Cell morphology was observed using phase-contrast microscopy.
The presence of Azotobacter-type cysts was determined
using the staining procedure of Vela & Wyss (1964).
Cells were fixed and observed using electron microscopy,
which was performed at UMAT (Unidad de Microscopı´a
Electro´ nica de Transimisio´ n), Facultad de Ciencias,
UDELAR, Uruguay. Exponentially growing cells were fixed
with 2.5% glutaraldehyde and 4% para-formaldehyde in
0.1 M phosphate buffer (pH 7.4) for 1 h at 4 uC. After
centrifugation, cells were washed twice with 0.05 M
cacodylate buffer (pH 6.4), fixed for 1 h with 1% osmium
tetroxide in 0.025 M cacodylate buffer (pH 6.5), harvested,
washed three times with distilled water, dehydrated in
increasing concentrations of ethanol and embedded in SPIChem
Araldite resin. Thin (300–500 nm) and ultrathin
(50–70 nm) sections were cut on an RMC MT-X ultramicrotome
and stained with uranyl acetate and lead stain
solution (Sigma–Aldrich). The size of the cells was
determined by negative staining with 2% (w/v) uranyl
acetate. Electron microscopy was performed in a JEOL
JEM-1010 transmission electron microscope at 80 kV with
calibrated magnifications. Images were obtained with a
digital Hamamatsu C-4742-95 camera.
Cell morphology was observed using phase-contrast microscopy.The presence of Azotobacter-type cysts was determinedusing the staining procedure of Vela & Wyss (1964).Cells were fixed and observed using electron microscopy,which was performed at UMAT (Unidad de Microscopı´aElectro´ nica de Transimisio´ n), Facultad de Ciencias,UDELAR, Uruguay. Exponentially growing cells were fixedwith 2.5% glutaraldehyde and 4% para-formaldehyde in0.1 M phosphate buffer (pH 7.4) for 1 h at 4 uC. Aftercentrifugation, cells were washed twice with 0.05 Mcacodylate buffer (pH 6.4), fixed for 1 h with 1% osmiumtetroxide in 0.025 M cacodylate buffer (pH 6.5), harvested,washed three times with distilled water, dehydrated inincreasing concentrations of ethanol and embedded in SPIChemAraldite resin. Thin (300–500 nm) and ultrathin(50–70 nm) sections were cut on an RMC MT-X ultramicrotomeand stained with uranyl acetate and lead stainsolution (Sigma–Aldrich). The size of the cells wasdetermined by negative staining with 2% (w/v) uranylacetate. Electron microscopy was performed in a JEOLJEM-1010 transmission electron microscope at 80 kV withcalibrated magnifications. Images were obtained with adigital Hamamatsu C-4742-95 camera.
การแปล กรุณารอสักครู่..

ลักษณะทางสัณฐานวิทยาของเซลล์ได้รับการสังเกตโดยใช้กล้องจุลทรรศน์เฟสตรงกันข้าม.
การปรากฏตัวของซีสต์ Azotobacter
ชนิดที่ได้รับการกำหนดโดยใช้ขั้นตอนการย้อมสีของใบเรือและWyss (1964).
เซลล์ได้รับการแก้ไขและการสังเกตโดยใช้กล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอน,
ซึ่งได้รับการดำเนินการที่ Umat (Unidad De Microscopı'
Electro' ไอซีเด Transimisio' n), Facultad de Ciencias,
UDELAR, อุรุกวัย ชี้แจงเซลล์ที่เพิ่มขึ้นได้รับการแก้ไขด้วย glutaraldehyde 2.5% และ 4% พาราดีไฮด์ใน 0.1 M ฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (pH 7.4) เป็นเวลา 1 ชั่วโมง 4 UC หลังจากการปั่นแยกเซลล์ถูกล้างครั้งที่สองกับ 0.05 M บัฟเฟอร์ cacodylate (pH 6.4) คงเป็นเวลา 1 ชั่วโมงกับ 1% ออสเมียมtetroxide ใน 0.025 M บัฟเฟอร์ cacodylate (pH 6.5), การเก็บเกี่ยว, ล้างสามครั้งด้วยน้ำกลั่นแห้งในการเพิ่มความเข้มข้นของเอทานอลและฝังตัวอยู่ใน SPIChem Araldite เรซิน บาง (300-500 นาโนเมตร) และบางเฉียบ(50-70 นาโนเมตร) ส่วนที่ถูกตัดออกใน ultramicrotome RMC MT-X และย้อมด้วยสีอะซิเตทและคราบ uranyl นำวิธีการแก้ปัญหา(Sigma-Aldrich) ขนาดของเซลล์ที่ถูกกำหนดโดยการย้อมสีที่เป็นลบ 2% (w / v) uranyl acetate กล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอนได้ดำเนินการใน JEOL กล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอนส่ง JEM-1010 ที่ 80 กิโลโวลต์ที่มีกำลังขยายการสอบเทียบ ได้รับภาพที่มีดิจิตอล Hamamatsu กล้อง C-4742-95
การแปล กรุณารอสักครู่..
