2. Materials and methods2.1. Reagen

2. Materials and methods
2.1. Reagents and antibodies
QUER was purchased from Biospectrum, QU-CAP and caprilic/capric triglycerides (CAP) were obtained from BASF and dimethyl-sulfoxide (DMSO) was obtained from Sigma. LLVY-AMC, MG132, as well as primary proteasomal antibodies against α7 (PW8110; 30 kDa) and β5 (PW8895; 23 kDa) subunits were purchased from BIOMOL. Primary antibodies against GAPDH (sc25778; 37 kDa) and secondary antibodies were purchased from Santa Cruz Biotechnology. Primary antibody against tyrosinase (#MS-800-P0, 70–80 kDa) was obtained from Thermo Scientific.
2.2. Cell lines and culture conditions
HFL-1 human embryonic fibroblasts (obtained by the European Collection of Cell Cultures) and mouse melanocytes (B16F10 cell line) were maintained in Dulbecco's modified Eagle's medium (DMEΜ; Invitrogen) supplemented with 10% foetal bovine serum (v/v; Invitrogen), 2 mM glutamine, and 1% non-essential amino-acids. Cells were subcultured at 37 °C, 5% CO2 and 95% humidity, were fed approximately 16 h prior to each assay and cell number was determined in duplicates using a Coulter Z2 counter (Beckman Coulter). HFL-1 cells were subcultured when they reached confluence at a split ratio of 1:2 until they entered to senescence.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2. วัสดุและวิธีการ
2.1 Reagents และแอนตี้
QUER ที่ซื้อจาก Biospectrum ฝาโต๊ะ และระดับไตรกลีเซอไรด์ caprilic/capric (CAP) ได้รับจาก BASF และ dimethyl sulfoxide (DMSO) ได้รับจากซิก LLVY AMC, MG132 รวมทั้งแอนตี้หลัก proteasomal กับ α7 (PW8110; 30 kDa) และ β5 (PW8895; 23 kDa) subunits ซื้อจาก BIOMOL แอนตี้หลักกับ GAPDH (sc25778; 37 kDa) และรองแอนตี้ถูกซื้อจากซานตาครูซเทคโนโลยีชีวภาพ แอนติบอดีหลักกับ tyrosinase (#MS-800-P0, 70 – 80 kDa) ได้รับจากเทอร์โมวิทยาศาสตร์.
2.2 เซลล์บรรทัด และวัฒนธรรมเงื่อนไข
HFL-1 มนุษย์ตัวอ่อน fibroblasts (รับคอลเลกชันยุโรปของเซลล์วัฒนธรรม) และเมาส์ melanocytes (B16F10 เซลล์รายการ) ถูกรักษาในของดุลเบกโกแก้ไขอีเกิลของสื่อ (DMEΜ Invitrogen) เสริม ด้วย 10% foetal วัวซีรั่ม (v/v Invitrogen), glutamine 2 mM และ 1% ไม่จำเป็นอะมิโนกรด เซลล์ถูก subcultured ที่ 37 ° C, 5% CO2 และความชื้น 95% ที่เลี้ยงประมาณ 16 h ก่อนกำหนดให้แต่ละหมายเลขวิเคราะห์และเซลล์ในซ้ำโดยใช้ตัวนับ Coulter Z2 (Beckman Coulter) HFL-1 เซลล์ได้ subcultured เข้าถึงบรรจบที่แยกอัตราส่วน 1:2 จนกว่าจะป้อน senescence

