- ข้อความ
- ประวัติศาสตร์
Materials and methodsMaterialsRb2 e
Materials and methods
Materials
Rb2 extracted from ginseng (molecular weight, 1079; purity,
N98.0%; dissolved in distilled water) was purchased from Shanghai
Tauto Biotech Co., LTD (China). The culture flasks and plates were
obtained fromNunc (Denmark). The ALP activity assay kitwas obtained
from GENMED Scientific Inc. (USA). RANKL and IL-6 ELISA assay kits
were obtained from R&D system Inc. (Minneapolis, MN, USA). The
total RNA kit was obtained from OMEGA. Prime Script RT reagent kit
and SYBR Premix Ex Taq were obtained from TaKaRa Biotechnology
(Dalian, China). The oligonucleotide primers were synthesized by
TaKaRa Biotechnology. BCIP/NBT alkaline phosphatase color development
kit was obtained from Gibco Life Technologies (Grand Island,
USA). The reactive oxygen species assay kit, GSH and MDA assay kits
were obtained fromthe Beyotime Institute of Biotechnology (Shanghai,
China). All other reagents were of analytical grade.
Cell cultures
MurineMC3T3-E1 cells were purchased from the Center Laboratory
for Tissue Engineering, College of Stomatology, Fourth Military Medical
University, Xi'an, China [29,30]. The cellswere cultured in α-MEMusing
10% heat-inactivated FBS and 100 U/ml penicillin and 100 mg/ml streptomycin
in a condition of 5% CO2 and 37 °C. H2O2 acted as exogenous
ROS treatment, whereas N-acetyl-L-cysteine (NAC) acted as an ROS
cleaner. When the cells reached confluence, the serum-free medium
containing Rb2 was dissolved in distilled water and cultured for 24 h before
the administration of 0.3 mM H2O2 for 24 h. For each experiment,
Rb2 administration continued after the pretreatment. All of the experiments
were performed in duplicate wells and repeated three times.
Assays of cell survival
For this experiment, the murine MC3T3-E1 cells were administered
using different consistencies of Rb2 (0 μM, 0.1 μM, 1 μM, and 10 μM) for
24 h and 72 h to test the toxicity of Rb2. Subsequently, the cells were incubated
using the serum-free regular culture medium, which contained
Rb2 (0 μM, 0.1 μM, 1 μM, and 10 μM) for 24 h followed by the administration
of 300 μMH2O2 for 24 h. TheMTT assays were used formeasuring cell
survival. The absorbances of all of the wells were recorded using a
micro-plate reader at 492 nm wavelength. The cell survival of the control
group, whichwas not exposed to eitherH2O2 or Rb2,wasdefined as 100%.
Alkaline phosphatase (ALP) staining and activity assay
After a 6-day osteogenic induction, the murineMC3T3-E1 cellswere
incubated using serum-free medium,which contained Rb2 and/or H2O2
for 2 days. The cells were stained using the BCIP/NBT alkaline phosphatase
color development kit according to themanufacturer's instructions.
To evaluate the ALP activity, the cell monolayer was lysed using the cell
lysis buffer. Subsequently, the lysate was centrifuged at 10,000 g for
5 min. The clear supernatant was used to measure the ALP activity,
which was determined employing the ALP activity assay kit. The total
protein consistencies were determined using the Bradford protein
assay method. The ALP activity was normalized to total protein, which
was measured using the Bradford protein assay method.
Materials
Rb2 extracted from ginseng (molecular weight, 1079; purity,
N98.0%; dissolved in distilled water) was purchased from Shanghai
Tauto Biotech Co., LTD (China). The culture flasks and plates were
obtained fromNunc (Denmark). The ALP activity assay kitwas obtained
from GENMED Scientific Inc. (USA). RANKL and IL-6 ELISA assay kits
were obtained from R&D system Inc. (Minneapolis, MN, USA). The
total RNA kit was obtained from OMEGA. Prime Script RT reagent kit
and SYBR Premix Ex Taq were obtained from TaKaRa Biotechnology
(Dalian, China). The oligonucleotide primers were synthesized by
TaKaRa Biotechnology. BCIP/NBT alkaline phosphatase color development
kit was obtained from Gibco Life Technologies (Grand Island,
USA). The reactive oxygen species assay kit, GSH and MDA assay kits
were obtained fromthe Beyotime Institute of Biotechnology (Shanghai,
China). All other reagents were of analytical grade.
