2. Materials and methods2.1. Experi

2. Materials and methods
2.1. Experiment material and planting
Supersweet corn seeds (F1 hybrid with sh2), cv. Supersweet 17,
were used in these studies. The hybrid seeds were produced by
synchronous hand cross-pollination of the parental inbreds in the field at the experimental farm of Zhejiang University using production practices common for the region.
2.2. Seed harvest
Normally, it takes 30–40 days for supersweet corn seeds to
fully mature but seed germination is possible 14 days after
pollination (Cao et al., 2008b). Supersweet corn ears were
harvested at different developmental stages from 14 to 42 days(at an interval of 4 days) after pollination (DAP). At each harvest,10 plants were randomly chosen and the first ear from the top of the plant was harvested by hand. Seeds from the middle part of supersweet corn ears were threshed by hand and bulked for further tests

2.3. Germination test
Three replications of 50 seeds for each harvest were used, each
50 seeds were placed in a 12 cm 18 cm germination box
containing wet sand. Then, seeds were kept in a germination
chamber at 25 8C with a diurnal cycle of 12 h light and 12 h
darkness for 7 days. Seeds were considered germinated when a
1 mm length radicle protruded through the seed coat. The number
of germinated seeds was counted daily. The energy of germination
and germination percentage were calculated after 4 and 7 days,respectively. The germination index (GI = S(Gt Tt1
)) was calculated by the method of Zhang et al. (2007) where Gt is the number
of the germinated seeds on day t and Tt is the time corresponding
to Gt (in days). The energy of germination was the percentage of germinated seeds 4 days after planting relative to the number of
seeds tested.
2.4. Measurements of physiological parameters
The seed length, width and thickness of 30 seeds were
measured at each harvest manually with a ruler. The fresh and
dry weights of 100 seeds were recorded at each harvest. Dry
weights were recorded after 24 h in an oven at 80 8C (Cao et al.,
2008a).
The evaluation of kernel nutritive quality was performed with 3
replications of 20 seeds for each harvest. Soluble protein was
extracted from the seeds and determined by colorimetric assay
with Coomassie Brilliant Blue G250 (Li, 2000). The concentration of
total soluble sugar was determined by 3,5-dinitrosalicylic acid
method (Jiang, 1999)Malondialdehyde (MDA) concentration was determined
using the thiobarbituric acid (TBA) reaction as described by
Zhang et al. (2007). Briefly, 0.3 g fresh weight (FW) of corn
seeds for each replication were collected at 14, 18, 22, 26, 30,
34, 38 and 42 days after pollination, and homogenized in 3 ml
of 5% trichloroacetic acid (TCA). The homogenate was centrifuged at 3600 g for 10 min and 2 ml of 0.67% TBA was added to 2 ml of supernatant. The mixture was heated at 100 8C for 30 min, cooled to room temperature and then centrifuged at 1800 g for 5 min. The optical density of the supernatant
was measured at 450 nm, 532 nm and 600 nm. The MDA
concentration was calculated according to the follow formula:C (mmol l1) = 6.45(A532 A600) 0.56A450, then the MDA concentration (nmol g1 FW) was calculated.

Electrolyte leakage as a measurement for membrane permeability was determined according to the method of Liu et al. (2000).Fresh seeds were cut into segments of about 5 mm respectively.Each tissue (0.2 g FW) was placed in the test tube with 10 ml deionized water and covered with a plug. After incubation at 25 8C for 6 h, the electrolyte leakage of the tissue was measured using a
conductivity meter (DDS-11A, made in Shanghai, China), the value
was named E1. Subsequently, the test tube was kept in water at
100 8C for 30 min, and then cooled to 25 8C, the second electrolyte
leakage was measured as E2. The electrolyte leakage of deionized
water was named E0. The relative electrolyte leakage (REL) was
calculated as follows:
REL ¼ E1 E0
E2 E0 100%
P
Peroxidase (POD) and catalase (CAT) activities of from seeds of
each harvest were measured. Seeds (0.5 g FW) were harvested and
homogenized in 10 ml of 50 mM phosphate buffer (pH 7.8)
containing 0.1 mM EDTA and 2 mM dithiothreitol. The homogenate was centrifuged at 10,000 g for 15 min. The supernatant
was used for enzyme assays and all of the extraction steps were
carried out at 1–4 8C (Trevor and Fletcher, 1994).
