2. Materials and methods
2.1. Equipment
Three HPLC instruments in deferent laboratories were used in the study: a manual system consisting of two 510 pumps, a rheodyne 7125 injector, 680 controller, 8_10
radial compression module and an SPD-M10A diode array detector controlled with
Class software . The other systems were integrated HP1050 and HP1100 instruments
respectively, incorporating autosampler, quaternary pump, on-line degasser and diode array detector, controlled with ChemStation software. Initial studies involved the use of the Resolve C18, 5 mm. 100_8 mm cartridge column, non-endcapped, 10%
carbon content . Several other C18 columns were evaluated and the following selected for further investigation: Nomura Develosil ODS-MG-5, 5 mm. 250_4.6
mm. dense end-capped, 15% carbon content, low ligand density (Phenomenex, Torrance, CA, USA); YMC AQ312, 5 mm, 150_4.6 mm. hydrophilic endcapped,
16% carbon load Platinum EPS, 3 mm. 53_7 mm. non-endcapped, reduced
ligand density and a Luna Phenyl-C6 column, 5 mm, 250_4.6 mm, 18% carbon
(Phenomenex) evaluated for its combined aliphatic/aromatic selectivity. A Luna C8 column, 5 mm, 250_4.6mm. hydrophobic shielded endcapped, 13.5% carbon(Phenomenex), was also selected for further study.
2.2. Reagents
Water (>18 M), d-pantothenic acid, hemicalcium salt , acetonitrile (HPLCgrade, BDH, Merck, Poole, UK), potassium dihydrogen orthophosphate, orthophosphoric acid and glacial acetic acid (AR grade, BDH).Phosphate bu€er (0.1 M, pH 2.25) was prepared by dissolving 13.61 g KH2PO4 in water (1.0 l) and adjusting
pH with H3PO4. Acetic acid (3.0% v/v) was prepared by diluting 15 ml to 0.5 l with water. Mobile phase was prepared by mixing, subsequent to
2 วัสดุและวิธีการ
2.1 สามเครื่องมือในห้องปฏิบัติการ hplc คล้อยตามอุปกรณ์
ถูกนำมาใช้ในการศึกษา: ระบบด้วยตนเองประกอบด้วยสอง 510 ปั๊ม rheodyne 7125 หัวฉีด, 680 ควบคุม 8_10
โมดูลการบีบอัดรัศมีและ spd-m10a เครื่องตรวจจับอาร์เรย์ไดโอดควบคุมด้วย
ซอฟต์แวร์ระดับ ระบบอื่น ๆ ได้รวม hp1050 และ hp1100 เครื่องมือ
ตามลำดับผสมผสาน autosampler ปั๊มสี่, degasser ออนไลน์และอาร์เรย์ไดโอดตรวจจับควบคุมด้วยซอฟต์แวร์ ChemStation เริ่มต้นการศึกษาที่เกี่ยวข้องกับการใช้งานของ c18 แก้ไข, 5 มม. 100_8 มม. คอลัมน์ตลับ, ที่ไม่ใช่ endcapped-10%
ปริมาณคาร์บอน หลายคอลัมน์ c18 อื่น ๆ ได้รับการประเมินและเลือกต่อไปนี้เพื่อตรวจสอบต่อไป: โนมูระ develosil ODS มิลลิกรัม-5, 5 มม. 250_4.6
มิลลิเมตรปลายหนาแน่นปกคลุมด้วย 15% ปริมาณคาร์บอนที่มีความหนาแน่นต่ำลิแกนด์ (Phenomenex, TORRANCE แคลิฟอร์เนีย, สหรัฐอเมริกา); aq312 YMC, 5 มม. 150_4.6 มิลลิเมตร endcapped น้ำ,
16% โหลดคาร์บอน eps แพลทินัม 3 มิลลิเมตร มม. 53_7 ไม่ endcapped ลด
ความหนาแน่นของลิแกนด์และ luna คอลัมน์ phenyl-c6, 5 มม. 250_4.6 มม. , 18% คาร์บอน
(Phenomenex) ประเมินสารประกอบรวม / หัวกะทิที่มีกลิ่นหอมของ คอลัมน์ luna c8, 5 มม. 250_4.6mmน้ำป้องกัน endcapped 13.5% คาร์บอน (Phenomenex) นอกจากนี้ยังได้รับเลือกในการศึกษาต่อ.
