time - 10 minutes (or 30 minutes if the gradient is
used.)
7.2 Detection System. Detector - Agilent 1100 Diode Array
or Variable Wavelength Detector at 210 nm (or equivalent)
7.3 Column(s) - Hydrobond PS-C18 Analytical column (4.6
x 250 mm), P/N MMTG18-46255 (or equivalent).
7.4 Temperature - 35°C, maintained using an Agilent
Column Compartment (or equivalent).
7.5 Injector - Agilent Automated Liquid Sampler or
equivalent unit capable of making a 100µl injection
7.6 Injection Volume - 100 L w/ needle wash
7.7 Data Analysis System - Agilent Chemstation or
equivalent unit capable of performing data acquisition and
post-run data analysis.
7.8 5 cc disposable syringes with luer lock adapters
- 263 -


A50-12
STANDARD METHOD FOR DETERMINATION OF PERCENT BOUND ACETYL AND FREE ACETIC
ACID IN ACETYLATED WOOD BY HIGH PERFORMANCE LIQUID CHROMATOGRAPHY
Page 2 of 5
© 2015
7.9 0.45 m disposable membrane filter discs with luer
fittings (hydrophilic Gelman "IC Acrodisc", P/N 4585 for
example)
7.10 Class-A volumetric glassware as appropriate
7.11 Automatic pipettors capable of dispensing 200µl and
2000µl volumes (e.g. Eppendorf pipettors with disposable
tips)
7.12 Convection Oven capable of 105°C
7.13 8-dram glass vials with well-sealed inert caps (for
sample preparation and drying)
7.14 11mm 2-mL autosampler vials, plastic or glass
7.15 Analytical balance with a precision of 0.0001 g (1/10th
of a milligram)
7.16 Temperature controlled water bath capable of
maintaining the temperature at 50°C (Branson model 8510
or equivalent)

8. Reagents and Materials:
8.1 Reagent Grade Water, ASTM Type 1 (CAS No. 7732-
18-5) - Shall have a resistance of 17.8 M cm-1 or better.
The further references to water will pertain to this
specification (R - 1, S - 1, F - 0, C - 0).
8.2 85% Phosphoric Acid (CAS No. 7764-38-2) - (R - 2, S -
3, F - 0, C - 0)
8.3 50 mM Phosphoric Acid (CAS No. 7764-38-2) - Add 3
mLs of 85% phosphoric acid to a 1-liter volumetric flask
already containing ~ 500 mLs of H 2O. Dilute to volume with
H2O (R - 2, S - 3, F - 0, C - 0).
8.4 Methanol (MeOH, CAS No. 67-56-1) - HPLC grade (R -
2, S - 2, F - 3, C - 0).
8.5 Sodium Hydroxide, solid pellets (NaOH, CAS No. 1310-
73-2), ACS Reagent grade, (R - 3, S - 3, F - 0, C - 2W)
8.6 1N Sodium Hydroxide (NaOH) - Weigh 40.0 grams (±
0.5000 g) of solid sodium hydroxide pellets into a weighing
dish, then cautiously add them to a 250 mL beaker
containing 100 mLs of H 2O. Caution: the solution will
become very hot as the NaOH dissolves! Place beaker on
magnetic stir plate, add a stir bar, and continue mixing until
the pellets are completely dissolved. Very carefully and
quantitatively transfer the solution to a 1-liter volumetric
flask and dilute to volume with water. Mix thoroughly and
transfer the solution into a plastic container equipped with a
dispenser. This solution will be used for saponification of
acetylated wood in the determination of % bound acetyl. (R -
3, S - 3, F - 0, C - 2W)
8.7 Sodium Bicarbonate (CAS No. 1444-55-8), solid ACS
Reagent grade,(R - 1, S - 1, F - 0, C - 0).
8.8 10 mM Sodium Bicarbonate (NaHCO 3) - Weigh 0.8400
grams (± 0.0500 g) of sodium bicarbonate powder into a
weighing dish, and add it quantitatively to a 1-liter
volumetric flask containing ~ 500 mL H 2O. Mix thoroughly
until the powder is dissolved, then dilute to the mark with
H 2O. This solution will be used to extract free acetic acid
from acetylated wood (R - 1, S - 1, F - 0, C - 0).
8.9 Standard Materials. Acetic Acid, Glacial (CAS No. 64-
19-7), Analytical Reagent-Grade, used to prepare acetate
standard (R - 2, S - 3, F - 2, C - 0).
9. Calibration and Standardization:
9.1 Preparation of Calibration Standards - Standards should
be prepared in the manner described in the following
subsections.
9.1.1 10000 ppm (w/v) Acetate Stock Solution (expires in 6
months) - Weigh 1.0 grams ± 0.100 g of concentrated acetic
acid into a 100-mL Class A volumetric flask. Dilute to
volume with water.
9.1.2 1000 ppm (w/v) Acetate Level 3 Standard (expires in 1
week) - Using a Class A pipette, transfer 10 mLs of 10000
ppm acetate stock solution prepared in section 9.1.1 into a
100-mL volumetric flask. Dilute to volume with water.
Enter the weight (divided by 10) of the acetic acid prepared
from Section 9.1.1 into the sequence table and into the
calibration table for Level 3.
9.1.3 100 ppm (w/v) Acetate Level 2 Standard (expires in 1
week) - Using a Class A pipette, transfer 10 mLs of 1000
ppm acetate solution prepared in section 9.1.2 into a 100-mL
volumetric flask. Dilute to volume with water. Enter the
weight (divided by 100) of the acetic acid weighed in section
9.1.1 into the sequence table and into the calibration table
for Level 2.
9.1.4 10 ppm (w/v) Acetate Standard (expires in 1 week) -
Using a Class A pipette, transfer 10 mLs of 100 ppm acetate
solution prepared in section 9.1.3 into a 100-mL volumetric
flask. Dilute to volume with water. Enter the weight
(divided by 1000) of the acetic acid weighed in Section 9.1.1
into the sequence table and into the calibration table for
Level 1.
9.2 Inject the 10, 100, and 1000 ppm standards using the
conditions described in Section 7, and record the
chromatogram.
9.3 Construct a linear calibration plot using the peak areas
obtained for each of the standard chromatograms obtained in
Section 9.2.