POD activity was measured according to the method of Qiu et al.
(2005). The assay mixture consisted of 3 ml of 50 mM phosphate
buffer (pH 7.0), 1% guaiacol, 0.4% H2O2 and enzyme extract. The
increase in absorbance due to oxidation of guaiacol was measured
at 470 nm. Enzyme activity was calculated in terms of mmol of
guaiacol oxidized min1 g1 fresh weight at 37 8C, and was expressed as U g1 FW min1
. CAT activity was measured at
37 8C according to Trevor and Fletcher (1994). The enzyme assay
contained 50 mM phosphate buffer (pH 7.0), 0.4% H2O2 and
enzyme extract in a total volume of 4 ml. CAT activity was
estimated by the decrease in absorbance of H2O2 at 240 nm and
was expressed as U g1 FW min1
. Both POD and CAT were
determined for three replications.

2.5. Polyamine concentration assay
PAs concentrations were measured by HPLC according to the
method of Flores and Galston (1982) with minor modifications.
0.3 g FW seeds of each harvest were homogenized with 3 ml 5%
(w/v) chilling perchloric acid using a cooled mortar and pestle.
The homogenates were kept in an ice bath for 1 h, and then
centrifuged at 23,000 g for 30 min at 4 8C; the supernatant was
transferred to new centrifugal tube and were stored at 70 8C for
quantification of PAs. Seed extracts were benzoylated. One ml
2 mol l1 NaOH was mixed with 500 ml supernatant. After
the addition of 10 ml benzoyl chloride, the samples were
vortexed for 20 s then incubated for 20 min at 37 8C. Following
the high temperature incubation, 2 ml saturated NaCl was
added. Benzoyl-polyamines were extracted in 2 ml diethyl ether
and vortexed for 10 s. After centrifugation at 1500 g for 5 min
at 4 8C, 1 ml of the ether phase was collected, evaporated to
dryness under a stream of warm air, and redissolved in 100 ml
methanol.

The benzoylated extracts were filtered through a 0.22 mm
membrane filter, and then eluted at room temperature through a
6.0 mm 150 mm, 5 mm particle size reverse-phase (C18) column
(Shim-Pack CLC-ODS). PAs peaks were detected by an SPD-20A
(Shimadzu) absorbance detector at 254 nm. The mobile phases
consisted of methanol: water (64:36), at a flow rate of
1.0 ml min1.