Cell cultures
MurineMC3T3-E1 cells were purchased from the Center Laboratory
for Tissue Engineering, College of Stomatology, Fourth Military Medical
University, Xi'an, China [29,30]. The cellswere cultured in α-MEMusing
10% heat-inactivated FBS and 100 U/ml penicillin and 100 mg/ml streptomycin
in a condition of 5% CO2 and 37 °C. H2O2 acted as exogenous
ROS treatment, whereas N-acetyl-L-cysteine (NAC) acted as an ROS
cleaner. When the cells reached confluence, the serum-free medium
containing Rb2 was dissolved in distilled water and cultured for 24 h before
the administration of 0.3 mM H2O2 for 24 h. For each experiment,
Rb2 administration continued after the pretreatment. All of the experiments
were performed in duplicate wells and repeated three times.
Assays of cell survival
For this experiment, the murine MC3T3-E1 cells were administered
using different consistencies of Rb2 (0 μM, 0.1 μM, 1 μM, and 10 μM) for
24 h and 72 h to test the toxicity of Rb2. Subsequently, the cells were incubated
using the serum-free regular culture medium, which contained
Rb2 (0 μM, 0.1 μM, 1 μM, and 10 μM) for 24 h followed by the administration
of 300 μMH2O2 for 24 h. TheMTT assays were used formeasuring cell
survival. The absorbances of all of the wells were recorded using a
micro-plate reader at 492 nm wavelength. The cell survival of the control
group, whichwas not exposed to eitherH2O2 or Rb2,wasdefined as 100%.
Alkaline phosphatase (ALP) staining and activity assay
After a 6-day osteogenic induction, the murineMC3T3-E1 cellswere
incubated using serum-free medium,which contained Rb2 and/or H2O2
for 2 days. The cells were stained using the BCIP/NBT alkaline phosphatase
color development kit according to themanufacturer's instructions.
To evaluate the ALP activity, the cell monolayer was lysed using the cell
lysis buffer. Subsequently, the lysate was centrifuged at 10,000 g for
5 min. The clear supernatant was used to measure the ALP activity,
which was determined employing the ALP activity assay kit. The total
protein consistencies were determined using the Bradford protein
assay method. The ALP activity was normalized to total protein, which
was measured using the Bradford protein assay method.
0/5000
Materials and methodsMaterialsRb2 extracted from ginseng (molecular weight, 1079; purity,N98.0%; dissolved in distilled water) was purchased from ShanghaiTauto Biotech Co., LTD (China). The culture flasks and plates wereobtained fromNunc (Denmark). The ALP activity assay kitwas obtainedfrom GENMED Scientific Inc. (USA). RANKL and IL-6 ELISA assay kitswere obtained from R&D system Inc. (Minneapolis, MN, USA). Thetotal RNA kit was obtained from OMEGA. Prime Script RT reagent kitand SYBR Premix Ex Taq were obtained from TaKaRa Biotechnology(Dalian, China). The oligonucleotide primers were synthesized byTaKaRa Biotechnology. BCIP/NBT alkaline phosphatase color developmentkit was obtained from Gibco Life Technologies (Grand Island,USA). The reactive oxygen species assay kit, GSH and MDA assay kitswere obtained fromthe Beyotime Institute of Biotechnology (Shanghai,China). All other reagents were of analytical grade.Cell culturesMurineMC3T3-E1 cells were purchased from the Center Laboratoryfor Tissue Engineering, College of Stomatology, Fourth Military MedicalUniversity, Xi'an, China [29,30]. The cellswere cultured in α-MEMusing10% heat-inactivated FBS and 100 U/ml penicillin and 100 mg/ml streptomycinin a condition of 5% CO2 and 37 °C. H2O2 acted as exogenousROS treatment, whereas N-acetyl-L-cysteine (NAC) acted as an ROScleaner. When the cells reached confluence, the serum-free mediumcontaining Rb2 was dissolved in distilled water and cultured for 24 h before
the administration of 0.3 mM H2O2 for 24 h. For each experiment,
Rb2 administration continued after the pretreatment. All of the experiments
were performed in duplicate wells and repeated three times.