10. Sample Preparation:
10.1 The sample shall consist of solid wood shavings which
are small enough to fit in the 8 dram vial and precisely
weighed as described below. One gram is sufficient for this
test.
10.2 Percent Free

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

A50-12 ป้องกันไม้อเมริกันสมาคมมาตรฐาน สงวนลิขสิทธิ์ © 2015 ทั้งหมด วิธีการมาตรฐานสำหรับการกำหนดเปอร์เซ็นต์ผูก ACETYL และกรดน้ำส้มฟรีไม้ ACETYLATED โดย CHROMATOGRAPHY เหลวประสิทธิภาพสูง อำนาจ: คณะกรรมการวิชาการ AWPA P-5 นำมาใช้ใน 2011 การปรับปรุงในปี 2012 นี้ AWPA มาตรฐานเป็น promulgated ตามขั้นตอนมติการเปิด การ ใช้มาตรฐานนี้ไม่ได้หมายถึงมาตรฐานการ ระบบป้องกันสารเคมี หรือไม้ใน AWPA มาตรฐาน U1 1. ขอบเขต และความสำคัญ: 1.1 ของเหลว chromatographic วิธีนี้จะใช้สำหรับการ acetyl ผูกเรื่องร้อยละ หรือเปอร์เซ็นต์ฟรี กรดอะซิติกใน acetylated ขี้กบ ช่วงของ ความเกี่ยวข้องของวิธีการเป็น 0.01% 40.00% กรดอิสระ หรือ acetyl ผูก 2. สรุปวิธี: 2.1 ตัวอย่างขี้กบ acetylated แบ่งออกเป็น ส่วนสอง ส่วนแรกของ acetylated ขี้กบ รักษา ด้วยโซเดียมไบคาร์บอเนตเพื่อแยกกรดอะซิติกฟรี สร้างการละลายของประจุ acetate ที่สอง ส่วนจะแห้งเอากรดน้ำส้มฟรีและอื่น ๆ volatiles แล้ว saponified กับ NaOH ร้อนแปลง acetyl ผูก กลุ่มที่จะประจุ acetate มียกเว้น aliquots ของแต่ละ ต่อจาก นั้นกรอง และฉีดไประยะกลับ HPLC คอลัมน์ ไอออน acetate เป็น isocratically แยกจากกัน ดูด UV ไม้คอมโพเนนต์ใช้ dilute phosphoric กรด เครื่องตรวจจับ photometric UV ใช้ในการตรวจสอบการ elution ของ acetate พื้นที่รวมของจุดสูงสุด acetate ใช้กับเทียบเส้นที่สร้างขึ้นก่อนหน้านี้ ลงจุดเพื่อกำหนดความเข้มข้นร้อยละผูก acetyl และเปอร์เซ็นต์กรดอะซิติกในโกนไม้เดิม ตัวอย่างการ 3. ข้อกำหนด: 3.1 เป็นเงื่อนไขการจ้างงานในวิธีนี้จะใช้ ในขั้นตอนการปฏิบัติการปกติและไม่พิเศษ ความคิดเห็น 4. ความแม่นยำและความโน้มเอียง: 4.1 ความแม่นยำ ค่าเบี่ยงเบนมาตรฐานของ acetyl ผูก สำหรับตัวอย่างในช่วง 10-20% คือประมาณ 0.4% (RSD = 2%) 4.2 ความโน้มเอียง วิธีอื่น ๆ ไม่ได้รับการประเมินนี้ วิเคราะห์ 5. ความปลอดภัยข้อควรระวัง: 5.1 ปกติเพื่อความปลอดภัยและแนวทางการจัดการที่ปลอดภัย ควรจะดำเนินการ ศึกษาจากเอกสารข้อมูลความปลอดภัยของผลิตภัณฑ์ สำหรับข้อมูลอันตรายเต็ม 6. แหล่งที่มาของข้อผิดพลาด: 6.1 วัสดุที่ประกอบด้วยสารที่จะ elute ร่วมด้วย acetate ภายใต้เงื่อนไขที่ระบุจะยุ่ง กำหนดเวลาขั้นต่ำสำหรับสะพอนิฟิ การสกัดกรดน้ำส้ม และตัวอย่างแห้ง ไม่ จะทำให้เกิดผลลัพธ์ต่ำสำหรับเปอร์เซ็นต์ฟรีกรดอะซิติก เปอร์เซ็นต์ กรดอะซิติกรวม และ acetyl เปอร์เซ็นต์ถูกผูกไว้เนื่องจากไม่สมบูรณ์ สะพอนิฟิของสกัดชิ้นงานตัวอย่าง ไม่สมบูรณ์ หรือ แห้งไม่สมบูรณ์ สะพอนิฟิยัง เปอร์เซ็นต์ฟรี กรดอะซิติก (10.2 ส่วน) จะเกิดขึ้นใน หรือ ใต้ห้องพัก อุณหภูมิ อุณหภูมิที่สูงทำให้เกิด deacetylation ใน ตัวอย่างไม้ acetylated และให้ผลสูงผล สำหรับเปอร์เซ็นต์ฟรีกรดอะซิติก ตัวอย่างไม้ต้อง แห้งอย่างละเอียดเพื่อให้ได้ผูกกับเปอร์เซ็นต์ที่ถูกต้อง acetyl ค่าบนฐานน้ำหนักแห้ง ห้องปฏิบัติการระหว่าง เปรียบเทียบร้อยละผูก acetyl เท่านั้นสามารถทำได้ผล ในตัวอย่างที่มีการแห้งขอบเขตเดียวกันเป็น