Three polyamine standards (Sigma Chemical Co.)
of Put, Spd and Spm were prepared at different concentrations for
the development of standard curves.
2.6. Statistical analysis
Statistical analysis was performed using the SAS software.Three replications were conducted for the parameter measure ments. All obtained percentage values were arcsine-transformed
prior to statistical analysis. Regression equations between polyamine concentrations and physiological parameters during seed development were calculated.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2. วัสดุและวิธีการ2.1 การทดสอบวัสดุและการปลูกเมล็ดข้าวโพด supersweet (F1 ผสมกับ sh2) พันธุ์ Supersweet 17ใช้ในการศึกษาเหล่านี้ ผลิตโดยเมล็ดพันธุ์ไฮบริดการผสมเกสรแบบซิงโครนัสมือของ inbreds โดยผู้ปกครองในฟิลด์ที่ฟาร์มทดลองใช้ผลิตปฏิบัติทั่วไปในภูมิภาคที่มหาวิทยาลัยเจ้อเจียง2.2. เมล็ดการเก็บเกี่ยวโดยปกติ ใช้เวลา 30 – 40 วัน supersweet ข้าวโพดเมล็ดผู้ใหญ่ทั้งหมด แต่เมล็ดการงอกได้ 14 วันหลังจากpollination (Cao et al., 2008b) ข้าวโพด supersweet หูได้เก็บเกี่ยวที่แตกต่างพัฒนาขั้น 14 42 วัน (ในช่วงวันที่ 4) หลังจาก pollination (DAP) ในฤดูเก็บเกี่ยว 10 ต้นไม้ที่ถูกเลือกแบบสุ่ม และหูแรกจากด้านบนของพืชถูกเก็บเกี่ยวด้วยมือ เมล็ดพืชจากส่วนกลางของหูข้าวโพด supersweet threshed ด้วยมือ และ bulked ทดสอบเพิ่มเติม2.3 ทดสอบการงอกใช้ระยะที่สามของ 50 เมล็ดการเก็บเกี่ยวแต่ละ แต่ละเมล็ดพืช 50 ถูกวางในกล่องการงอก 18 ซม. 12 ซม.ประกอบด้วยทรายเปียก เมล็ดถูกเก็บไว้ในการงอกที่แล้วหอที่ 8C 25 กับวงจร diurnal แสง 12 h และ 12 hความมืด 7 วัน เมล็ดได้ถือเปลือกงอกเมื่อมีradicle ความยาว 1 มม. protruded ผ่านหุ้มเมล็ด หมายเลขของเมล็ดพืชเปลือกงอกได้นับรวมทุกวัน พลังงานของการงอกและเปอร์เซ็นต์การงอกมีคำนวณหลังจากวันที่ 4 และ 7 ตามลำดับ ดัชนีการงอก (GI = S(Gt Tt1คำนวณ โดยวิธีของ Zhang et al. (2007) หมายเลข Gt))ของเมล็ดพืชเปลือกงอกในวันที่ t และ Tt มีเวลาตรงกับ Gt (เป็นวัน) พลังงานของการงอก 4 วันหลังจากปลูกสัมพันธ์กับจำนวนเปอร์เซ็นต์ของเมล็ดเปลือกงอกได้เมล็ดพืชทดสอบ2.4 การวัดพารามิเตอร์สรีรวิทยาเมล็ดยาว ความกว้าง และความหนาของเมล็ด 30 ได้วัดที่เก็บเกี่ยวแต่ละด้วยตนเองกับไม้บรรทัด สด และน้ำหนักแห้งของเมล็ด 100 ถูกบันทึกในฤดูเก็บเกี่ยว แห้งบันทึกน้ำหนักหลังจาก 24 ชมในเตาอบที่ 80 8C (Cao et al.,2008a)ดำเนินการประเมินคุณภาพวิจัยเคอร์เนล