MATERIALS AND METHODSIsolation of b

MATERIALS AND METHODS
Isolation of bacteriophage from environmental samples. Samples of poultry
excreta and effluent were taken from 26 farms, poultry-processing plants, and
wastewater treatment plants in southern England during 2004 and 2005. These
environmental samples were diluted 1:9 (wt/vol) in nutrient broth (NB, CM0001;
Oxoid, Basingstoke, United Kingdom) before the addition of 8.0 log10 CFU of
each of three Salmonella Nalr host strains (S. enterica serotypes Enteritidis
P125109, Hadar 18, and Typhimurium 4/74) and incubation at 37°C for 24 h.
Following enrichment, a 1-ml sample of each culture was subjected to centrifugation
at 13,000  g for 5 min. The supernatant was then filtered through a
0.45-m-pore-size membrane (16533K; Sartorius, Go¨ttingen, Germany) before
20-l volumes of filtrate were spotted onto the surfaces of Salmonella lawns
prepared by a modification of the method described by Sambrook and colleagues
(22). Briefly, this consisted of adding 0.1 ml of an 8.0-log10-CFU-ml 1 suspension
of Salmonella in maximum-recovery diluent (MRD, CM0733; Oxoid) to 5 ml
of molten overlay agar (NB containing 0.5% [wt/vol] bacteriological agar LP0011
[Oxoid]), gently shaking the mixture, and adding it to prewarmed (37°C, 30 min)
nutrient agar (CM0003; Oxoid) plates containing 25 g ml sodium nalidixate1
(N4382; Sigma, Dorset, United Kingdom) and 1 g ml novobiocin1 (N1268;
Sigma). The plates were incubated at 37°C for 24 h before examination for
plaques. Individual plaques were extracted from the overlay agar with a pipette
and suspended in 100 l of SM buffer (50 mM Tris-Cl [pH 7.5], 0.1 M NaCl, 8
mM MgSO4
7H2O, 0.01% gelatin, reagents from Sigma). This suspension was
incubated for 15 min at 37°C with 100 l of an 8.0-log10 suspension of Salmonella
before addition to 5 ml of molten overlay agar and pouring onto a nutrient agar
plate. These plates were incubated as described above and examined for plaques
after 24 h. Single plaques were propagated in this way a total of three times to
ensure that the isolates represented a single clone.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

วัสดุและวิธีการแยกของแบคทีจากตัวอย่างสิ่งแวดล้อม ตัวอย่างของสัตว์ปีกexcreta และน้ำที่ได้มาจากฟาร์มที่ 26 โรงงานแปรรูปสัตว์ปีก และโรงบำบัดน้ำเสียในประเทศอังกฤษในระหว่างปี 2004 และ 2005 เหล่านี้ตัวอย่างสิ่งแวดล้อมได้แตกออก 1:9 (wt/vol) ในธาตุอาหารซุป (NB, CM0001Oxoid, Basingstoke สหราชอาณาจักร) ก่อนแห่ง 8.0 log10 CFU ของแต่ละสายพันธุ์โฮสต์ Nalr ระดับสามที่ (S. enterica serotypes EnteritidisP125109, Hadar 18 และ Typhimurium 4/74) และบ่มที่ 37 ° C ใน 24 ชมต่อเติมเต็ม ตัวอย่าง 1 ml ของแต่ละวัฒนธรรมถูกยัดเยียดให้ centrifugationที่ g 13000 ใน 5 นาที แล้วถูกกรอง supernatant ที่ผ่านการเมมเบรน 0.45 m-รูขุมขนขนาด (16533K บริษัทซาร์โทเรียส Go¨ttingen เยอรมนี) ก่อน20 l ปริมาณสารกรองได้ด่างบนพื้นผิวของสนามหญ้าสายโดยการปรับเปลี่ยนวิธีการอธิบาย โดย Sambrook และเพื่อนร่วมงาน(22) กันสั้น ๆ นี้ประกอบด้วยการเพิ่ม 0.1 ml ของระงับการ 8.0-log10-CFU-ml 1ของสายในการกู้คืนสูงสุด diluent (MRD, CM0733 Oxoid) ไป 5 mlของโอเวอร์เลย์หลอมละลาย agar (NB ที่ประกอบด้วย 0.5% [wt/vol] bacteriological agar LP0011[Oxoid]), เขย่าส่วนผสม และเพิ่มให้ prewarmed (37 ° C, 30 นาที)ธาตุอาหาร agar (CM0003 ประกอบด้วย nalidixate โซเดียม ml 25 กรัม 1 แผ่น Oxoid)(N4382 ซิกมา ดอร์เซ็ท สหราชอาณาจักร) และ 1 g ml novobiocin 1 (N1268ซิกมา) แผ่นก็ incubated ที่ 37° C ใน 24 ชมก่อนตรวจสำหรับplaques Plaques ละถูกสกัดจาก agar ซ้อนทับกับเปตต์เป็นและระงับใน 100 l SM บัฟเฟอร์ (50 mM ตรี-Cl [pH 7.5], 0.1 M NaCl, 8มม. MgSO4 7H2O, 0.01% ตุ๋น reagents จากซิก) มีระบบกันสะเทือนนี้incubated สำหรับ 15 นาทีที่ 37° C กับ l ที่ 100 ของการระงับ 8.0 log10 ของสายก่อนนี้ 5 ml ของ agar ซ้อนทับหลอมละลายเทลงใน agar ธาตุอาหารจาน Incubated ตามที่อธิบายไว้ข้างต้น และตรวจสอบสำหรับ plaques แผ่นเหล่านี้หลังจาก 24 h. plaques เดียวถูกเผยแพร่ในลักษณะนี้ทั้งหมด 3 ครั้งให้แน่ใจว่า จะแยกแสดงโคลนเดียว