Assays of cell survival
For this experiment, the murine MC3T3-E1 cells were administered
using different consistencies of Rb2 (0 μM, 0.1 μM, 1 μM, and 10 μM) for
24 h and 72 h to test the toxicity of Rb2. Subsequently, the cells were incubated
using the serum-free regular culture medium, which contained
Rb2 (0 μM, 0.1 μM, 1 μM, and 10 μM) for 24 h followed by the administration
of 300 μMH2O2 for 24 h. TheMTT assays were used formeasuring cell
survival. The absorbances of all of the wells were recorded using a
micro-plate reader at 492 nm wavelength. The cell survival of the control
group, whichwas not exposed to eitherH2O2 or Rb2,wasdefined as 100%.
Alkaline phosphatase (ALP) staining and activity assay
After a 6-day osteogenic induction, the murineMC3T3-E1 cellswere
incubated using serum-free medium,which contained Rb2 and/or H2O2
for 2 days. The cells were stained using the BCIP/NBT alkaline phosphatase
color development kit according to themanufacturer's instructions.
To evaluate the ALP activity, the cell monolayer was lysed using the cell
lysis buffer. Subsequently, the lysate was centrifuged at 10,000 g for
5 min. The clear supernatant was used to measure the ALP activity,
which was determined employing the ALP activity assay kit. The total
protein consistencies were determined using the Bradford protein
assay method. The ALP activity was normalized to total protein, which
was measured using the Bradford protein assay method.
the administration of 0.3 mM H2O2 for 24 h. For each experiment,
Rb2 administration continued after the pretreatment. All of the experiments
were performed in duplicate wells and repeated three times.
Assays of cell survival
For this experiment, the murine MC3T3-E1 cells were administered
using different consistencies of Rb2 (0 μM, 0.1 μM, 1 μM, and 10 μM) for
24 h and 72 h to test the toxicity of Rb2. Subsequently, the cells were incubated
using the serum-free regular culture medium, which contained
Rb2 (0 μM, 0.1 μM, 1 μM, and 10 μM) for 24 h followed by the administration
of 300 μMH2O2 for 24 h. TheMTT assays were used formeasuring cell
survival. The absorbances of all of the wells were recorded using a
micro-plate reader at 492 nm wavelength. The cell survival of the control
group, whichwas not exposed to eitherH2O2 or Rb2,wasdefined as 100%.
Alkaline phosphatase (ALP) staining and activity assay
After a 6-day osteogenic induction, the murineMC3T3-E1 cellswere
incubated using serum-free medium,which contained Rb2 and/or H2O2
for 2 days. The cells were stained using the BCIP/NBT alkaline phosphatase
color development kit according to themanufacturer's instructions.
To evaluate the ALP activity, the cell monolayer was lysed using the cell
lysis buffer. Subsequently, the lysate was centrifuged at 10,000 g for
5 min. The clear supernatant was used to measure the ALP activity,
which was determined employing the ALP activity assay kit. The total
protein consistencies were determined using the Bradford protein
assay method. The ALP activity was normalized to total protein, which
was measured using the Bradford protein assay method.
การแปล กรุณารอสักครู่..