มี 3ระยะของ 20 เมล็ดในฤดูเก็บเกี่ยว โปรตีนที่ละลายน้ำได้สกัดจากเมล็ด และกำหนด โดยวิเคราะห์เทียบเคียงด้วย Coomassie G250 สีฟ้าสดใส (Li, 2000) ความเข้มข้นของน้ำตาลละลายน้ำทั้งหมดถูกกำหนด โดยกรด 3,5-dinitrosalicylicวิธี (เจียง 1999) ได้กำหนดความเข้มข้น Malondialdehyde (MDA)ใช้ปฏิกิริยากรด (TBA) thiobarbituric ตามที่อธิบายไว้โดยเตียว et al. (2007) สั้น ๆ 0.3 g สดน้ำหนัก (FW) ของข้าวโพดมีการรวบรวมเมล็ดสำหรับแต่ละแบบจำลองที่ 14, 18, 22, 26, 3034, 38 และ 42 วันหลัง pollination และ homogenized เป็นกลุ่มใน 3 mlของ 5% trichloroacetic กรด (TCA) Homogenate ถูก centrifuged ที่ 3600 g สำหรับ 10 นาที และ 2 ml ของ TBA 0.67% ถูกเพิ่ม 2 ml ของ supernatant ส่วนผสมถูกความร้อนที่ 100 8C ใน 30 นาที ระบายความร้อนด้วยอุณหภูมิห้อง และ centrifuged แล้ว ที่ g 1800 สำหรับ 5 นาที ความหนาแน่นออปติคัลของ supernatantมีวัดที่ 450 nm, 532 nm และ 600 nm MDAมีคำนวณความเข้มข้นตามตามสูตร: C (mmol l1) = 6.45(A532 A600) 0.56A450 แล้วความเข้มข้นของ MDA (nmol g1 FW) คำนวณอิเล็กโทรรั่วเป็นวัดสำหรับเมมเบรน permeability ได้กำหนดตามวิธีการของหลิวและ al. (2000)เมล็ดสดถูกตัดเป็นกลุ่มประมาณ 5 มม.ตามลำดับแต่ละเนื้อเยื่อ (0.2 g FW) ถูกวางลงในหลอดทดสอบน้ำ 10 ml deionized และครอบคลุมพร้อมปลั๊กแบบ หลังจากบ่มที่ 25 8C สำหรับ 6 h อิเล็กโทรการรั่วไหลของเนื้อเยื่อถูกวัดโดยใช้แบบนำมิเตอร์ (ทพ-11A ในเซี่ยงไฮ้ ประเทศจีน) ค่ามีชื่อว่า E1 ในเวลาต่อมา หลอดทดสอบถูกเก็บไว้ในน้ำที่100 8C สำหรับ 30 นาที และระบายความร้อนด้วยการ 25 8C อิเล็กโทรที่สองแล้วรั่วไหลถูกวัดเป็น E2 การรั่วไหลของอิเล็กโทรของ deionizedน้ำมีชื่อว่า E0 มีการรั่วไหลอิเล็กโทรสัมพัทธ์ (REL)คำนวณดังนี้:E0 ¼ E1 RELE2 E0 100%P(POD) peroxidase และ catalase (CAT) กิจกรรมจากเมล็ดของมีวัดฤดูเก็บเกี่ยว มีการเก็บเกี่ยวเมล็ด (0.5 g FW) และhomogenized เป็นกลุ่มใน 10 ml 50 มม.ฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (pH 7.8)ประกอบด้วย EDTA 0.1 มม.และ 2 มม. dithiothreitol Homogenate ถูก centrifuged ที่ g 10000 สำหรับ 15 นาที Supernatantใช้เอนไซม์ assays และแยกขั้นตอนได้ทั้งหมดดำเนินการ 1 – 4 8 C (เทรเวอร์และเฟล็ตเชอร์ 1994)กิจกรรมเท่านั้นถูกวัดตามวิธีของคู et al(2005) วิเคราะห์ส่วนผสมประกอบด้วย 3 ml ของฟอสเฟต 50 มม.