2.4. Identification of starterThe i

2.4. Identification of starter

The isolate KL-12 selected as a starter was identified by observation of colony shape, gram staining, and cell morphology using microscope. The isolate was further identified by using an API kit (API 50 CHL, BioMerieux, France) and 16S rRNA gene sequencing. 16S ribosomal RNA coding gene was amplified by direct PCR using universal primers: forward; 5′-GAGTTGGATCCTGGCTCAG-3′ and reverse; 5′-AAGGAGGGGATCCAGCC-3′. The reaction mixture consisted of 300 mM Tris–HCl (pH 8.8), 100 mM (NH4)2SO4, 100 mM KCl, 20 mM MgSO4, 20 pM of each primer, 20 mM of each dNTP, 2 unit of Taq polymerase (Genenmed, USA), and a 20 ng template. Amplification was conducted for 30 cycles of the following conditions: 1 min at 95 °C, 1 min of annealing at 55 °C, and 2 min of extension at 72 °C using a PCR machine (T Gradient model, Biometera, Germany). The PCR products were directly sequenced with an ABI Prism 3700 genetic analyzer at the Macrogen, Inc. (Korea). The 16S rDNA sequences were analyzed using the GenBank database, and identification was performed on the basis of 16S rDNA sequence homology.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.4. รหัสของ starterการแยก KL-12 เลือกเป็นเริ่มต้นที่ระบุ โดยสังเกตรูปร่างโคโลนี ย้อมสีกรัม และสัณฐานวิทยาของเซลล์การใช้กล้องจุลทรรศน์ เพิ่มเติมระบุการแยก โดยใช้กับชุด API (API 50 CHL, BioMerieux ฝรั่งเศส) และ 16S rRNA ยีนลำดับ 16S ribosomal อาร์เอ็นเอยีนสภาพถูกขยาย โดยตรง PCR โดยใช้ไพรเมอร์สากล: ส่งต่อ 5′-GAGTTGGATCCTGGCTCAG-3′ และ กลับ 5′-AAGGAGGGGATCCAGCC-3′ ประกอบด้วยส่วนผสมของปฏิกิริยา 300 มม.ตรี – HCl (pH 8.8), 100 มม. (NH4) 2SO4, 100 mM KCl, 20 มม. MgSO4, 20 น.ของแต่ละสีรองพื้น 20 มม.ของ dNTP แต่ละ Taq พอลิเมอเรส (Genenmed สหรัฐอเมริกา), หน่วย 2 และแม่ ng 20 วิธีการขยายสำหรับรอบ 30 เงื่อนไขต่อไปนี้: 1 นาทีที่ 95 ° C, 1 นาทีของการอบเหนียวที่ 55 ° C, 2 นาทีที่ 72 ° C ใช้เครื่อง PCR (ไล่ระดับ T รุ่น Biometera เยอรมนี) ที่ต่ออายุ มีการเรียงลำดับผลิตภัณฑ์ PCR ได้โดยตรงกับการวิเคราะห์ทางพันธุกรรม 3700 ปริซึม ABI ที่ Macrogen, Inc. (เกาหลี) การ 16S rDNA ลำดับถูกวิเคราะห์โดยใช้ฐานข้อมูลของ GenBank และรหัสถูกดำเนินการตาม 16S rDNA ลำดับ homology

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.4 บัตรประจำตัวของเริ่มต้นที่แยก KL-12 เลือกเป็นเริ่มต้นที่ถูกระบุโดยการสังเกตจากรูปร่างอาณานิคมย้อมสีกรัมและสัณฐานวิทยาของเซลล์โดยใช้กล้องจุลทรรศน์ แยกถูกระบุต่อไปโดยใช้ชุด API (API 50 CHL, bioMerieux ฝรั่งเศส) และ 16S rRNA ลำดับยีน 16S โซมอลอาร์เอ็นเอของยีนเข้ารหัสถูกขยายโดยวิธี PCR โดยตรงโดยใช้ไพรเมอร์สากล: ไปข้างหน้า; 5'-GAGTTGGATCCTGGCTCAG-3 'และย้อนกลับ; 5'-AAGGAGGGGATCCAGCC-3 ' ผสมปฏิกิริยาประกอบด้วย 300 มิลลิ Tris-HCl (pH 8.8) 100 มิลลิ (NH4) 2SO4 100 มิลลิ KCl 20 มิลลิ MgSO4 20 นของแต่ละไพรเมอร์ 20 มิลลิของแต่ละ dNTP 2 หน่วยของโพลิเมอร์ Taq (Genenmed, สหรัฐอเมริกา) และแม่แบบ 20 นาโนกรัม ขยายได้ดำเนินการเป็นเวลา 30 รอบของเงื่อนไขต่อไปนี้: 1 นาทีที่ 95 องศาเซลเซียส 1 นาทีของการอบที่ 55 องศาเซลเซียสและ 2 นาทีของการขยายที่ 72 ° C ใช้เครื่องพีซีอาร์ (T รูปแบบไล่โทนสี, Biometera, เยอรมนี) ผลิตภัณฑ์ PCR มีลำดับขั้นตอนโดยตรงกับทางพันธุกรรมวิเคราะห์ปริซึม ABI 3700 ที่ Macrogen, Inc (เกาหลี) 16S rDNA ลำดับวิเคราะห์โดยใช้ฐานข้อมูล GenBank และบัตรประจำตัวที่ได้ดำเนินการบนพื้นฐานของลำดับที่คล้ายคลึงกัน 16S rDNA

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.4 . การจำแนกชนิดของเชื้อที่แยกได้ kl-12

เลือกเป็นเริ่มต้นถูกระบุโดยการสังเกตของอาณานิคมรูปร่างกรัม staining และสัณฐานวิทยาของเซลล์โดยใช้กล้องจุลทรรศน์ แยกยังระบุใช้ชุด API ( API 50 CHL biomerieux , ฝรั่งเศส ) และลำดับเบส 16S rRNA ยีน . การเข้ารหัสยีน 16S ไรโบโซมอล อาร์เอ็นเอของเชื้อโดยตรง โดยใช้ไพรเมอร์สากล : ไปข้างหน้า5 ’ - ’ gagttggatcctggctcag-3 และย้อนกลับ ; 5 ’ - ’ aaggaggggatccagcc-3 . ปฏิกิริยาผสมจำนวน 300 มม. นอกจากนี้ – HCl ( พีเอช 8.8 ) 100 มิลลิเมตร ( NH4 ) 2so4 KCl 100 มม. MgSO4 ใ 20 มม. 20 PM ของแต่ละคู่ , 20 มม. ของแต่ละ dntp 2 หน่วยของแท็กการ ( genenmed , USA ) และ 20 ของแม่แบบ ขยายเป็น 30 รอบของเงื่อนไขต่อไปนี้ : 1 นาทีที่ 95 องศา C , 1 นาที อบอ่อนที่อุณหภูมิ 55 องศา Cและ 2 นาทีที่ 72 ° C การใช้ PCR machine ( T ไล่ระดับแบบ biometera , เยอรมัน ) ที่เพิ่มปริมาณโดยตรงนี้กับ ABI ปริซึม 3700 พันธุกรรมวิเคราะห์ที่ macrogen , Inc ( เกาหลี ) ช่วง 16S rDNA ยีนโดยใช้ขนาดฐานข้อมูล และการกระทำบนพื้นฐานของ 16S rDNA sequence homology .