วัสดุและวิธีการวัสดุ
Rb2 สกัดจากโสม (น้ำหนักโมเลกุล, 1079; บริสุทธิ์
N98.0%; ละลายในน้ำกลั่น) ที่ซื้อมาจากเซี่ยงไฮ้
Tauto ไบโอเทค จำกัด (จีน) ขวดวัฒนธรรมและแผ่นถูกรับ fromNunc (เดนมาร์ก)
ผลการวิเคราะห์กิจกรรม ALP kitwas
ที่ได้รับจากGENMED วิทยาศาสตร์อิงค์ (USA) RANKL และ IL-6 วิธี ELISA
ชุดทดสอบที่ได้รับจากการวิจัยและพัฒนาระบบอิงค์(Minneapolis, MN, USA)
ชุด RNA รวมที่ได้รับจาก OMEGA นายกรัฐมนตรีสคริปต์ชุดน้ำยา RT
และ SYBR พรีมิกซ์ Ex Taq ที่ได้รับจาก Takara เทคโนโลยีชีวภาพ
(ต้าเหลียนประเทศจีน) ไพรเมอร์ oligonucleotide
ถูกสังเคราะห์โดยเทคโนโลยีชีวภาพTakara BCIP / NBT
อัลคาไลน์ฟอสฟาพัฒนาสีชุดที่ได้รับจากGibco ไลฟ์เทคโนโลยีส์ (แกรนด์ไอส์แลนด์,
สหรัฐอเมริกา) ออกซิเจนชุดทดสอบชนิดปฏิกิริยา GSH
และภาคตะวันออกเฉียงเหนือชุดทดสอบที่ได้รับfromthe Beyotime สถาบันเทคโนโลยีชีวภาพ
(เซี่ยงไฮ้ประเทศจีน) ทั้งหมดน้ำยาอื่น ๆ ของเกรดวิเคราะห์.
เซลล์วัฒนธรรมเซลล์ MurineMC3T3-E1 ที่ซื้อมาจากห้องปฏิบัติการศูนย์วิศวกรรมเนื้อเยื่อวิทยาลัยStomatology สี่ทหารแพทย์มหาวิทยาลัยซีอาน, จีน [29,30] cellswere เลี้ยงในα-MEMusing 10% FBS ความร้อนใช้งานและ 100 U / ml ยาปฏิชีวนะและ 100 มก. / มล. streptomycin ในสภาพของ CO2 5% และ 37 องศาเซลเซียส H2O2 ทำหน้าที่เป็นภายนอกรักษาROS ในขณะที่ N-acetyl-L-cysteine (NAC) ทำหน้าที่เป็น ROS ทำความสะอาด เมื่อเซลล์ถึงจุดบรรจบกลางซีรั่มฟรีที่มี Rb2 ถูกละลายในน้ำกลั่นและการเพาะเลี้ยงเป็นเวลา 24 ชั่วโมงก่อนที่การบริหารงานของ0.3 มิลลิ H2O2 24 ชั่วโมง สำหรับการทดสอบแต่ละบริหาร Rb2 อย่างต่อเนื่องหลังจากการปรับสภาพ ทั้งหมดของการทดลองได้ดำเนินการในหลุมที่ซ้ำกันและซ้ำสามครั้ง. ตรวจของการอยู่รอดของเซลล์สำหรับการทดสอบนี้หมาเซลล์ MC3T3-E1 เป็นยาที่ใช้สอดคล้องแตกต่างกันของRb2 (0 ไมครอน 0.1 ไมครอน 1 ไมครอนและ 10 ไมครอน) สำหรับ24 ชั่วโมงและ 72 ชั่วโมงในการทดสอบความเป็นพิษของ Rb2 ต่อจากนั้นเซลล์ถูกบ่มโดยใช้ซีรั่มฟรีอาหารเลี้ยงปกติซึ่งมีRb2 (0 ไมครอน 0.1 