อธิบายไว้ในวิธีการนี้ 7. เครื่องมือ: ได้ใช้ระบบ HPLC ต่อเรียบร้อยแล้วสำหรับ เรื่องนี้ ระบบที่ มีข้อกำหนดเหมือน และยังสามารถใช้ความสามารถ 7.1 ระบบการจัดส่งระยะเคลื่อน 7.1.1 ปั๊ม - Agilent หรือปั๊มไบนารีสามารถเทียบเท่า การไล่ระดับสี 7.1.2 Eluent - isocratic คิด 50 มม. H 3PO 4 เวลาทำงาน 10 นาที 7.1.3 ไล่ระดับโปรแกรมที่ใช้ในการล้างคอลัมน์: เวลา (นาที) 0.0 7.0 11.0 18.0 20.0 30.0 (CH 3OH) 0.0 0.0 100 100 0.0 0.0 แมท (50 มม. H 3PO 4) 100 100 0.0 0.0 100 100 7.1.4-อัตราการไหล - 1.0 มิลลิลิตร/นาที 7.1.5 เวลา - 10 นาที (หรือ 30 นาทีถ้าระดับสี ใช้) 7.2 ตรวจระบบ จับ - Agilent 1100 ไดโอดอาร์เรย์ หรือความยาวคลื่นตรวจ จับที่ตัวแปรที่ 210 nm (หรือเทียบเท่า) 7.3 คอลัมน์ - Hydrobond PS-C18 วิเคราะห์คอลัมน์ (4.6 x 250 mm), P/N MMTG18-46255 (หรือเทียบเท่า) 7.4 อุณหภูมิ - 35° C รักษาใช้ Agilent คอลัมน์ช่อง (หรือเทียบเท่า) 7.5 หัวฉีด - Agilent อัตโนมัติ Sampler ของเหลว หรือ หน่วยเทียบเท่าที่สามารถทำให้การฉีด 100µl 7.6 ปริมาณฉีด - L 100 พร้อมล้างเข็ม 7.7 ระบบวิเคราะห์ข้อมูล - Agilent Chemstation หรือ หน่วยเทียบเท่าที่สามารถดำเนินการซื้อข้อมูล และ หลังเรียกใช้การวิเคราะห์ข้อมูล 7.8 5 cc เข็ม luer ล็อคอะแดปเตอร์ -263- A50-12 วิธีการมาตรฐานสำหรับการกำหนดเขต ACETYL เปอร์เซ็นต์ และฟรีอะซิติก กรดในไม้ ACETYLATED โดย CHROMATOGRAPHY เหลวประสิทธิภาพสูง หน้าที่ 2 จาก 5 © 2015 m 7.9 0.45 ผ้าอ้อมเยื่อกรองดิสก์กับ luer อุปกรณ์ (hydrophilic เกลแมน "IC Acrodisc", P/N 4585 สำหรับ ตัวอย่าง) 7.10 คลาส A แก้ว volumetric ตามความเหมาะสม 7.11 ความสามารถมหาศาล 200µl pipettors อัตโนมัติ และ 2000µl ไดรฟ์ (เช่น Eppendorf pipettors กับทิ้ง เคล็ดลับ) 7.12 เตาอบการพาสามารถ 105° C 7.13 vials 8 dram แก้ว มีฝาปิดผนึกห้อง inert ( เตรียมตัวอย่างและแห้ง) 7.14 11 มม. 2 mL autosampler vials พลาสติก หรือแก้ว 7.15 วิเคราะห์สมดุลกับความแม่นยำของ 0.0001 g (1/10 ของ milligram) 7.16 ห้องน้ำที่สามารถควบคุมอุณหภูมิ รักษาอุณหภูมิที่ 50 องศาเซลเซียส (แบรนสันรุ่น 8510 หรือเทียบเท่า) 8. reagents และวัสดุ: 8.1 รีเอเจนต์ระดับน้ำ ชนิด ASTM (CAS หมายเลข 7732 - 1 18-5) - จะมีความต้านทานของ M 17.8 ซม.-1 หรือดีกว่า ข้อมูลอ้างอิงเพิ่มเติมน้ำจะเกี่ยวข้องกับการนี้ ข้อมูลจำเพาะ (R - 1, S - 1, F - 0, C - 0) 8.2 85% ฟอสฟอริกกรด (CAS หมายเลข 7764-38-2) - (- 2, S - R 3, F - 0, C - 0) 8.3 กรดฟอสฟอริก 50 มม. (CAS หมายเลข 7764-38-2) - เพิ่ม 3 mLs ของกรดฟอสฟอริก 85% จะเป็นหนาว volumetric 1 ลิตร already containing ~ 500 mLs of H 2O. Dilute to volume with H2O (R - 2, S - 3, F - 0, C - 0). 8.4 Methanol (MeOH, CAS No. 67-56-1) - HPLC grade (R - 2, S - 2, F - 3, C - 0). 