2.2 น้ำยา
น้ำ (> 18 ม. ), D-pantothenic กรดเกลือ hemicalcium, acetonitrile (hplcgrade, BDH เมอร์คพูล, สหราชอาณาจักร), โพแทสเซียม dihydrogen ออร์โธฟอสเฟตกรด orthophosphoric และกรดอะซิติกน้ำแข็ง (ar เกรด BDH). ฟอสเฟต bu € เอ้อ (0.1 เมตร ph 2.25) ได้รับการจัดทำขึ้นโดยการละลาย 13.61 กรัม kh2po4 ในน้ำ (10 ลิตร) และปรับ
ph ด้วย H3PO4 กรดอะซิติก (3.0% v / v) ได้รับการจัดทำขึ้นโดยเจือจาง 15 มล. 0.5 ลิตรที่มีน้ำ เฟสเคลื่อนที่ได้รับการจัดทำขึ้นโดยผสมภายหลัง
การแปล กรุณารอสักครู่..
2. วัสดุและวิธีการ
2.1 อุปกรณ์
เครื่อง HPLC ที่สามในห้องปฏิบัติการเกรงถูกใช้ในการศึกษา: ระบบด้วยตนเองประกอบด้วยปั๊มสอง 510 การอัด rheodyne 7125 ควบคุม 680, 8_10
โมดูรัศมีบีบและจับเรย์ไดโอด SPD M10A ที่ควบคุมด้วย
คลาซอฟต์แวร์ ระบบมีเครื่องมือ HP1050 และ HP1100 รวม
ตามลำดับ เพจ autosampler ปั๊ม quaternary, degasser ง่ายดาย และไดโอดอาร์เรย์จับ ควบคุม ด้วยซอฟต์แวร์ ChemStation เริ่มต้นการศึกษาเกี่ยวข้องกับการใช้การแก้ไข C18, 5 mm. 100_8 mm ตลับคอลัมน์ ไม่ใช่-endcapped, 10%
คาร์บอน คอลัมน์ C18 อื่น ๆ หลายที่ประเมิน และเลือกเพื่อการตรวจสอบเพิ่มเติมต่อไปนี้: โนมูระ Develosil ODS-MG-5, 5 mm. 250_4.6
mm หนาแน่นจบปรบมือ 15% คาร์บอน ลิแกนด์ต่ำความหนาแน่น (Phenomenex รันซ์ CA, USA); YMC AQ312, 5 mm, 150_4.6 mm. hydrophilic endcapped,
ลดลง 16% คาร์บอนโหลดแพลตตินั่ม EPS, 3 mm. 53_7 mm. ไม่ใช่-endcapped
ความหนาแน่นของลิแกนด์และคอลัมน์ Luna Phenyl C6, 5 mm, 250_4.6 mm, carbon
(Phenomenex) 18% ประเมินความใว aliphatic/หอม รวมด้วย เป็นคอลัมน์ Luna C8, 5 mm, 250_4.6mm ยังเลือก hydrophobic shielded endcapped, 13.5% carbon(Phenomenex) สำหรับศึกษาเพิ่มเติม.
2.2 Reagents
น้ำ (> 18 M), กรดแพนโทธีนิค d, hemicalcium เกลือ acetonitrile (HPLCgrade, BDH เมอร์ค Poole, UK), โพแทสเซียมไฮโดรเจน orthophosphate กรด orthophosphoric และกรดอะซิติกน้ำแข็ง (AR เกรด BDH)ฟอสเฟตบุ€เอ้อ (0.1 M, pH 2.25) ถูกเตรียม โดยยุบ g 13.61 KH2PO4 ในน้ำ (10 l) และปรับ
ค่า pH กับ H3PO4 กรดอะซิติก (3.0% v/v) ถูกเตรียม โดย diluting 15 ml ใน 0.5 l น้ำ ระยะเคลื่อนที่เตรียม โดยผสม ต่อไป
การแปล กรุณารอสักครู่..