บัฟเฟอร์ (pH 7.0), guaiacol 1%, 0.4% H2O2 และสารสกัดจากเอนไซม์ ที่เพิ่มขึ้นเนื่องจากการเกิดออกซิเดชันของ guaiacol absorbance ที่วัดที่ 470 nm คำนวณใน mmol ของเอนไซม์guaiacol ออกซิไดซ์ min1 g1 น้ำหนักสดที่ 37 8C และถูกแสดงเป็น U g1 FW min1. กิจกรรมแมวที่วัด37 8C ตามเทรเวอร์และเฟล็ตเชอร์ (1994) ทดสอบเอนไซม์ประกอบด้วย 50 mM ฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (pH 7.0), 0.4% H2O2 และสารสกัดจากเอนไซม์ในปริมาณรวมของ 4 ml. CAT กิจกรรมได้ประเมิน โดยการลดลงของ absorbance ของ H2O2 ที่ 240 nm และถูกแสดงเป็น U g1 FW min1. ฝักและแมวได้กำหนดระยะที่สาม2.5. วิเคราะห์ความเข้มข้นโพลีเอมีนมีวัดความเข้มข้นของ pAs โดย HPLC ตามวิธีฟลอเรสและ Galston (1982) มีการปรับเปลี่ยนเล็กน้อย0.3 g FW เมล็ดของฤดูเก็บเกี่ยวมี homogenized เป็นกลุ่ม 3 ml 5%(w/v) รำคาญ perchloric กรดใช้แบบเย็น ๆ โกร่งHomogenates ถูกเก็บไว้ในอ่างอาบน้ำเป็นน้ำแข็งสำหรับ 1 h แล้วcentrifuged ที่ g 23,000 ใน 30 นาทีที่ 4 8C supernatant ถูกโอนย้ายไปหลอดใหม่แรงเหวี่ยง และถูกเก็บไว้ที่ 70 8C สำหรับนับของ PAs สารสกัดจากเมล็ด benzoylated ได้ Ml หนึ่ง2 โมล l1 NaOH ถูกผสมกับ supernatant ขนาด 500 มล. หลังจากแห่ง 10 ml เบนโซอิลคลอไรด์ ตัวอย่างดีvortexed สำหรับ 20 s incubated แล้วสำหรับ 20 นาทีที่ 37 8C. ต่อไปนี้บ่มที่อุณหภูมิสูง 2 ml มี NaCl อิ่มตัวเพิ่ม เบนโซอิล polyamines ถูกสกัดใน 2 ml diethyl อีเทอร์vortexed 10 และ s หลังจาก centrifugation ที่ g 1500 สำหรับ 5 นาทีที่ 4 8C, 1 ml ของเฟสอีเทอร์รวบรวม การที่หายไปความแห้งกร้านภายใต้กระแสของอากาศอบอุ่น และ redissolved ใน 100 มลเมทานอลสารสกัดจาก benzoylated ถูกกรองผ่านมม. 0.22ตัวกรองเมมเบรน และ eluted แล้ว ที่อุณหภูมิห้องโดยการ6.0 มม. 150 mm, 5 mm อนุภาคขนาดกลับเฟส (C18) คอลัมน์(Shim Pack CLC-ODS) ตรวจพบ โดยการ SPD-20A พีคส์ pAsจับ absorbance (Shimadzu) ที่ 254 nm ระยะเคลื่อนประกอบด้วยเมทานอล: น้ำ (64:36), ที่อัตราการไหลของmin1 1.0 mlโพลีเอมีนสามมาตรฐาน (ซิกเคมี จำกัด)ของย้าย Spd และ Spm ได้เตรียมที่ความเข้มข้นแตกต่างกันสำหรับการพัฒนาของเส้นโค้งมาตรฐาน2.6. สถิติวิเคราะห์วิเคราะห์ทางสถิติได้ดำเนินการโดยใช้ซอฟต์แวร์ SASระยะที่ 3 ได้ดำเนินการ ments วัดพารามิเตอร์ ค่าเปอร์เซ็นต์ที่ได้รับทั้งหมดถูกแปลง arcsineก่อนการวิเคราะห์ทางสถิติ มีคำนวณสมการถดถอยระหว่างความเข้มข้นของโพลีเอมีนและพารามิเตอร์สรีรวิทยาในระหว่างการพัฒนาเมล็ด

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2 วัสดุและวิธีการ
2.1 วัสดุและการทดลองปลูก