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

วัสดุและวิธีการแยกเชื้อจากตัวอย่างด้านสิ่งแวดล้อม
ตัวอย่างของสัตว์ปีกอุจจาระและน้ำทิ้งถูกนำมาจาก 26 ฟาร์มสัตว์ปีกโรงงานแปรรูปและโรงบำบัดน้ำเสียในภาคใต้ของประเทศอังกฤษในช่วงปี2004 และปี 2005 เหล่านี้ตัวอย่างจากสิ่งแวดล้อมถูกเจือจาง1: 9 (น้ำหนัก / ปริมาตร) ในน้ำซุปสารอาหาร (NB, CM0001; Oxoid เบซิง, สหราชอาณาจักร) ก่อนที่การเพิ่มขึ้นของ 8.0 log10 CFU ของแต่ละสามสายพันธุ์เชื้อSalmonella Nalr โฮสต์ (เอสสายพันธุ์ enterica Enteritidis P125109, ดาร์ 18 และ Typhimurium 4/74) และการบ่มที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 24 ชม. ต่อไปนี้ ตกแต่งตัวอย่าง 1 มิลลิลิตรของแต่ละวัฒนธรรมก็จะถูกหมุนเหวี่ยงที่13,000? กรัมเป็นเวลา 5 นาที สารละลายถูกกรองแล้วผ่าน0.45- เยื่อมรูขุมขนขนาด (16533K; ซาร์โทเรีย, Göttingenเยอรมนี) ก่อนที่? 20 ลิตรปริมาณการกรองเป็นด่างลงบนพื้นผิวของสนามหญ้าเชื้อ Salmonella จัดทำขึ้นโดยการปรับเปลี่ยนวิธีการ อธิบายโดย Sambrook และเพื่อนร่วมงาน(22) สั้น ๆ นี้ประกอบไปด้วยการเพิ่ม 0.1 มล. ของ 8.0 log10-CFU-มล. 1 ระงับ? ของเชื้อ Salmonella ในเจือจางสูงสุดการกู้คืน (MRD, CM0733; Oxoid) ถึง 5 มล. ของวุ้นซ้อนทับหลอมเหลว (NB ที่มี 0.5% [น้ำหนัก / ปริมาตร ] แบคทีเรียวุ้น LP0011 [Oxoid]) เบา ๆ เขย่าส่วนผสมและเพิ่มไป prewarmed (37 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 30 นาที) อาหารเลี้ยงเชื้อ (CM0003; Oxoid) แผ่นที่มี 25 กรัมต่อมิลลิลิตร nalidixate โซเดียม 1? (N4382; ซิกอร์เซ็ท สหราชอาณาจักร) และ 1 กรัมต่อมิลลิลิตร Novobiocin 1 (N1268;? ซิกม่า) แผ่นถูกบ่มที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 24 ชั่วโมงก่อนที่จะตรวจสอบสำหรับโล่ โล่บุคคลที่ถูกสกัดจากวุ้นซ้อนทับกับปิเปตและระงับใน 100 ลิตรบัฟเฟอร์เอสเอ็ม (50 มิลลิ Tris-Cl [พีเอช 7.5] 0.1 M NaCl, 8 มิลลิ MgSO4? 7H2O เจลาติน 0.01%, น้ำยาจากซิกม่า) ระงับการนี้ได้รับการบ่มเป็นเวลา 15 นาทีที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสกับ 100 ลิตรการระงับ 8.0 log10 ของเชื้อ Salmonella ก่อนนอกจาก 5 มิลลิลิตรวุ้นซ้อนทับหลอมเหลวและเทลงบนอาหารเลี้ยงเชื้อแผ่น นำไปบ่มที่อธิบายข้างต้นและตรวจสอบสำหรับโล่หลังจาก 24 ชั่วโมง โล่เดี่ยวถูกแพร่กระจายในลักษณะนี้ทั้งหมดสามครั้งเพื่อให้แน่ใจว่าสายพันธุ์ที่เป็นตัวแทนโคลนเดียว