8.5 Sodium Hydroxide, solid pellets (NaOH, CAS No. 1310- 73-2), ACS Reagent grade, (R - 3, S - 3, F - 0, C - 2W) 8.6 1N Sodium Hydroxide (NaOH) - Weigh 40.0 grams (± 0.5000 g) of solid sodium hydroxide pellets into a weighing dish, then cautiously add them to a 250 mL beaker containing 100 mLs of H 2O. Caution: the solution will become very hot as the NaOH dissolves! Place beaker on magnetic stir plate, add a stir bar, and continue mixing until the pellets are completely dissolved. Very carefully and quantitatively transfer the solution to a 1-liter volumetric flask and dilute to volume with water. Mix thoroughly and transfer the solution into a plastic container equipped with a dispenser. This solution will be used for saponification of acetylated wood in the determination of % bound acetyl. (R - 3, S - 3, F - 0, C - 2W) 8.7 Sodium Bicarbonate (CAS No. 1444-55-8), solid ACS Reagent grade,(R - 1, S - 1, F - 0, C - 0). 8.8 10 mM Sodium Bicarbonate (NaHCO 3) - Weigh 0.8400 grams (± 0.0500 g) of sodium bicarbonate powder into a weighing dish, and add it quantitatively to a 1-liter volumetric flask containing ~ 500 mL H 2O. Mix thoroughly until the powder is dissolved, then dilute to the mark with H 2O. This solution will be used to extract free acetic acid from acetylated wood (R - 1, S - 1, F - 0, C - 0). 8.9 Standard Materials. Acetic Acid, Glacial (CAS No. 64- 19-7), Analytical Reagent-Grade, used to prepare acetate standard (R - 2, S - 3, F - 2, C - 0). 9. Calibration and Standardization: 9.1 Preparation of Calibration Standards - Standards should be prepared in the manner described in the following subsections. 9.1.1 10000 ppm (w/v) Acetate Stock Solution (expires in 6 months) - Weigh 1.0 grams ± 0.100 g of concentrated acetic acid into a 100-mL Class A volumetric flask. Dilute to volume with water. 9.1.2 1000 ppm (w/v) Acetate Level 3 Standard (expires in 1 week) - Using a Class A pipette, transfer 10 mLs of 10000 ppm acetate stock solution prepared in section 9.1.1 into a 100-mL volumetric flask. Dilute to volume with water. Enter the weight (divided by 10) of the acetic acid prepared from Section 9.1.1 into the sequence table and into the calibration table for Level 3. 9.1.3 100 ppm (w/v) Acetate Level 2 Standard (expires in 1 week) - Using a Class A pipette, transfer 10 mLs of 1000 ppm acetate solution prepared in section 9.1.2 into a 100-mL volumetric flask. Dilute to volume with water. Enter the weight (divided by 100) of the acetic acid weighed in section 9.1.1 into the sequence table and into the calibration table for Level 2. 9.1.4 10 ppm (w/v) Acetate Standard (expires in 1 week) - Using a Class A pipette, transfer 10 mLs of 100 ppm acetate solution prepared in section 9.1.3 into a 100-mL volumetric
flask. Dilute to volume with water. Enter the weight
(divided by 1000) of the acetic acid weighed in Section 9.1.1
into the sequence table and into the calibration table for
Level 1.
9.2 Inject the 10, 100, and 1000 ppm standards using the
conditions described in Section 7, and record the
chromatogram.
9.3 Construct a linear calibration plot using the peak areas
obtained for each of the standard chromatograms obtained in
Section 9.2.