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2 วัสดุและวิธีการ
2.1 รีเอเจนต์และแอนติบอดี
QUER ซื้อจาก BioSpectrum, QU-CAP และ caprilic / Capric ไตรกลีเซอไรด์ (CAP) ที่ได้รับจาก บริษัท BASF และ dimethyl-sulfoxide (DMSO) ที่ได้รับจากซิกม่า LLVY-AMC, MG132 เช่นเดียวกับแอนติบอดี้ proteasomal หลักกับα7 (PW8110 30 กิโลดาลตัน) และβ5 (PW8895 23 กิโลดาลตัน) หน่วยย่อยที่ซื้อมาจาก BIOMOL แอนติบอดีหลักกับ GAPDH (sc25778; 37 กิโลดาลตัน) และแอนติบอดีที่สองที่ซื้อมาจากซานตาครูซเทคโนโลยีชีวภาพ แอนติบอดีหลักกับไทโรซิเน (# MS-800-P0, 70-80 กิโลดาลตัน) ที่ได้รับจากเทอร์โมวิทยาศาสตร์
2.2 เซลล์และเงื่อนไขวัฒนธรรม
HFL-1 รบราตัวอ่อนของมนุษย์ (ที่ได้จากการเก็บของยุโรปในเซลล์เพาะเลี้ยง) และ melanocytes เมาส์ (เซลล์ B16F10) ได้รับการเก็บรักษาไว้ใน Dulbecco ของการปรับเปลี่ยนของนกอินทรีกลาง (DMEΜ; Invitrogen) เสริมด้วย 10% ซีรั่มวัวของทารกในครรภ์ (วี / V; Invitrogen) 2 มิลลิ glutamine และ 1% ที่ไม่จำเป็นกรดอะมิโน เซลล์ที่ถูกเชื้อที่ 37 ° C, CO2 5% และความชื้น 95% ได้รับการเลี้ยงดูประมาณ 16 ชั่วโมงก่อนที่จะมีการทดสอบแต่ละเซลล์หมายเลขที่ถูกกำหนดไว้ในรายการที่ซ้ำกันโดยใช้เคาน์เตอร์โคลเตอร์ Z2 (Beckman Coulter) HFL-1 เซลล์ถูกเชื้อเมื่อพวกเขามาถึงจุดบรรจบในอัตราส่วนแยก 1: 2 จนกว่าพวกเขาจะเข้ามาในการชราภาพ

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2 . วัสดุและวิธีการ
2.1 . สารเคมีและแอนติบอดี
โรซื้อมาจาก biospectrum qu-cap caprilic / ทำจากไม้ , และไตรกลีเซอไรด์ ( หมวก ) ที่ได้รับจาก บีเอเอสเอฟ และไดเมทิลซัลฟอกไซด์ ( DMSO ) ได้จาก Sigma llvy-amc mg132 , เช่นเดียวกับแอนติบอดี proteasomal หลักกับα 7 ( pw8110 ; 30 kDa ) และบีตา 5 ( pw8895 ; 23 กิโลดาลตัน ) หน่วยย่อยที่ซื้อมาจาก biomol .แอนติบอดีประถมกับ gapdh ( sc25778 ; 37 kDa ) และแอนติบอดีรองซื้อจาก Santa Cruz เทคโนโลยีชีวภาพ ระดับแอนติบอดีต่อ ไทโรซิเนส ( # ms-800-p0 70 – 80 kDa ) ซึ่งได้จากเทอร์โมวิทยาศาสตร์ .
2.2 . เซลล์เพาะเลี้ยง
และhfl-1 มนุษย์จากตัวอ่อน ( ที่ได้รับจากวัฒนธรรมยุโรปของเซลล์ ) และเมาส์ ( b16f10 เซลล์ melanocytes ) ถูกเก็บรักษาไว้ในดัลเบโค่การนกอินทรีขนาดกลาง ( DME Μ ; Invitrogen ) เสริมด้วยซีรัม 10 เปอร์เซ็นต์ ( v / v ) foetal ; Invitrogen ) , 2 มม. และ 1 % ไม่มีกรดอะมิโน . เซลล์มี subcultured 37 °องศาเซลเซียส คาร์บอนไดออกไซด์ 5% และ 95 % ความชื้นได้รับประมาณ 16 ชั่วโมง ก่อนที่จะใช้จำนวนเซลล์แต่ละและถูกกำหนดในรายการที่ซ้ำกันโดยใช้เครื่อง Coulter กขึ้น ( เบคแมน คูลเตอร์ ) hfl-1 cells subcultured เมื่อมาถึงจุดบรรจบที่แยกสัดส่วน 1 : 2 จนเข้าสู่
ชราภาพ