which was modified based on pGreenI

which was modified based on pGreenII 0800-LUC reporter vector (Hellens et al., 2005). GAL4-LUC contains five copies of GAL4 binding element and minimal TATA region of 35S promoter of CauliXower Mosaic Virus (CaMV), and these sequences are located upstream of the LUC. For the assay of MaC2H2s repressing the MaACS1 and MaACO1 promoters, MaC2H2-1/2 were inserted into the pEAQ vector as effector, while the MaACS1 and MaACO1 promoters were cloned into pGreenII 0800-LUC double-reporter vector as reporter. The constructed effector and reporter plasmids were co-transformed into tobacco leaves by Agrobacterium tumefaciens strain GV3101. After two days, LUC and REN luciferase activities were measured using the dual luciferase assay kit (Promega) on the Luminoskan Ascent Microplate Luminometer (Thermo). The results were calculated by the ratio of LUC to REN. At least six biological repeats were assayed for each combination.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ซึ่งล่าสุดอิง pGreenII 0800 LUC ข่าวเวกเตอร์ (Hellens et al. 2005) GAL4 LUC ประกอบด้วยห้าสำเนา GAL4 องค์ประกอบและน้อยที่สุดทาภูมิภาคของโปรโมเตอร์ 35S ของไวรัสโมเสก CauliXower (CaMV), และลำดับเหล่านี้ตั้งอยู่ต้นน้ำของการรักษาระบบ สำหรับการทดสอบของ MaC2H2s repressing ก่อ MaACS1 และ MaACO1, MaC2H2-1/2 ถูกแทรกลงในเวกเตอร์ pEAQ เป็น effector ว่าขณะก่อ MaACS1 และ MaACO1 ถูกโคลนลงในเวกเตอร์สองข่าว 0800 LUC pGreenII เป็นข่าว Plasmids effector และข่าวที่สร้างได้ร่วมรับการเปลี่ยนแปลงลงในใบยาสูบ โดยสายพันธุ์ tumefaciens อโกรแบคทีเรียม GV3101 หลังจากสองวัน กิจกรรม luciferase LUC และ REN ถูกวัดโดยใช้ชุดทดสอบ luciferase คู่ (Promega) บน Luminometer ขึ้น Microplate Luminoskan (เทอร์โม) ผลลัพธ์ถูกคำนวณ โดยอัตราส่วนของการรักษาระบบการ REN ทำซ้ำทางชีวภาพที่หกถูก assayed สำหรับแต่ละชุด

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ซึ่งได้รับการปรับเปลี่ยนขึ้นอยู่กับ pGreenII 0800-Luc นักข่าวเวกเตอร์ (Hellens et al., 2005) GAL4-Luc มีห้าสำเนาของ GAL4 ผูกพันองค์ประกอบและภูมิภาคท​​าทาน้อยที่สุดของ 35S ก่อการ CauliXower Mosaic Virus (CaMV) และลำดับเหล่านี้จะอยู่ต้นน้ำของ LUC สำหรับการทดสอบของ MaC2H2s ข่ม MaACS1 และ MaACO1 ก่อการ MaC2H2-1 / 2 ถูกแทรกลงในเวกเตอร์ pEAQ เป็น effector ขณะที่ MaACS1 และ MaACO1 โปรโมเตอร์ถูกโคลนเข้าไปใน pGreenII 0800-Luc ดับเบิลนักข่าวเวกเตอร์เป็นนักข่าว สร้าง effector พลาสมิดและผู้สื่อข่าวได้รับการร่วมเปลี่ยนเป็นใบยาสูบโดย Agrobacterium tumefaciens GV3101 ความเครียด สองวันหลังจากลัคและ REN กิจกรรม luciferase ถูกวัดโดยใช้ชุดทดสอบคู่ luciferase (Promega) ใน Luminoskan Ascent ไมโคร Luminometer (เทอร์โม) ผลการวิจัยที่คำนวณได้จากอัตราส่วนของ LUC ไปเรเน อย่างน้อยหกซ้ำทางชีวภาพและนำไปวิเคราะห์สำหรับแต่ละชุด

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ซึ่งดัดแปลงจาก pgreenii 0800-luc นักข่าวเวกเตอร์ ( hellens et al . , 2005 ) gal4-luc ประกอบด้วยห้าชุดของ gal4 ผูกองค์ประกอบและเขตทาทาน้อยที่สุดของ 35s ผดุง caulixower mosaic virus ( CAMV ) และลำดับเหล่านี้อยู่ต้นน้ำของลุค สำหรับการทดสอบของ mac2h2s การปิดกั้นการ maacs1 และโปรโมเตอร์ maaco1 mac2h2-1 / 2 , ถูกแทรกลงในเวกเตอร์ peaq เป็นโต้ง ในขณะที่ maacs1 maaco1 โปรโมเตอร์และถูกโคลนเข้าไปในเวกเตอร์นักข่าว pgreenii 0800-luc สองเท่าเป็นนักข่าว การสร้างพลาสมิด ( นักข่าว ) Co กลายเป็นใบยาสูบโดยใช้ Agrobacterium tumefaciens สายพันธุ์ gv3101 . หลังจากสองวัน ลุค และกิจกรรมเอนไซม์ลูซิเฟอเรสเรนถูกวัดโดยใช้แบบทดสอบชุด ลูซิเฟอเรส ( promega ) ในพื้นที่ภาคเหนือของประเทศไทย luminoskan ทางขึ้นลูมิโนมิเตอร์ ( ร้อน ) ผลลัพธ์ที่ได้ โดยอัตราส่วนของ ลุค กับ เรน อย่างน้อยหกซ้ำทางชีวภาพมีปริมาณสำหรับแต่ละชุด