2 . วัสดุและวิธีการ
2.1 . อุปกรณ์
สาม hplc เครื่องมือในห้องปฏิบัติการซึ่งอนุโลมได้ถูกนำมาใช้ในการศึกษา:คู่มือระบบซึ่งประกอบด้วยสอง 510 ปั๊ม,ที่ rheodyne - 7125 เครื่องฉีด, 680 คอนโทรลเลอร์, 8 ___ 10
รัศมีการบีบอัดโมดูลและที่เป็น ประเภท SPD - ม. 10 ที่ไดโอดวัด อุณหภูมิ ความหลากหลายอุปกรณ์ตรวจจับการควบคุมด้วย
Class ซอฟต์แวร์ ระบบอื่นๆที่เป็นแบบอินทิเกรตรุ่น HP 1050 และ HP 1100
ซึ่งจะช่วยงานฝึกงานตามลำดับประกอบด้วยอุปกรณ์ตรวจจับเครื่องปั๊มน้ำนมยุคที่สี่ autosampler หลากหลายไดโอดวัด อุณหภูมิ และ degasser On - Line การควบคุมด้วยซอฟต์แวร์ chemstation . การศึกษาครั้งแรกมีส่วนเกี่ยวข้องกับการใช้ที่ของการแก้ไข C 18 ที่ 5 มม. คอลัมน์กระสุน 8 มม. 100 ___ไม่ endcapped 10%
ปริมาณคาร์บอน. 18 คอลัมน์ C อื่นๆหลายคนได้รับการประเมินและต่อไปนี้ที่เลือกสำหรับการสืบสวนสอบสวนเพิ่มเติมอื่นๆ develosil โชว์เฟอร์ ODS - มก. 55 ม.ม. 250 __ _ 4.6
มม.ปริมาณคาร์บอน 15% ปลายยอดเขามีความหนาแน่นต่ำความหนาแน่น ligand ( phenomenex torrance CA ,สหรัฐอเมริกา) ymc 312 ติดตั้งสวิชเกียร์ 5 มม. 150 __ _ 4.6 endcapped เคลือบมม.
แพลตตินั่ม EPS โหลดคาร์บอน 16% 3 ม.ม. 53 ___
ซึ่งจะช่วยลดความหนาแน่น ligand 7 ม.ม.ไม่ใช่ - endcapped คอลัมน์และ Luna phenyl - c 6 ที่ 5 มม. 250 __ _ 4.6 มม. 18% คาร์บอน
( phenomenex )ได้รับการประเมินสำหรับตัวเลือกกลิ่นหอมอะลิฟาติกไฮโดรคาร์บอน/รวมกันได้. Luna C ที่ 8 คอลัมน์ 5 มม. 250 __ _ 4.6 มม.กลัวน้ำหมายความสายหุ้มฉนวน endcapped 13.5% คาร์บอน( phenomenex )ได้รับเลือกในการศึกษาเพิ่มเติมอีกด้วย. N 2.2 reagents
น้ำ(> 18 ม.), D - ตินจัดอยู่ชนิดตะกั่วกรดแบบซีล, hemicalcium เกลือ, acetonitrile ( hplcgrade , bdh , merck , poole ,สหราชอาณาจักร),โปแตสเซียม dihydrogen orthophosphate , orthophosphoric ชนิดตะกั่วกรดแบบซีลธารน้ำแข็งและกรดอะซิติกชนิดตะกั่วกรดแบบซีล(อาร์เจนตินา คุณภาพ , bdh )ฟอสเฟต BU €™ ER ( 0.1 ม., pH 2.25 )ได้โดยบรรจุ 13.61 กรัม KH 2 PO 4 ในน้ำ( 1 )0 L ) PO 4 และการปรับค่า pH
ตามมาตรฐานพร้อมด้วย h3 . แบตเตอรี่ชนิดตะกั่วกรดแบบซีลกรดอะซิติก( 3.0% v / v )ได้จัดทำไว้จาก diluting 15 มล. 0.5 L พร้อมด้วยน้ำ ขั้นตอนแบบพกพาได้โดยการผสมใน ภายหลัง เพื่อตอบแทน
การแปล กรุณารอสักครู่..