เมล็ดข้าวโพด Supersweet (ไฮบริด F1 กับ SH2), พันธุ์ Supersweet 17
ถูกนำมาใช้ในการศึกษาเหล่านี้ เมล็ดพันธุ์ลูกผสมที่ผลิตโดย
มือ synchronous ผสมเกสรข้ามของสายพันธุ์ของพ่อแม่ในสนามที่ฟาร์มทดลองของมหาวิทยาลัยเจ้อเจียงการผลิตโดยใช้วิธีปฏิบัติทั่วไปสำหรับภูมิภาค
2.2 การเก็บเกี่ยวเมล็ด
โดยปกติจะใช้เวลา 30-40 วันเมล็ดข้าวโพด Supersweet ที่จะ
โตเต็มที่ แต่การงอกของเมล็ดเป็นไปได้ 14 วันหลัง
การผสมเกสร (Cao et al., 2008b) หูข้าวโพด Supersweet ถูก
เก็บเกี่ยวในระยะการพัฒนาที่แตกต่างกัน 14-42 วัน (ในช่วงเวลา 4 วัน) หลังจากการผสมเกสร (DAP) ในแต่ละการเก็บเกี่ยว, 10 พืชถูกเลือกแบบสุ่มและหูครั้งแรกจากด้านบนของพืชที่ถูกเก็บเกี่ยวด้วยมือ เมล็ดพันธุ์พืชจากส่วนตรงกลางของหูข้าวโพด Supersweet ถูกนวดด้วยมือและมีเนื้อมีหนังสำหรับการทดสอบต่อไป2.3 การทดสอบการงอกของสามซ้ำ 50 เมล็ดสำหรับแต่ละการเก็บเกี่ยวถูกนำมาใช้ในแต่ละ50 เมล็ดอยู่ใน 18 เซนติเมตร 12 เซนติเมตรกล่องงอกที่มีทรายเปียก จากนั้นเมล็ดถูกเก็บไว้ในการงอกห้องที่ 25 8C กับวงจรรายวัน 12 ชั่วโมงแสงและ 12 ชั่วโมงความมืดเป็นเวลา 7 วัน เมล็ดพันธุ์พืชได้พิจารณางอกเมื่อ1 มม radicle มีความยาวยื่นออกมาผ่านเปลือกหุ้มเมล็ด จำนวนของเมล็ดงอกนับทุกวัน พลังงานการงอกและเปอร์เซ็นต์ความงอกจะถูกคำนวณหลังจากที่ 4 และ 7 วันตามลำดับ ดัชนีการงอก (GI = S (GT TT1 )) ที่คำนวณได้จากวิธีการของ Zhang et al, (2007) ที่ Gt คือจำนวนของเมล็ดงอกในวันที่ T และ Tt เป็นช่วงเวลาที่สอดคล้องกันในการ Gt (ในวัน) พลังงานการงอกเป็นร้อยละของเมล็ดงอก 4 วันหลังปลูกเมื่อเทียบกับจำนวนของเมล็ดพันธุ์ที่ผ่านการทดสอบ2.4 วัดของพารามิเตอร์ทางสรีรวิทยาเมล็ดพันธุ์มีความยาวความกว้างและความหนาของ 30 เมล็ดได้รับการวัดในแต่ละการเก็บเกี่ยวด้วยตนเองด้วยไม้บรรทัด สดและน้ำหนักแห้งของเมล็ด 100 ถูกบันทึกไว้ในแต่ละการเก็บเกี่ยว แห้งน้ำหนักที่ถูกบันทึกไว้หลังจาก 24 ชั่วโมงในเตาอบที่ 80 8C (Cao et al., 2008a) การประเมินผลของเมล็ดที่มีคุณภาพทางโภชนาการได้ดำเนินการกับ 3 ซ้ำ 20 เมล็ดสำหรับแต่ละการเก็บเกี่ยว โปรตีนที่ละลายน้ำได้ถูกสกัดจากเมล็ดและกำหนดโดยการทดสอบสีกับ Coomassie G250 สีฟ้าสดใส (Li, 2000) ความเข้มข้นของน้ำตาลที่ละลายน้ำได้ถูกกำหนดโดย 3.5 dinitrosalicylic กรดวิธี (เจียง, 1999) Malondialdehyde (MDA) ความเข้มข้นถูกกำหนดโดยใช้กรด thiobarbituric (TBA) ปฏิกิริยาตามที่อธิบายไว้โดยZhang et al, (2007) สั้น ๆ 0.3 กรัมน้ำหนักสด (FW) ข้าวโพดเมล็ดสำหรับการจำลองแบบแต่ละถูกเก็บที่ 14, 18, ​​22, 26, 30, 