ไมครอน 1 ไมครอนและ 10 ไมครอน) เป็นเวลา 24 ชั่วโมงตามด้วยการบริหาร300 μMH2O2เวลา 24 ชั่วโมง ตรวจ TheMTT ถูกนำมาใช้ formeasuring เซลล์มีชีวิตอยู่รอด absorbances ทั้งหมดของหลุมที่ถูกบันทึกไว้โดยใช้เครื่องอ่านแผ่นไมโครที่ความยาวคลื่น492 นาโนเมตร ความอยู่รอดของเซลล์ควบคุมกลุ่ม whichwas ไม่ได้สัมผัสกับ eitherH2O2 หรือ Rb2, wasdefined 100%. ฟอสฟาอัลคาไลน์ (ALP) การย้อมสีและการวิเคราะห์กิจกรรมหลังจาก6 วันเหนี่ยวนำ osteogenic ที่ murineMC3T3-E1 cellswere บ่มโดยใช้สื่อในซีรั่มฟรี ซึ่งประกอบด้วย Rb2 และ / หรือ H2O2 2 วัน เซลล์มีการย้อมโดยใช้ BCIP / NBT อัลคาไลน์ฟอสฟาชุดพัฒนาสีตามคำแนะนำของthemanufacturer. เพื่อประเมินกิจกรรม ALP ที่ monolayer เซลล์ถูก lysed โดยใช้เซลล์บัฟเฟอร์สลาย ต่อมา lysate ถูกหมุนเหวี่ยงที่ 10,000 กรัมสำหรับ5 นาที สารละลายที่ชัดเจนถูกนำมาใช้ในการวัดกิจกรรมภูเขาที่ซึ่งถูกกำหนดจ้างกิจกรรม ALP ชุดทดสอบ รวมสอดคล้องโปรตีนได้รับการพิจารณาโดยใช้โปรตีนแบรดฟอวิธีการทดสอบ กิจกรรม ALP ได้ปกติโปรตีนรวมซึ่งวัดโดยใช้วิธีการทดสอบโปรตีนBradford
การแปล กรุณารอสักครู่..
วัสดุและวิธีการ
rb2 วัสดุที่สกัดจากโสม ( น้ำหนักโมเลกุล 991 , ความบริสุทธิ์ ,
; n98.0 เปอร์เซ็นต์ละลายในน้ำกลั่น ) ซื้อมาจากเซี่ยงไฮ้
เหมือนกันเทคโนโลยีชีวภาพ Co . , Ltd ( จีน ) วัฒนธรรมอาหารจานถูก
ได้รับ fromnunc ( เดนมาร์ก ) กิจกรรมการทดสอบ kitwas ALP ได้
จาก genmed วิทยาศาสตร์ Inc . ( USA ) วิธีสร้างชุดทดสอบสาร
ได้จาก R & D ระบบอิงค์( Minneapolis , MN , USA )
ชุดอาร์เอ็นเอทั้งหมดได้จากโอเมก้า นายกรัฐมนตรีสคริปต์การกระทำและใช้ RT ชุด
SYBR อดีตได้ดี ได้จาก Takara เทคโนโลยีชีวภาพ
( Dalian , จีน ) ที่ซึ่งไพรเมอร์สังเคราะห์โดย
เทคโนโลยีชีวภาพทาคาระ . bcip / NBT ชุดพัฒนา
สี alkaline phosphatase ได้จากไลฟ์ เทคโนโลยี gibco (
สหรัฐอเมริกาเกาะใหญ่ ) ส่วนชนิดออกซิเจนปฏิกิริยาต่อชุดและในชุด ( 10
ที่ได้รับจาก beyotime สถาบันเทคโนโลยีชีวภาพ ( Shanghai
จีน ) สารเคมีอื่น ๆทั้งหมดของอิตเทอร์เบียม .