10. Sample Preparation:
10.1 The sample shall consist of solid wood shavings which
are small enough to fit in the 8 dram vial and precisely
weighed as described below. One gram is sufficient for this
test.
10.2 Percent Free

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

A50-12
AMERICAN
ไม้ป้องกันสมาคมมาตรฐาน© 2015
สงวนลิขสิทธิ์มาตรฐานวิธีวิเคราะห์อัตราร้อยละที่ถูกผูกไว้
Acetyl ฟรีและกรดอะซิติกใน acetylated
ไม้ด้วยประสิทธิภาพสูงของเหลวโครมาโตสังกัด: AWPA คณะกรรมการเทคนิค P-5 นำมาใช้ในปี 2011 ฉบับปรับปรุงใหม่ในปี 2012 นี้ AWPA มาตรฐานตามประกาศเปิดขั้นตอนการลงมติเป็นเอกฉันท์ การใช้มาตรฐานนี้ในทางไม่หมายถึงมาตรฐานของสารเคมีหรือไม้ระบบป้องกันใน AWPA มาตรฐาน U1. 1 ขอบเขตและความสำคัญ: 1.1 วิธีโครมานี้ของเหลวที่ใช้สำหรับการกำหนดร้อยละacetyl ผูกพันและ / หรือร้อยละฟรีกรดอะซิติกในขี้กบacetylated ช่วงของการบังคับใช้ของวิธีการที่เป็น 0.01% มาอยู่ที่ 40.00% กรดฟรีหรือ acetyl ผูกพัน. 2 บทสรุปของวิธีการ: 2.1 ตัวอย่างของขี้กบ acetylated แบ่งออกเป็นสองส่วน ส่วนแรกของขี้กบ acetylated รับการรักษาด้วยโซเดียมไบคาร์บอเนตในการสกัดกรดอะซิติกฟรีสร้างสารละลายของไอออนอะซิเตท ที่สองส่วนแห้งเพื่อเอากรดอะซิติกฟรีและสารระเหยอื่น ๆ ที่กราฟต์แล้วด้วย NaOH ร้อนเพื่อแปลง acetyl ผูกพันกลุ่มไอออนอะซิเตท aliquots ของแต่ละวิธีการแก้ปัญหาที่มีการปรับลดต่อไปกรองแล้วฉีดลงบนHPLC เฟสกลับคอลัมน์ ไอออนอะซิเตทจะถูกแยกออกจากคนอื่น ๆ isocratically ยูวีดูดซับส่วนประกอบไม้เจือจางโดยใช้ฟอสฟอรัสกรด เครื่องตรวจจับแสงยูวีที่ใช้ในการตรวจสอบการชะของอะซิเตท พื้นที่แบบบูรณาการของยอดอะซิเตทถูกนำมาใช้พร้อมกับสร้างขึ้นก่อนหน้านี้การสอบเทียบเชิงเส้นพล็อตที่จะตรวจสอบความเข้มข้นร้อยละผูกพันacetyl และร้อยละกรดอะซิติกฟรีโกนหนวดไม้เดิมตัวอย่าง. 3 คำนิยาม: 3.1 แง่ที่ใช้ในวิธีการนี้เป็นที่นิยมใช้ในขั้นตอนการตรวจทางห้องปฏิบัติการปกติและไม่จำเป็นต้องพิเศษความคิดเห็น. 4 ความแม่นยำและอคติ: 4.1 แม่นยำ ส่วนเบี่ยงเบนมาตรฐานสำหรับ acetyl ที่ถูกผูกไว้สำหรับตัวอย่างในช่วง10 ถึง 20% จะอยู่ที่ประมาณ 0.4% (RSD = 2%). 4.2 อคติ ไม่มีวิธีการอื่น ๆ ได้รับการประเมินในการนี้การวิเคราะห์. 5 ข้อควรระวังความปลอดภัย: 5.1 ระมัดระวังความปลอดภัยปกติและการปฏิบัติที่ปลอดภัยควรจะสังเกต ปรึกษาข้อมูลด้านความปลอดภัยสำหรับข้อมูลความเป็นอันตรายเต็มรูปแบบ. 6 แหล่งที่มาของข้อผิดพลาด: 6.1 วัสดุที่มีสารที่จะร่วมกับ elute. อะซิเตทภายใต้เงื่อนไขที่ระบุไว้จะรบกวนเวลาขั้นต่ำที่ได้รับการพิจารณาเพื่อความสะพอ, การสกัดกรดอะซิติกและการอบแห้งตัวอย่าง ล้มเหลวในการทำเช่นนั้นจะทำให้เกิดผลในระดับต่ำร้อยละกรดอะซิติกฟรีร้อยละกรดอะซิติกทั้งหมดและร้อยละacetyl ผูกพันเนื่องจากการที่ไม่สมบูรณ์สะพอตัวอย่างการสกัดที่ไม่สมบูรณ์หรือการอบแห้งที่ไม่สมบูรณ์ นอกจากนี้ร้อยละสะพอฟรีกรดอะซิติก (มาตรา 10.2) ควรจะเกิดขึ้นที่หรือต่ำกว่าห้องอุณหภูมิ ทำให้เกิดอุณหภูมิสูงสิกในตัวอย่างไม้ acetylated และให้ผลลัพธ์ที่สูงอย่างไม่ถูกต้องร้อยละกรดอะซิติกฟรี ตัวอย่างไม้จะต้องแห้งอย่างทั่วถึงเพื่อให้ได้ร้อยละที่ถูกต้องถูกผูกค่าacetyl บนพื้นฐานของน้ำหนักแห้ง ระหว่างห้องปฏิบัติการการเปรียบเทียบผลการ acetyl ผูกพันร้อยละสามารถทำได้กับตัวอย่างที่ได้รับการอบแห้งในระดับเดียวกับที่อธิบายไว้ในวิธีการนี้. 