34, 38 และ 42 วันหลังการผสมเกสรและหดหายใน 3 มลกรดไตรคลอโรจาก 5% (TCA) . homogenate ถูกหมุนเหวี่ยงที่ 3600 กรัมเป็นเวลา 10 นาทีและ 2 มิลลิลิตร 0.67% TBA ถูกบันทึกอยู่ใน 2 มิลลิลิตรใส ส่วนผสมที่ถูกความร้อนที่ 100 8C เวลา 30 นาทีเย็นที่อุณหภูมิห้องแล้วหมุนเหวี่ยงที่ 1,800 กรัมเป็นเวลา 5 นาที ความหนาแน่นของแสงของสารละลายวัดที่ 450 นาโนเมตร 532 นาโนเมตรและ 600 นาโนเมตร ภาคตะวันออกเฉียงเหนือมีความเข้มข้นที่คำนวณตามสูตรดังต่อไปนี้: C (มิลลิโมล L1) = 6.45 (A532 A600) 0.56A450 แล้วความเข้มข้นของภาคตะวันออกเฉียงเหนือ (นาโนโม G1 FW) ที่คำนวณการรั่วไหลของอิเล็กเป็นวัดสำหรับการซึมผ่านเมมเบรนได้รับการกำหนดขึ้นมาตาม วิธีการของหลิวและคณะ (2000) เมล็ด .Fresh ถูกตัดออกเป็นส่วนของประมาณ 5 มมเนื้อเยื่อ respectively.Each (0.2 กรัม FW) วางอยู่ในหลอดทดลองที่มี 10 มิลลิลิตรน้ำกลั่นปราศจากไอออนและปกคลุมด้วยปลั๊ก หลังจากการบ่มที่อุณหภูมิ 25 8C เวลา 6 ชั่วโมง, การรั่วไหลของอิเล็กโทรไลของเนื้อเยื่อถูกวัดโดยใช้เครื่องวัดค่าการนำไฟฟ้า (DDS-11A ทำในเซี่ยงไฮ้, จีน) ค่าเป็นชื่อ E1 ต่อมาหลอดทดลองถูกเก็บไว้ในน้ำที่100 8C นาน 30 นาทีแล้วทำให้เย็นลงถึง 25 8C, อิเล็กโทรไลที่สองการรั่วไหลของวัดเป็น E2 การรั่วไหลของอิเล็กโทรไลของปราศจากไอออนน้ำเป็นชื่อ E0 อิเล็กโทรไลญาติรั่วไหล (REL) ได้รับการคำนวณดังนี้REL ¼ E0 E1 E2 E0 100% P เปอร์ออกซิเด (POD) และ catalase (CAT) กิจกรรมของจากเมล็ดเก็บเกี่ยวแต่ละวัด เมล็ดพันธุ์พืช (0.5 กรัม FW) ได้รับการเก็บเกี่ยวและหดหายใน 10 ml 50 มมฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (pH 7.8) ที่มี 0.1 mM EDTA และ 2 มิลลิ dithiothreitol homogenate ถูกหมุนเหวี่ยงที่ 10,000 กรัมเป็นเวลา 15 นาที สารละลายที่ใช้สำหรับการตรวจเอนไซม์และทุกขั้นตอนการสกัดที่ได้รับการดำเนินการที่ 1-4 8C (เทรเวอร์และลูกธนู, 1994) กิจกรรม POD วัดตามวิธีการของ Qiu, et al (2005) ส่วนผสมทดสอบประกอบด้วย 3 มล 50 มมฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (pH 7.0), 1% guaiacol, 0.4% H2O2 และสารสกัดจากเอนไซม์ เพิ่มขึ้นในการดูดกลืนแสงเนื่องจากการเกิดออกซิเดชันของ guaiacol วัดที่ 470 นาโนเมตร กิจกรรมของเอนไซม์ที่คำนวณได้ในแง่ของมิลลิโมลของguaiacol ออกซิไดซ์ min1 น้ำหนักสด G1 ที่ 37 8C และได้รับการแสดงเป็น U G1 FW min1 . กิจกรรม CAT วัดที่37 8C ตามเทรเวอร์และลูกธนู (1994) ทดสอบการทำงานของเอนไซม์ที่มีขนาด 50 มมฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (pH 