described
by Xie et al. (2007). The powdered sample
was homogenized in 10 mL of extraction buffer [0.1
mol L-1 KCl, 0.5 mol L-1 Tris-base at pH 7.5, 0.05
mol L-1 ethylene diamine tetraacetic acid (EDTA), and
2% β-mercaptoethanol (β-ME)] for 10 min. The mixture
was shaken on ice for 2 h and centrifuged at
12 000 × g for 15 min at 4°C. The supernatant was then
transferred to a new tube and an equal volume of water
saturated chloroform and isoamyl alcohol (24/1, v/v)
was added. The tube was gently shaken on ice for 30
min, then stored on ice for 10 min before centrifugation
at 10 000 × g, for 10 min at 4°C. The upper and
bottom phases were removed. Then 4 mL of water
was added to the interphase together with an equal volume
of water-saturated chloroform and isoamyl alcohol
(24/1, v/v); the mixture was homogenized, incubated
on ice for 10 min, and then centrifuged at 10 000 ×g
for 10 min at 4°C. The treatment was repeated twice.
The interphase was washed with ice-cold acetone 3
times. The final pellets were vacuum-dried and stored
at -80°C.
อธิบายโดย Xie et al. (2007) ตัวอย่างผงแก้ไข homogenized 10 ml ของบัฟเฟอร์สกัด [0.1mol L-1 KCl, 0.5 mol L-1 ทริ-ฐานที่ pH 7.5, 0.05mol L-1 เอทิลี diamine tetraacetic กรด (EDTA), และ2% β-mercaptoethanol (β-ME)] 10 นาที ส่วนผสมเขย่าน้ำแข็งสำหรับ 2h และผลิตภัณฑ์ที่12 000 × g 15 นาทีที่ 4 องศาเซลเซียส Supernatant แก้ไขแล้วโอนไปหลอดใหม่และปริมาณน้ำเท่ากับอิ่มตัวคลอโรฟอร์มและ isoamyl แอลกอฮอล์ (24/1, v/v)ถูก ค่อย ๆ เขย่าหลอดน้ำแข็ง 30นาที แล้ว เก็บไว้ในน้ำแข็ง 10 นาทีก่อนหมุนเหวี่ยงที่ g × 10 000, 10 นาทีที่ 4 องศาเซลเซียส ด้านบน และระยะล่างถูกเอาออก แล้ว 4 mL ของน้ำถูกรูปพร้อมกับปริมาณเท่ากับน้ำอิ่มตัวคลอโรฟอร์มและ isoamyl แอลกอฮอล์(24/1, v/v); ส่วนผสมถูก homogenized ได้รับการกกน้ำแข็ง 10 นาที และจากนั้น ที่ 10 000 × g10 นาทีที่ 4 องศาเซลเซียส การรักษาซ้ำสองครั้งรูปที่ถูกล้าง ด้วยอะซิโตนฉ่ำ 3ครั้ง เครื่องดูดฝุ่นแห้ง และเก็บเม็ดสุดท้ายที่-80 องศาเซลเซียส
การแปล กรุณารอสักครู่..