7 เครื่อง: ระบบ HPLC ต่อไปนี้ได้รับการใช้ประสบความสำเร็จสำหรับความมุ่งมั่นนี้ ระบบที่มีคุณสมบัติเดียวกันและความสามารถอาจจะใช้. 7.1 เฟสมือถือระบบส่ง7.1.1 ปั๊ม - Agilent หรือเทียบเท่าปั๊มความสามารถในการไบนารีลาด7.1.2 ตัวชะ - isocratic 50 มิลลิ H 3PO 4, 10 นาทีเวลาทำงาน7.1 0.3 โปรแกรมการไล่โทนสีที่ใช้ในการทำความสะอาดคอลัมน์: เวลา (นาที) 0.0 7.0 11.0 18.0 20.0 30.0 (CH 3OH) 0.0 0.0 100 100 0.0 0.0% C (50 มิลลิ H 3PO 4) 100 100 0.0 0.0 100 100 7.1.4 Flow- อัตรา - 1.0 มิลลิลิตร / นาทีเวลาเรียกใช้7.1.5 - (หรือ 30 นาทีหากมีการไล่ระดับสี 10 นาที. ใช้) 7.2 ระบบตรวจจับ เครื่องตรวจจับ - Agilent 1100 อาร์เรย์ไดโอดหรือเครื่องตรวจจับคลื่นตัวแปรที่210 นาโนเมตร (หรือเทียบเท่า) 7.3 คอลัมน์ (s) - Hydrobond PS-C18 วิเคราะห์คอลัมน์ (4.6 x 250 มิลลิเมตร) P / N MMTG18-46255 (หรือเทียบเท่า). 7.4 อุณหภูมิ - 35 องศาเซลเซียสการบำรุงรักษาโดยใช้ Agilent คอลัมน์ช่อง (หรือเทียบเท่า). 7.5 หัวฉีด - Agilent อัตโนมัติตัวอย่างของเหลวหรือหน่วยเทียบเท่าสามารถทำให้การฉีด100μl 7.6 ปริมาณการฉีด - 100 L w / ล้างเข็ม7.7 ระบบการวิเคราะห์ข้อมูล - Agilent ChemStation หรือหน่วยเทียบเท่าสามารถดำเนินการเก็บข้อมูลและการวิเคราะห์ข้อมูลการโพสต์เรียก. 7.8 ซีซี 5 เข็มฉีดยาที่ใช้แล้วทิ้งที่มีอะแดปเตอร์ล็อค luer - 263 - A50-12 วิธีการมาตรฐานในการกำหนดอัตราร้อยละที่ถูกผูกไว้ acetyl และฟรี ACETIC ACID ใน acetylated ไม้ด้วยประสิทธิภาพสูงของเหลวโครมาโตหน้า2 จาก 5 © 2015 7.9 0.45 mแผ่นกรองเมมเบรนที่ใช้แล้วทิ้งที่มี luer อุปกรณ์ (hydrophilic Gelman "IC Acrodisc" P / N 4585 สำหรับตัวอย่าง) 7.10-Class แก้วปริมาตรตามความเหมาะสม7.11 pipettors อัตโนมัติความสามารถในการจ่าย200μlและ2000μlปริมาณ( เช่น Eppendorf pipettors กับทิ้งเคล็ดลับ) 7.12 เตาอบพาความสามารถในการ 105 ° C 7.13 8 เหล้าขวดแก้วที่มีดีที่ปิดสนิทหมวกเฉื่อย (สำหรับการเตรียมตัวและการอบแห้ง) 7.14 11mm 2 มิลลิลิตรขวดฉีดตัวอย่างอัตโนมัติพลาสติกหรือแก้ว7.15 สมดุลวิเคราะห์ด้วย ความแม่นยำของการ 0.0001 กรัม (1 / 10th ของมิลลิกรัม) ที่7.16 อุณหภูมิอ่างน้ำควบคุมความสามารถในการรักษาอุณหภูมิที่50 องศาเซลเซียส (แบรนสันรุ่น 8510 หรือเทียบเท่า) 8 รีเอเจนต์และวัสดุ: 8.1 รีเอเจนเกรดน้ำ ASTM ประเภทที่ 1 (CAS เลขที่ 7732-. 18-5) - จะมีความต้านทาน 17.8 ซมM-1 หรือดีกว่าอ้างอิงต่อไปน้ำจะเกี่ยวข้องกับการนี้สเปค(R - 1, S - 1 เอฟ - 0, C -. 0) 8.2 85% ฟอสฟอรัสกรด (CAS No. 7764-38-2) - (R - 2, S - 3 F - 0, C - 0) 8.3 50 มิลลิ Phosphoric Acid (CAS ฉบับ 7764-38-2) - เพิ่ม 3 MLS ของกรดฟอสฟ 85% เป็นขวดปริมาตร 1 ลิตรแล้วมี~ 500 MLS ของ H 2O เจือจางปริมาณกับH2O (R - 2, S - 3, F - 0, C - 0). 8.4 เมทานอล (เมธานอล, CAS ฉบับ 67-56-1) - เกรด HPLC (R - 2, S - 2, F - 3, C -. 