murinemc3t3-e1 เซลล์เซลล์วัฒนธรรมถูกซื้อจากห้องปฏิบัติการศูนย์
สำหรับวิศวกรรมเนื้อเยื่อ , วิทยาลัย stomatology 4 ทหารแพทย์
มหาวิทยาลัยซีอาน , จีน [ ตกแต่งอย่างดี ] การเพาะเลี้ยงในระดับแอลฟา memusing
ความร้อนซึ่ง 10% FBS และ 100 U / ml เพนนิซิลินและ 100 มก. / มล. เหมือนเคย
ในภาวะคาร์บอนไดออกไซด์ 5% และ 37 องศา ทำหน้าที่รักษาแบตเตอรี่ภายนอก
ผลตอบแทน ส่วน n-acetyl-l-cysteine ( แนค ) แสดงเป็น รอส
สะอาด เมื่อเซลล์ถึงบรรจบ , serum-free ขนาดกลาง
ที่มี rb2 ละลายในน้ำกลั่นและเลี้ยงเป็นเวลา 24 ชั่วโมงก่อน
( 0.3 มม. H2O2 เป็นเวลา 24 ชั่วโมงสำหรับแต่ละการทดลอง
rb2 การบริหารอย่างต่อเนื่องหลังการ . ทั้งหมดของการทดลอง
จำนวนบ่อซ้ำและซ้ำ 3 ครั้ง ของ เซลล์ รอด
) สำหรับการทดลองนี้ mc3t3-e1 เซลล์ ~ ศึกษา
ใช้ความสอดคล้องแตกต่างกันของ rb2 ( 0 μ M , 0.1 μ M 1 μเมตร และ 10 μ m )
24 ชั่วโมงและ 72 ชั่วโมงเพื่อทดสอบ ความเป็นพิษของ rb2 . ต่อมาเซลล์ที่ถูกบ่ม
ใช้ serum-free ปกติสื่อวัฒนธรรม ซึ่งมีอยู่
rb2 ( 0 μ M , 0.1 μ M 1 μเมตร และ 10 μ ) 24 ชั่วโมง ตามด้วยการบริหาร
300 μ mh2o2 เป็นเวลา 24 ชั่วโมง themtt ) ถูกใช้ formeasuring รอดคุก
การ absorbances ทั้งหมดของเวลส์ที่ถูกบันทึกไว้โดยใช้
อ่านแผ่นไมโครที่ 492 nm ความยาวคลื่น เซลล์การอยู่รอดของกลุ่มควบคุม
,ซึ่งไม่เปิดเผย eitherh2o2 หรือ rb2 wasdefined , เป็น 100%
อัลคาไลน์ ฟอสฟาเตส ( ALP ) staining และกิจกรรมการทดสอบ
หลังจากที่ 6 วัน osteogenic อุปนัย , murinemc3t3-e1
บ่มใช้ serum-free ระดับกลาง ซึ่งมี rb2 และ / หรือ H2O2
2 วัน เซลล์ที่ถูกย้อมด้วย bcip / NBT ชุดพัฒนาสีด่าง phosphatase
ตามคําแนะนําของผู้ผลิตของเพื่อประเมินแอลป์กิจกรรมเซลล์อย่างมี lysed โดยใช้เซลล์
การสลายบัฟเฟอร์ โดย lysate คือระดับที่ 10 , 000 g
5 นาทีนำใสใช้วัดแอลป์กิจกรรม
ซึ่งตั้งใจใช้กิจกรรม ALP ( ชุด มีความสอดคล้องโปรตีนรวม
ตัดสินใจใช้แบรดฟอร์ดโปรตีน
3 วิธีกิจกรรมกับ alp ปกติโปรตีนทั้งหมด ซึ่ง
วัดใช้แบรดฟอร์ดโปรตีนโดยวิธี
rb2 วัสดุที่สกัดจากโสม ( น้ำหนักโมเลกุล 991 , ความบริสุทธิ์ ,
; n98.0 เปอร์เซ็นต์ละลายในน้ำกลั่น ) ซื้อมาจากเซี่ยงไฮ้
เหมือนกันเทคโนโลยีชีวภาพ Co . , Ltd ( จีน ) วัฒนธรรมอาหารจานถูก
ได้รับ fromnunc ( เดนมาร์ก ) กิจกรรมการทดสอบ kitwas ALP ได้
จาก genmed วิทยาศาสตร์ Inc . ( USA ) วิธีสร้างชุดทดสอบสาร
ได้จาก R & D ระบบอิงค์( Minneapolis , MN , USA )
ชุดอาร์เอ็นเอทั้งหมดได้จากโอเมก้า นายกรัฐมนตรีสคริปต์การกระทำและใช้ RT ชุด
SYBR อดีตได้ดี ได้จาก Takara เทคโนโลยีชีวภาพ
( Dalian , จีน ) ที่ซึ่งไพรเมอร์สังเคราะห์โดย
เทคโนโลยีชีวภาพทาคาระ . bcip / NBT ชุดพัฒนา
สี alkaline phosphatase ได้จากไลฟ์ เทคโนโลยี gibco (
สหรัฐอเมริกาเกาะใหญ่ ) ส่วนชนิดออกซิเจนปฏิกิริยาต่อชุดและในชุด ( 10
ที่ได้รับจาก beyotime สถาบันเทคโนโลยีชีวภาพ ( Shanghai
จีน ) สารเคมีอื่น ๆทั้งหมดของอิตเทอร์เบียม .
