Purification under denaturing condi

Purification under denaturing conditions
Bacterial pellet (0.64 g of wet weight cells obtained from 50 ml (of culture) was resuspended in lysis buffer (8 ml) having urea as a denaturing agent (8 M urea, 100 mM NaH2PO4, 10 mM Tris–Cl, pH (8.0) and the suspension was stirred at room temperature for 1 h. Lysed cell suspension was centrifuged at 10,000 rpm for 30 min at room temperature and supernatant cleared lysate was loaded onto 5 ml column to purify the protein by Ni–NTA affinity chromatography.The unbound proteins in the column were washed using
wash buffer (8 M urea, 100 mM NaH2PO4, 10 mM Tris–Cl, pH 6.3) and rOmp28 protein was finally eluted from column using elution buffer (8 M urea, 100 mM NaH2PO4, 10 mM Tris–Cl, pH 4.5).Purification of rOmp28 in pET28a(+) and pQE30UA vector using Triton
X-100 and b-mercaptoethanol

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

บริสุทธิ์ภายใต้เงื่อนไข denaturingเม็ดแบคทีเรีย (0.64 กรัมน้ำหนักเปียกเซลล์ที่ได้รับจาก 50 ml (วัฒนธรรม) คือ resuspended ใน lysis บัฟเฟอร์ (8 มิลลิลิตร) มียูเรียเป็นตัวแทน denaturing (ยูเรีย 8 เมตร NaH2PO4 100 มม. 10 มม.ทริสเรทติ้ง – Cl, pH (8.0) และระงับกวนที่อุณหภูมิห้องสำหรับ 1 h. ระงับเซลล์ Lysed เป็นผลิตภัณฑ์ที่ 10,000 rpm 30 นาทีที่อุณหภูมิห้องและ supernatant ล้าง lysate ถูกโหลดลงในคอลัมน์ 5 มล.ให้บริสุทธิ์โปรตีน โดย Ni – NTA chromatography ความสัมพันธ์ โปรตีนไม่ถูกผูกไว้ในคอลัมน์ถูกล้างโดยใช้ล้างบัฟเฟอร์ (ยูเรีย 8 เมตร 100 mM NaH2PO4, 10 มมทริสเรทติ้ง – Cl, pH 6.3) และสุดท้ายคือ eluted rOmp28 โปรตีนจากคอลัมน์ที่ใช้บัฟเฟอร์ชะ (ยูเรีย 8 เมตร 100 mM NaH2PO4, 10 มมทริสเรทติ้ง – Cl, pH 4.5) ทำให้บริสุทธิ์ของ rOmp28 ใน pET28a(+) และ pQE30UA เวกเตอร์ที่ใช้ไทรทันX-100 และบี-mercaptoethanol

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

บริสุทธิ์ภายใต้ denaturing เงื่อนไข
เม็ดแบคทีเรีย (0.64 กรัมของเซลล์น้ำหนักเปียกได้รับจาก 50 มล. (วัฒนธรรม) คือ resuspended ในการสลายบัฟเฟอร์ (8 มล.) มียูเรียเป็นตัวแทนขั้นเปลี่ยน (8 M ยูเรีย 100 มิลลิเมตร NaH2PO4 10 มิลลิ Tris-Cl พีเอช (8.0) และการระงับถูกกวนที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 1 ชม. เซลล์แขวนลอย lysed ถูกหมุนเหวี่ยงที่ 10,000 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 30 นาทีที่อุณหภูมิห้องและใส lysate ล้างถูกโหลดลงบนขนาด 5 ml คอลัมน์การชำระล้างโปรตีนโดย Ni-NTA ความสัมพันธ์ chromatography.The โปรตีนไม่ได้ผูกไว้ในคอลัมน์ถูกล้างโดยใช้
บัฟเฟอร์ล้าง (8 M ยูเรีย 100 มิลลิเมตร NaH2PO4 10 มิลลิ Tris-Cl ค่า pH 6.3) และโปรตีน rOmp28 ที่สุดก็ชะจากคอลัมน์โดยใช้บัฟเฟอร์ชะ (8 M ยูเรีย 100 มิลลิเมตร NaH2PO4 10 มิลลิ Tris-Cl ค่า pH 4.5) .Purification ของ rOmp28 ใน pET28a (+) และ pQE30UA เวกเตอร์โดยใช้ Triton
X-100 B-mercaptoethanol

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ี่ผลิตภายใต้เงื่อนไขเม็ดแบคทีเรีย ( 0.64 กรัม น้ำหนักเปียก เซลล์ที่ได้จาก 50 ml ( วัฒนธรรม ) คือ resuspended ในการสลายบัฟเฟอร์ ( 8 ml ) ที่มียูเรียเป็นี่ตัวแทน ( 8 M ยูเรีย , 100 มม. nah2po4 10 มม. นอกจากนี้ – CL ( pH 8.0 ) และช่วงล่างถูกกวนที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 1 ชั่วโมง lysed เซลล์ระดับที่ 10 , 000 รอบต่อนาที ถูกระงับเป็นเวลา 30 นาทีที่อุณหภูมิสูงและล้าง lysate ถูกโหลดลงบน 5 ml ให้บริสุทธิ์โดยคอลัมน์โปรตีนผมและ NTA ขี้รังแค และจับกับโปรตีนในคอลัมน์ที่ใช้เป็นล้างล้างบัฟเฟอร์ ( 8 M ยูเรีย , 100 มม. nah2po4 10 มม. นอกจากนี้ – Cl pH 6.3 ) และโปรตีน romp28 ในที่สุด ตัวอย่างจากคอลัมน์โดยใช้สารประกอบบัฟเฟอร์ ( 8 M ยูเรีย , 100 มม. nah2po4 10 มม. นอกจากนี้ – Cl pH 4.5 ) บริสุทธิ์ของ romp28 ใน pet28a ( + ) และเวกเตอร์ pqe30ua ใช้ไทรทันb-mercaptoethanol X-100 และ