The derivatization agent choiceIn a

The derivatization agent choice

In a first time, we attempted to analyze glutathione in reverse phase without any derivatization step. Due to its hydrophilic behavior, it was not possible to reach a satisfactory sensitivity because it was not retained enough on the pre column during the enrichment step. The HPLC-Chip/MS interface did not enable to inject the analyte directly onto the separation column. Consequently, we decided to chemically modify glutathione to enhance its hydrophobicity and then its retention on C18 column. In literature, iodoacetic acid and N-ethylmaleimide are the two most commonly reagents employed for GSH derivatization in biological samples. Iodoacetic acid did not increase the hydrophobicity of glutathione due to its carboxylic acid function and thus was not convenient to be used under our conditions. So, N-ethylmaleimide was preferred to enhance the glutathione lipophily (Fig. 1). In addition, the type of separation column phase was an important choice to insure an efficient retention of glutathione. Under our conditions, the most adapted phase was the ZORBAX 300 SB-AQ, which is specially designed for hydrophilic compounds and can be used with 100% water.

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ทางเลือกตัวแทนอนุพันธ์ในครั้งแรกที่เราพยายามที่จะวิเคราะห์กลูตาไธโอนในขั้นตอนขั้นตอนโดยไม่ต้องย้อนกลับอนุพันธ์ใด ๆ เนื่องจากพฤติกรรมชอบน้ำของมันก็เป็นไปไม่ได้ที่จะไปถึงความไวที่น่าพอใจเพราะมันไม่ได้เก็บไว้เพียงพอในคอลัมน์ก่อนในระหว่างขั้นตอนการตกแต่ง อินเตอร์เฟซที่ HPLC ชิป / MS ไม่ได้เปิดใช้งานเพื่อฉีดวิเคราะห์โดยตรงไปยังคอลัมน์แยก ดังนั้นเราจึงตัดสินใจที่จะปรับเปลี่ยนกลูตาไธโอนสารเคมีเพื่อเพิ่มไฮโดรและแล้วการเก็บรักษาในคอลัมน์ C18 ในวรรณคดีกรด iodoacetic และ N-ethylmaleimide เป็นสองส่วนใหญ่มักใช้ในการวิเคราะห์สาร GSH อนุพันธ์ในตัวอย่างทางชีวภาพ กรด Iodoacetic ไม่ได้เพิ่มขึ้นไฮโดรกลูตาไธโอนเนื่องจากการทำงานของกรดคาร์บอกซิจึงเป็นไม่สะดวกในการใช้ภายใต้เงื่อนไขของเรา ดังนั้น N-ethylmaleimide เป็นที่ต้องการเพื่อเพิ่ม lipophily กลูตาไธโอน (รูปที่ 1). นอกจากนี้ประเภทของเฟสคอลัมน์แยกเป็นทางเลือกที่สำคัญเพื่อประกันการเก็บรักษาที่มีประสิทธิภาพของกลูตาไธโอน ภายใต้เงื่อนไขของเราขั้นตอนการปรับตัวมากที่สุดคือ ZORBAX 300 SB-AQ ซึ่งถูกออกแบบมาเป็นพิเศษสำหรับสารน้ำและสามารถใช้กับน้ำ 100%

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

กับตัวแทนที่เลือก

เป็นครั้งแรกที่เราพยายามที่จะวิเคราะห์ กลูต้าไธโอนในเฟสกลับไม่มีกับขั้นตอน เนื่องจากพฤติกรรมที่ชอบน้ำของมัน มันไม่ได้เป็นไปได้ที่จะเข้าถึงความน่าพอใจ เพราะมันไม่สะสมเพียงพอในคอลัมน์ก่อน ระหว่างการก้าวชิป / MS พบอินเตอร์เฟซที่ไม่ได้ใช้งานฉีดโดยตรงลงบนครูแยกคอลัมน์ ดังนั้นเราจึงตัดสินใจที่จะปรับเปลี่ยนเพื่อเพิ่มประสิทธิภาพของกลูต้าไธโอน ทางเคมีและการบรรจุภัณฑ์ของคอลัมน์ c18 . ในวรรณคดี , กรดและความสามารถ n-ethylmaleimide เป็นสองส่วนใหญ่มักใช้กับสารเคมีชนิดในตัวอย่างทางชีวภาพกรดความสามารถไม่ได้เพิ่มความไม่ชอบของกลูต้าไธโอน เนื่องจากการทำงานของกรดคาร์บอกซิลิกและดังนั้นจึงไม่สะดวกที่จะใช้ภายใต้เงื่อนไขของเรา ดังนั้น n-ethylmaleimide คือต้องการเพิ่มกลูต้าไธโอน lipophily ( รูปที่ 1 ) นอกจากนี้ประเภทของการแยกเฟสคอลัมน์เป็นตัวเลือกที่สำคัญเพื่อประกันการรักษาที่มีประสิทธิภาพของกลูต้าไธโอน . ภายใต้เงื่อนไขของเราส่วนใหญ่ที่ปรับระยะได้ zorbax 300 sb-aq ซึ่งถูกออกแบบมาเป็นพิเศษสำหรับน้ำสารประกอบและสามารถใช้กับน้ำได้ 100 %