0) 8.5 โซดาไฟเม็ดของแข็ง (NaOH, CAS เลขที่ 1310- 73-2), เอซีเอสเกรด Reagent (R - 3, S - 3, F - 0, C - 2W) 8.6 1N โซดาไฟ (NaOH) - ชั่งน้ำหนัก 40.0 กรัม (± 0.5000 กรัม) โซดาไฟเม็ดของแข็งเป็นชั่งน้ำหนักจานแล้วระมัดระวังเพิ่มลงในบีกเกอร์250 มิลลิลิตรที่มี100 MLS ของ H 2O ข้อควรระวัง: การแก้ปัญหาจะกลายเป็นร้อนมากเป็นละลายNaOH! วางแก้วในจานผัดแม่เหล็กเพิ่มแถบความปั่นป่วนและยังคงผสมจนเม็ดละลายอย่างสมบูรณ์ อย่างระมัดระวังและปริมาณการถ่ายโอนการแก้ปัญหาให้กับปริมาตร 1 ลิตรขวดและเจือจางปริมาณด้วยน้ำ ผสมอย่างทั่วถึงและการถ่ายโอนการแก้ปัญหาลงในภาชนะพลาสติกที่มาพร้อมกับเครื่อง การแก้ปัญหานี้จะใช้สำหรับการสะพอของไม้ acetylated ในการกำหนด% acetyl ที่ถูกผูกไว้ (R - 3 S - 3, F - 0, C - 2W) 8.7 โซเดียมไบคาร์บอเนต (CAS No. 1444-55-8) เอซีเอสที่เป็นของแข็งเกรดReagent (R - 1, S - 1 เอฟ - 0, C -. 0) 8.8 10 มิลลิโซเดียมไบคาร์บอเนต (NaHCO 3) - ชั่งน้ำหนัก 0.8400 กรัม (± 0.0500 กรัม) ผงโซเดียมไบคาร์บอเนตเป็นจานชั่งน้ำหนักและเพิ่มปริมาณการ1 ลิตรขวดที่มีปริมาตร500 มิลลิลิตร ~ H 2O ผสมอย่างทั่วถึงจนผงละลายแล้วเจือจางเพื่อทำเครื่องหมายกับH 2O การแก้ปัญหานี้จะถูกใช้ในการสกัดกรดอะซิติกฟรีจากไม้ acetylated (R - 1, S - 1 เอฟ - 0, C - 0). 8.9 วัสดุมาตรฐาน กรดอะซิติก, น้ำแข็ง (CAS ฉบับที่ 64 19-7), การวิเคราะห์สารเคมีเกรดที่ใช้ในการเตรียมความพร้อม acetate มาตรฐาน (R - 2, S - 3, F - 2, C - 0). 9 สอบเทียบและมาตรฐาน: 9.1 การจัดทำมาตรฐานการสอบเทียบ - มาตรฐานควรจะมีการเตรียมการในลักษณะที่อธิบายไว้ในต่อไปนี้หัวข้อย่อย. 9.1.1 10,000 ppm (w / v) Acetate โซลูชั่นหุ้น (จะหมดอายุใน 6 เดือน) - ชั่งน้ำหนัก 1.0 กรัม± 0.100 กรัม อะซิติกเข้มข้นกรดเป็นClass 100 มิลลิลิตรขวดปริมาตร เจือจางไปปริมาณด้วยน้ำ. 9.1.2 1,000 ppm (w / v) Acetate ระดับที่ 3 มาตรฐาน (หมดอายุใน 1 สัปดาห์) - การใช้ปิเปตคลาส A, โอน 10 MLS 10000 วิธีการแก้ปัญหาสต็อกอะซิเตท ppm เตรียมในส่วน 9.1.1 เป็น100 มิลลิลิตรขวดปริมาตร เจือจางปริมาณด้วยน้ำ. ใส่น้ำหนัก (หารด้วย 10) ของกรดอะซิติกเตรียมจากมาตรา9.1.1 ลงในตารางลำดับและเข้าไปในตารางการสอบเทียบระดับ3 9.1.3 100 ppm (w / v) Acetate ระดับ 2 มาตรฐาน (หมดอายุใน 1 สัปดาห์) - การใช้ปิเปตคลาส A, โอน 10 MLS 1000 แก้ปัญหาอะซิเตท ppm เตรียมในส่วน 9.1.2 เป็น 100 มิลลิลิตรขวดปริมาตร เจือจางปริมาณด้วยน้ำ ใส่น้ำหนัก (หารด้วย 100) ของกรดอะซิติกชั่งน้ำหนักในส่วน 9.1.1 ลงในตารางลำดับและลงในตารางการสอบเทียบสำหรับระดับ2 9.1.4 10 ppm (w / v) Acetate มาตรฐาน (หมดอายุใน 1 สัปดาห์ที่) - การใช้ปิเปตคลาส A, โอน 10 MLS ของอะซิเตท 100 ppm การแก้ปัญหาการจัดทำในส่วน 9.1.3 เป็น 100 มิลลิลิตรปริมาตรขวด เจือจางปริมาณด้วยน้ำ ใส่น้ำหนัก(หารด้วย 1000) ของกรดอะซิติกชั่งน้ำหนักในมาตรา 9.1.1 ลงในตารางลำดับและลงในตารางการสอบเทียบสำหรับระดับ 1 9.2 ฉีด 10, 100, และ 1,000 ppm มาตรฐานโดยใช้เงื่อนไขที่ระบุไว้ในมาตรา7 และบันทึกchromatogram. 9.3 สร้างพล็อตการสอบเทียบเชิงเส้นโดยใช้พื้นที่สูงสุดที่ได้รับสำหรับแต่ละchromatograms มาตรฐานที่ได้รับในมาตรา9.2. 10 การเตรียมสารตัวอย่าง: 10.1 กลุ่มตัวอย่างประกอบด้วยขี้กบไม้เนื้อแข็งที่มีขนาดเล็กพอที่จะใส่ในขวดเหล้า8 และแม่นยำชั่งน้ำหนักตามที่อธิบายไว้ด้านล่าง หนึ่งกรัมเพียงพอสำหรับการนี้การทดสอบ. 10.2 เปอร์เซ็นต์ฟรี