murinemc3t3-e1 เซลล์เซลล์วัฒนธรรมถูกซื้อจากห้องปฏิบัติการศูนย์
สำหรับวิศวกรรมเนื้อเยื่อ , วิทยาลัย stomatology 4 ทหารแพทย์
มหาวิทยาลัยซีอาน , จีน [ ตกแต่งอย่างดี ] การเพาะเลี้ยงในระดับแอลฟา memusing
ความร้อนซึ่ง 10% FBS และ 100 U / ml เพนนิซิลินและ 100 มก. / มล. เหมือนเคย
ในภาวะคาร์บอนไดออกไซด์ 5% และ 37 องศา ทำหน้าที่รักษาแบตเตอรี่ภายนอก
ผลตอบแทน ส่วน n-acetyl-l-cysteine ( แนค ) แสดงเป็น รอส
สะอาด เมื่อเซลล์ถึงบรรจบ , serum-free ขนาดกลาง
ที่มี rb2 ละลายในน้ำกลั่นและเลี้ยงเป็นเวลา 24 ชั่วโมงก่อน
( 0.3 มม. H2O2 เป็นเวลา 24 ชั่วโมงสำหรับแต่ละการทดลอง
rb2 การบริหารอย่างต่อเนื่องหลังการ . ทั้งหมดของการทดลอง
จำนวนบ่อซ้ำและซ้ำ 3 ครั้ง ของ เซลล์ รอด
) สำหรับการทดลองนี้ mc3t3-e1 เซลล์ ~ ศึกษา
ใช้ความสอดคล้องแตกต่างกันของ rb2 ( 0 μ M , 0.1 μ M 1 μเมตร และ 10 μ m )
24 ชั่วโมงและ 72 ชั่วโมงเพื่อทดสอบ ความเป็นพิษของ rb2 . ต่อมาเซลล์ที่ถูกบ่ม
ใช้ serum-free ปกติสื่อวัฒนธรรม ซึ่งมีอยู่
rb2 ( 0 μ M , 0.1 μ M 1 μเมตร และ 10 μ ) 24 ชั่วโมง ตามด้วยการบริหาร
300 μ mh2o2 เป็นเวลา 24 ชั่วโมง themtt ) ถูกใช้ formeasuring รอดคุก
การ absorbances ทั้งหมดของเวลส์ที่ถูกบันทึกไว้โดยใช้
อ่านแผ่นไมโครที่ 492 nm ความยาวคลื่น เซลล์การอยู่รอดของกลุ่มควบคุม
,ซึ่งไม่เปิดเผย eitherh2o2 หรือ rb2 wasdefined , เป็น 100%
อัลคาไลน์ ฟอสฟาเตส ( ALP ) staining และกิจกรรมการทดสอบ
หลังจากที่ 6 วัน osteogenic อุปนัย , murinemc3t3-e1
บ่มใช้ serum-free ระดับกลาง ซึ่งมี rb2 และ / หรือ H2O2
2 วัน เซลล์ที่ถูกย้อมด้วย bcip / NBT ชุดพัฒนาสีด่าง phosphatase
ตามคําแนะนําของผู้ผลิตของเพื่อประเมินแอลป์กิจกรรมเซลล์อย่างมี lysed โดยใช้เซลล์
การสลายบัฟเฟอร์ โดย lysate คือระดับที่ 10 , 000 g
5 นาทีนำใสใช้วัดแอลป์กิจกรรม
ซึ่งตั้งใจใช้กิจกรรม ALP ( ชุด มีความสอดคล้องโปรตีนรวม
ตัดสินใจใช้แบรดฟอร์ดโปรตีน
3 วิธีกิจกรรมกับ alp ปกติโปรตีนทั้งหมด ซึ่ง
วัดใช้แบรดฟอร์ดโปรตีนโดยวิธี
การแปล กรุณารอสักครู่..