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

วัสดุและวิธีการ Bacteriophage
แยกจากตัวอย่างสิ่งแวดล้อม ตัวอย่างของไก่และสัตว์ปีก
น้ำทิ้งเก็บตัว 26 ฟาร์ม ไก่แปรรูป พืชและ
บำบัดน้ำเสียในภาคใต้ของประเทศอังกฤษในช่วงปี 2004 และ 2005 ตัวอย่างสิ่งแวดล้อมเหล่านี้
ถูกเจือจาง 1 : 9 ( น้ำหนัก / ปริมาตร ) ในน้ำซุปสารอาหาร ( NB cm0001 oxoid ;
, , Basingstoke , สหราชอาณาจักร ) ก่อนเพิ่ม 80
LN CFU ของแต่ละสามเชื้อ Salmonella nalr เจ้าภาพสายพันธุ์ ( s (
p125109 enterica enteritidis 18 ดาร์นา , และ 4 / 74 ) และบ่มที่ 37 ° C เป็นเวลา 24 ชั่วโมง
ต่อไปนี้เสริม , 1-ml ตัวอย่างของแต่ละวัฒนธรรมก็ต้องปั่น
ที่ 13 , 000  G สำหรับ 5 นาทีแล้วนำคือ กรองผ่าน
0.45 -  m-pore-size เมมเบรน ( 16533k ; Sartorius ไปตั้ง ttingen , เยอรมนี ) ก่อน
20 -  L ปริมาณสารเป็นด่างบนพื้นผิวของเชื้อซัลโมเนลลาที่สนามหญ้า
ที่เตรียมโดยการปรับเปลี่ยนวิธีการอธิบายโดย sambrook และเพื่อนร่วมงาน
( 22 ) สั้น ๆ นี้ ได้แก่ การเพิ่ม 0.1 มิลลิลิตรของ 8.0-log10-cfu-ml 
1 ระงับเชื้อ ในการกู้คืนสูงสุด ( MRD cm0733 เจือจาง , ; oxoid ) 5 ml
ของหล่อทับ ( NB ที่มี 0.5% โดยน้ำหนัก / VOL [ ] แบคทีเรียวุ้น lp0011
[ oxoid ] )เขย่าเบา ๆผสมและการเพิ่มการ prewarmed ( 37 องศา C 30 นาที )
NUMB3RS ( cm0003 ; oxoid ) แผ่นบรรจุ 25  กรัมมิลลิลิตรโซเดียม nalidixate  1
( n4382 ; Sigma , Dorset , สหราชอาณาจักร ) และ 1  กรัมต่อมิลลิลิตรโนโวไบโอซิน  1 ( n1268 ;
Sigma ) จานถูกบ่มที่ 37 ° C เป็นเวลา 24 ชั่วโมง ก่อนการสอบ
โล่ . โล่ส่วนบุคคลถูกสกัดจากวุ้นกับปิเปต
ซ้อนทับอยู่ใน 100  L SM บัฟเฟอร์ ( 50 มม. โดย CL [ pH 7.5 ] 0.1 M NaCl , 8
อืม MgSO4 ใ
7h2o 0.01 % เจลาติน , สารเคมีจาก Sigma ) ช่วงล่างนี้
) สำหรับ 15 นาทีที่ 37 ° C 100  L ของ 8.0-log10 ระงับเชื้อ ก่อนที่ทั้ง 5 ml
หล่อทับราดลงบนจานวุ้น และวุ้น
สารอาหาร แผ่นเหล่านี้ถูกบ่มตามที่อธิบายไว้ข้างต้นและตรวจสอบโล่
หลังจาก 24 ชั่วโมงเดียวโล่มีจำนวนวิธีนี้ทั้งหมดสามครั้งเพื่อให้แน่ใจว่าเชื้อแทน
โคลนเดียว