Single site-directed mutants were constructed following the
standard protocol using WT construct pET32a-VP as the template.
Easily oxidizable methionines Met152, Met 247, Met262, and
Met265 were replaced with high-redox-potential residues Leu
or Phe respectively. Ala77, Ala79, and Ile 81were replaced with
Ser/Glu, Ser/Leu, and Leu respectively according to the paper by
Miyazaki-Imamura et al. [24]. Pro141, Ser168, and Phe186 were
replaced with Ala respectively. Triple mutants A77S/A79L/I81L
and A77E/A79S/I81L were also constructed based on combinatorial
mutagenesis studies toward oxidative stability of MnP [24].
Double and multiple mutants such as M247L/M265L, A77E/I81L,
A77E/A79S/I81L/M265L, A77E/A79S/I81L/M247L/M265L, and
Single site-directed mutants were constructed following thestandard protocol using WT construct pET32a-VP as the template.Easily oxidizable methionines Met152, Met 247, Met262, andMet265 were replaced with high-redox-potential residues Leuor Phe respectively. Ala77, Ala79, and Ile 81were replaced withSer/Glu, Ser/Leu, and Leu respectively according to the paper byMiyazaki-Imamura et al. [24]. Pro141, Ser168, and Phe186 werereplaced with Ala respectively. Triple mutants A77S/A79L/I81Land A77E/A79S/I81L were also constructed based on combinatorialmutagenesis studies toward oxidative stability of MnP [24].Double and multiple mutants such as M247L/M265L, A77E/I81L,A77E/A79S/I81L/M265L, A77E/A79S/I81L/M247L/M265L, and
การแปล กรุณารอสักครู่..
การกลายพันธุ์เว็บไซต์กำกับเดี่ยวถูกสร้างขึ้นดังต่อไปนี้
โดยใช้โปรโตคอลมาตรฐาน WT สร้าง pET32a-VP เป็นแม่.
ได้อย่างง่ายดายออกซิไดซ์ methionines Met152, Met 247, Met262 และ
Met265 ถูกแทนที่ด้วยสารตกค้างสูงรีดอกซ์ที่มีศักยภาพลื้อ
หรือเพตามลำดับ Ala77, Ala79 และ Ile 81were แทนที่ด้วย
Ser / Glu, Ser / ลื้อและลื้อตามลำดับตามกระดาษโดย
มิยาซากิ-Imamura และคณะ [24] Pro141, Ser168 และ Phe186 ถูก
แทนที่ด้วย Ala ตามลำดับ การกลายพันธุ์ Triple A77S / A79L / I81L
และ A77E / A79S / I81L ถูกสร้างขึ้นนอกจากนี้ยังขึ้นอยู่กับ combinatorial
ศึกษาฉับไปสู่ความมั่นคงออกซิเดชันของ MNP [24].
คู่กลายพันธุ์และหลายอย่างเช่น M247L / M265L, A77E / I81L,
A77E / A79S / I81L / M265L, A77E / A79S / I81L / M247L / M265L และ
การแปล กรุณารอสักครู่..
เว็บไซต์ที่ถูกสร้างขึ้นตามสายพันธุ์เดียว
โปรโตคอลมาตรฐานที่ใช้โดยสร้าง pet32a VP เป็นแม่แบบ
oxidizable ได้อย่างง่ายดาย methionines met152 พบ 247 , met262 และ
met265 ถูกแทนที่ด้วยสูงรีดอกซ์ศักยภาพตกค้างหรือเพือ
ตามลำดับ ala77 ala79 , และใน 81were แทนที่ด้วย
เซอร์ / ซึ่ง เซอร์ / ลิว และ Leu ตามลำดับตามกระดาษโดย
มิยาซากิอิมามูระ et al .[ 24 ] pro141 ser168 , และถูกแทนที่ด้วยอ่า
phe186 ตามลำดับ สามพันธ์ a77s / a79l / i81l
/ / i81l a77e a79s และยังสร้างขึ้นตามเชิง
การศึกษาการกลายพันธุ์ต่อเสถียรภาพต่อการเกิดออกซิเดชันของ MNP [ 24 ] .
คู่และหลายสายพันธุ์ เช่น m247l / m265l a77e / i81l
, , a77e / a79s / i81l / m265l a77e / , a79s / i81l / m247l / m265l , และ
การแปล กรุณารอสักครู่..