ภาษาอื่น ๆ
การสนับสนุนเครื่องมือแปลภาษา: กรีก, กันนาดา, กาลิเชียน, คลิงออน, คอร์สิกา, คาซัค, คาตาลัน, คินยารวันดา, คีร์กิซ, คุชราต, จอร์เจีย, จีน, จีนดั้งเดิม, ชวา, ชิเชวา, ซามัว, ซีบัวโน, ซุนดา, ซูลู, ญี่ปุ่น, ดัตช์, ตรวจหาภาษา, ตุรกี, ทมิฬ, ทาจิก, ทาทาร์, นอร์เวย์, บอสเนีย, บัลแกเรีย, บาสก์, ปัญจาป, ฝรั่งเศส, พาชตู, ฟริเชียน, ฟินแลนด์, ฟิลิปปินส์, ภาษาอินโดนีเซี, มองโกเลีย, มัลทีส, มาซีโดเนีย, มาราฐี, มาลากาซี, มาลายาลัม, มาเลย์, ม้ง, ยิดดิช, ยูเครน, รัสเซีย, ละติน, ลักเซมเบิร์ก, ลัตเวีย, ลาว, ลิทัวเนีย, สวาฮิลี, สวีเดน, สิงหล, สินธี, สเปน, สโลวัก, สโลวีเนีย, อังกฤษ, อัมฮาริก, อาร์เซอร์ไบจัน, อาร์เมเนีย, อาหรับ, อิกโบ, อิตาลี, อุยกูร์, อุสเบกิสถาน, อูรดู, ฮังการี, ฮัวซา, ฮาวาย, ฮินดี, ฮีบรู, เกลิกสกอต, เกาหลี, เขมร, เคิร์ด, เช็ก, เซอร์เบียน, เซโซโท, เดนมาร์ก, เตลูกู, เติร์กเมน, เนปาล, เบงกอล, เบลารุส, เปอร์เซีย, เมารี, เมียนมา (พม่า), เยอรมัน, เวลส์, เวียดนาม, เอสเปอแรนโต, เอสโทเนีย, เฮติครีโอล, แอฟริกา, แอลเบเนีย, โคซา, โครเอเชีย, โชนา, โซมาลี, โปรตุเกส, โปแลนด์, โยรูบา, โรมาเนีย, โอเดีย (โอริยา), ไทย, ไอซ์แลนด์, ไอร์แลนด์, การแปลภาษา.
- Number of brands purchased in a particul
- มันทำให้คุณรู้สึกโรเเมนติค
- เลือกจำนวนที่นั่ง
- All this is said green event needs to re
- lease out a portion of WP’s vineyard and
- ชื่อจริง หนึ่ง ธนวัต
- ขอโทษที่เสียงดัง
- ฉันชอบคุณจริงๆนะ
- Before we can do the swim, we need a cer
- It contains molasses, cotton seed, peanu
- identified himself only as
- i just testing baby just now
- No haha
- ฉันไม่เข้าใจเหมือนกันว่าทำไมยังคุยกับคุย
- where XX is the beginning-of-month marke
- ความรักก็เหมือนกัน
- เพื่อ
- ขอโทษคะ ลืมบอกในเรื่องของ การจัดโซนห้องอ
- 这件旗袍 漂亮极了
- with seven Indo-Pacific species
- Applications of 40 and 56 Wcm−2 caused a
- Income tax expense the following three e
- คุยกับคุยสบายใจ
- Water quality in juvenile and smolt rear
