2.3.1. Listeria spp. and L. monocyt

2.3.1. Listeria spp. and L. monocytogenes
For Listeria genus-specific and L. monocytogenes species-specific
identifications by PCR of the presumptive isolates from 4 samples of
fresh-cut apple, two different primer combinations derived from
the iap gene, that encodes for the protein p60 (invasion associate
protein), were used: pair UnilisA (50-GCTACAGCTGGGATTGCGGT-
30) and Lis1B (50-TTATACGCGACCGAAGCCAA-30) (Bubert et al.,
1997). For the species L. monocytogenes, the primer pair MonoA
(50-CAAACTGCTAACACAGCACT-30) and MonoB (50-GCACTTGAATTGCTGTTATTG-
30) was used (Bubert et al., 1997). The DNA
amplification started with an initial denaturation phase at 94


C for
3 min, followed by 30 cycles, each at 94
C for 1 min, 56
C for 45 s
and 72
C for 45 s. An elongation phase was performed at 72
C for
5 min. The Listeria genus specific amplification product has 1.4 kb
and the L. monocytogenes specific amplification DNA product has
approximately 400 bp (Bubert et al., 1997). Fragment sizes were
estimated by comparison against a DNA ladder (NZYDNA Ladder 5,
NZYTech, Lisbon, Portugal).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.3.1. ออลิโอและ L. monocytogenesออลิสกุลเฉพาะและ L. monocytogenes species-specificรหัส โดย PCR ของ presumptive แยกจากตัวอย่าง 4ตัดแอปเปิ้ล รองพื้นแตกต่างกันสองชุดมาจากยีนให้ เมจแมปสำหรับ p60 โปรตีนที่ (รศบุกรุกโปรตีน), ใช้: คู่ UnilisA (50 - GCTACAGCTGGGATTGCGGT -30) และ Lis1B (50-TTATACGCGACCGAAGCCAA-30) (Bubert et al.,ปี 1997) . สำหรับชนิด L. monocytogenes รองพื้นแบบคู่ MonoA(50-CAAACTGCTAACACAGCACT-30) และ MonoB (50 - GCACTTGAATTGCTGTTATTG -30) ถูกใช้ (Bubert และ al., 1997) ดีเอ็นเอเริ่มขยายระยะการ denaturation เริ่มต้นที่ 94
C สำหรับ3 นาที ตาม ด้วย 30 รอบ แต่ละที่ 94 C ใน 1 นาที 56 C สำหรับ 45 sและ C 72 สำหรับ 45 s ทำระยะ elongation ที่ 72 C สำหรับ5 นาที ออลิสกุลเฉพาะขยายผลิตภัณฑ์ได้ 1.4 kbและมีผลิตภัณฑ์ L. monocytogenes ขยายได้เฉพาะดีเอ็นเอประมาณ 400 bp (Bubert และ al., 1997) ส่วนขนาดได้ประเมินโดยการเปรียบเทียบกับบันได DNA (NZYDNA บันได 5NZYTech ลิสบอน โปรตุเกส)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.3.1 Listeria spp และ L. monocytogenes
สำหรับ Listeria ประเภทที่เฉพาะเจาะจงและ L. monocytogenes
สายพันธุ์เฉพาะระบุโดยวิธีPCR ของสันนิษฐานแยกจาก 4
ตัวอย่างของแอปเปิ้ลสดตัดสองชุดไพรเมอร์ที่แตกต่างกันมาจากยีน
IAP ที่เข้ารหัสโปรตีน p60 (การบุกรุก
ร่วมโปรตีน) ถูกนำมาใช้: คู่ UnilisA (50
GCTACAGCTGGGATTGCGGT-. 30) และ Lis1B (50 TTATACGCGACCGAAGCCAA-30) (Bubert, et al,
1997) สำหรับชนิด L. monocytogenes ที่คู่ไพรเมอร์ MonoA
(50 CAAACTGCTAACACAGCACT-30) และ MonoB (50 GCACTTGAATTGCTGTTATTG-
30) ใช้ (Bubert et al., 1997) ดีเอ็นเอขยายเริ่มต้นด้วยขั้นตอนการเริ่มต้น denaturation ที่ 94? C เป็นเวลา3 นาทีตามด้วย 30 รอบแต่ละที่ 94 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 1 นาที 56 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 45 วินาทีและ72 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 45 วินาที ขั้นตอนการยืดตัวถูกดำเนินการใน 72? C เป็นเวลา5 นาที ผลิตภัณฑ์ประเภท Listeria ขยายเฉพาะมี 1.4 กิโลและL. monocytogenes เฉพาะสินค้าที่มีการขยายดีเอ็นเอประมาณ400 bp (Bubert et al., 1997) ขนาดชิ้นส่วนได้รับการประเมินโดยเปรียบเทียบกับบันไดดีเอ็นเอ (NZYDNA บันได 5 NZYTech, ลิสบอน, โปรตุเกส)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.3.1 . Listeria spp . และ monocytogenes
สำหรับ Listeria สกุลที่เฉพาะเจาะจงและ L . monocytogenes
อะไรบ่งบอกเผ่าพันธุ์ - เฉพาะโดยวิธี PCR ของความเป็นไปได้ ที่แยกได้จาก 4 ตัวอย่าง
แอปเปิ้ลตัดสด สองชุด ไพรเมอร์ที่แตกต่างกันมาจาก
IAP ยีนที่เข้ารหัสสำหรับโปรตีน P60 ( เชื่อมโยง
โปรตีนการบุกรุก ) , ใช้คู่ unilisa ( 50-gctacagctgggattgcggt -
:30 ) และ lis1b ( 50-ttatacgcgaccgaagccaa-30 ) ( bubert et al . ,
1997 ) สำหรับชนิด L . monocytogenes , ไพรเมอร์คู่ monoa
( 50-caaactgctaacacagcact-30 ) และ monob ( 50-gcacttgaattgctgttattg -
30 ) ใช้ ( bubert et al . , 1997 ) การเพิ่มปริมาณดีเอ็นเอ
เริ่มต้นเริ่มต้น ( ระยะที่
94

C
3 นาที ตามด้วย 30 รอบ แต่ละที่
94 องศาเซลเซียสนาน 1 นาที , 56
C 45 S
และ 72
C เป็นเวลา 45 วินาทีการยืดระยะทำการที่ 72
C
5 นาที Listeria สกุลเฉพาะผลิตภัณฑ์ 1.4 ( และบางครั้ง
L
monocytogenes ( สินค้ามีเฉพาะดีเอ็นเอประมาณ 400 BP ( bubert et al . , 1997 ) ส่วนขนาดได้
ประมาณโดยเปรียบเทียบกับดีเอ็นเอที่บันได ( บันได nzydna 5
nzytech ลิสบอน , โปรตุเกส )