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

a50-12
อเมริกันสมาคมป้องกันไม้มาตรฐาน
สงวนลิขสิทธิ์ 2015 สงวนลิขสิทธิ์
วิธีการมาตรฐานสำหรับการกำหนดเปอร์เซ็นต์และกรดอะมัด

ยาวไม้ฟรีในการแสดงสูงสังกัด liquid chromatography

: คณะกรรมการ awpa p-5
ประกาศใช้ในปี 2011 , การแก้ไขใน 2012
นี่ awpa มาตรฐานคือ ประกาศใช้ตามการเปิดกระบวนฉันทามติการใช้มาตรฐานนี้ในทางไม่หมายถึงมาตรฐานของ
เคมี หรือระบบป้องกันไม้ในองค์กรมาตรฐาน awpa .
1 ขอบเขตและความสำคัญ :
1.1 วิธีโครมาโทกราฟีของเหลวนี้จะใช้สำหรับการมัดอะ
) และ / หรือ เปอร์เซ็นต์กรดฟรี
ในยาวไม้กบ . ช่วงของการประยุกต์ใช้วิธี
0.01 ร้อยละ 40.00 % กรดฟรีหรือ
ผูกพันอะ .

2สรุปวิธีการ :
2.1 ตัวอย่างยาวไหไม้ แบ่งเป็น
2 ส่วน ส่วนแรกของยาวขี้กบ
รักษาด้วยโซเดียมไบคาร์บอเนตกรดสกัดฟรี
สร้างสารละลายอะซิเตตไอออน ส่วนที่สอง
แห้งเอากรดฟรีและสารระเหยอื่น
แล้วการดูดซึมร้อนกับ NaOH แปลงผูกพันอะ
กลุ่มอะซิเตตไอออน เฉยๆของแต่ละโซลูชั่นจะเจือจาง
ต่อไปแล้วกรองและฉีดลงบนย้อนกลับ
เฟส HPLC คอลัมน์ อะซิเตตไอออนจะถูกแยกออกจากอื่น ๆ isocratically
ยูวีดูดซับส่วนประกอบไม้ใช้เจือจางกรดฟอส
. เครื่องตรวจจับแสงยูวีที่ใช้ตรวจสอบ
( ของอะซิเทต รวมพื้นที่ของพีค
อะซิเตทที่ใช้พร้อมกับสร้างขึ้นก่อนหน้านี้เชิงเส้นการสอบเทียบ
พล็อตเพื่อตรวจสอบความเข้มข้นร้อยละผูกพันอะ
และเปอร์เซ็นต์กรดฟรีในต้นฉบับไม้โกน
ตัวอย่าง

3 นิยาม :
3.1 เงื่อนไขที่ใช้ในวิธีนี้มักใช้ในกระบวนการทางห้องปฏิบัติการ
ปกติ และต้องไม่มีพิเศษ
แสดงความคิดเห็น

4 . ความแม่นยำและอคติ :
4.1 ความแม่นยำส่วนเบี่ยงเบนมาตรฐาน สำหรับผูกอะ
สำหรับตัวอย่างในช่วง 10 ถึง 20 % ประมาณ 0.4 %
( RSD = 2% )
4.2 ลำเอียง ไม่มีวิธีการอื่นที่ได้รับการประเมินการวิเคราะห์นี้



5 ความปลอดภัย :
5.1 มาตรการป้องกันความปลอดภัยปกติและปลอดภัยการจัดการการปฏิบัติ
ควรสังเกต ดูแผ่นข้อมูลความปลอดภัยของวัสดุอันตราย
สำหรับข้อมูลเต็มรูปแบบ

6 แหล่งที่มาของข้อผิดพลาด :
61 วัสดุที่มีสารที่จะ Co elute กับ
อะซิเตทภายใต้เงื่อนไขที่ระบุไว้ จะยุ่ง
ครั้ง อย่างน้อยต้องมีการพิจารณาสำหรับสปอนนิฟิเคชั่น
การสกัดกรด , และตัวอย่างแห้ง ความล้มเหลวที่จะทำเช่นนั้นจะก่อให้เกิดผลต่ำร้อยละ

รวมกรดฟรี เปอร์เซ็นต์กรดและร้อยละผูกพันอะ เพราะสปอนนิฟิเคชั่นสมบูรณ์
ของกลุ่มตัวอย่างการสกัดที่ไม่สมบูรณ์หรือไม่สมบูรณ์
แห้ง นอกจากนี้สปอนนิฟิเคชั่น ( ฟรี
กรดน้ำส้ม ( มาตรา 12 ) ควรเกิดขึ้นหรือต่ำกว่าอุณหภูมิในห้อง

อุณหภูมิสูงเพราะดีอะเซทิลเลชันในตัวอย่างไม้ยาว และให้

ผลผลสูงและกรดฟรี ตัวอย่างไม้ต้องแห้ง
อย่างละเอียดเพื่อให้ได้ถูกต้องร้อยละผูกพัน
ความหมายคุณค่าบนพื้นฐานของน้ำหนักแห้ง การเปรียบเทียบระหว่างห้องปฏิบัติการ
เปอร์เซ็นต์ผลผูกพันอะได้แต่
บนตัวอย่างที่มีแห้งในขอบเขตเดียวกับ
อธิบายในวิธีนี้

7 อุปกรณ์ :
ต่อไปนี้โดยระบบมีการใช้ประสบความสำเร็จสำหรับ
ความมุ่งมั่นนี้ ระบบที่มีความสามารถและคุณสมบัติเดียวกัน
ยังอาจใช้
7