7.0), 0.4% H2O2 และสารสกัดจากเอนไซม์ในปริมาณรวมของ 4 มล กิจกรรม CAT ได้รับการประเมินโดยการลดลงของการดูดกลืนแสงของ H2O2 ที่ 240 นาโนเมตรและได้รับการแสดงเป็น U G1 FW min1 . ทั้ง POD และกสทได้รับการพิจารณาเป็นเวลาสามซ้ำ2.5 พอลิเอมีความเข้มข้นทดสอบความเข้มข้นของก๊าซถูกวัดโดยวิธี HPLC ตามวิธีการของฟลอเรสและ Galston (1982) ที่มีการปรับเปลี่ยนเล็กน้อย0.3 กรัมเมล็ด FW ของแต่ละเก็บเกี่ยวได้หดหายกับ 3 มล 5% (w / v) หนาวกรด perchloric ใช้ปูนเย็น และสากhomogenates ถูกเก็บไว้ในอ่างน้ำแข็งเป็นเวลา 1 ชั่วโมงจากนั้นหมุนเหวี่ยงที่ 23,000 กรัมสำหรับ 30 นาทีที่ 4 8C; ใสได้รับการถ่ายโอนไปยังหลอดแรงเหวี่ยงใหม่และได้รับการจัดเก็บไว้ที่ 70 8C สำหรับปริมาณของก๊าซ สารสกัดจากเมล็ดถูก benzoylated หนึ่งมล2 โมล l1 NaOH ผสมกับ 500 มลใส หลังจากที่นอกเหนือจาก 10 มลเบนโซอิลคลอไรด์ตัวอย่างที่ได้รับการ vortex 20 S แล้วบ่มเป็นเวลา 20 นาทีที่อุณหภูมิ 37 8C ต่อไปบ่มที่อุณหภูมิสูง 2 มิลลิลิตรอิ่มตัวโซเดียมคลอไรด์ที่ถูกเพิ่ม Benzoyl โพลีเอไมถูกสกัดใน 2 มิลลิลิตรอีเทอร์และการ vortex นเวลา 10 วินาที หลังจากการหมุนเหวี่ยงที่ 1500 กรัมเป็นเวลา 5 นาทีที่อุณหภูมิ 4 8C, 1 มิลลิลิตรของเฟสอีเทอร์ถูกเก็บรวบรวมระเหยจนแห้งภายใต้กระแสของอากาศอุ่นและ redissolved ใน 100 มลเมทานอลสารสกัดจาก benzoylated ถูกกรองผ่าน 0.22 มมกรองเมมเบรน แล้วชะที่อุณหภูมิห้องผ่านคอลัมน์ 6.0 มิลลิเมตร 150 มิลลิเมตร, 5 มมขนาดอนุภาคย้อนกลับเฟส (C18) (Shim แพ็ค CLC-ODS) ยอด PAs ถูกตรวจพบโดย SPD-20A (Shimadzu) เครื่องตรวจจับการดูดกลืนแสงที่ 254 นาโนเมตร ขั้นตอนที่มือถือประกอบด้วยเมทานอล: น้ำ (64:36) ที่อัตราการไหลของ1.0 มล min1 สามพอลิเอมีมาตรฐาน (Sigma เคมี จำกัด ) ใส่ของ, และ Spd Spm เตรียมที่ความเข้มข้นแตกต่างกันสำหรับการพัฒนาของเส้นโค้งมาตรฐาน2.6 การวิเคราะห์ทางสถิติการวิเคราะห์ทางสถิติได้ดำเนินการโดยใช้ซ้ำ SAS software.Three ได้ดำเนินการ ments วัดพารามิเตอร์ ทั้งหมดค่าร้อยละที่ได้มา arcsine-เปลี่ยนก่อนที่จะมีการวิเคราะห์ทางสถิติ สมการถดถอยระหว่างความเข้มข้นของพอลิเอและพารามิเตอร์ทางสรีรวิทยาในระหว่างการพัฒนาเมล็ดพันธุ์จะถูกคำนวณ

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2 . วัสดุและวิธีการ
2.1 . วัสดุทดลอง และปลูกเมล็ดข้าวโพด
อ่อนหวาน ( F1 ผสมกับสินค้า ) , พันธุ์ อ่อนหวาน 17
ถูกใช้ในการศึกษาเหล่านี้ เมล็ดพันธุ์ลูกผสมที่ผลิต
แบบผสมข้ามสายพันธุ์มือของผู้ปกครองในเขตที่ฟาร์มทดลองของมหาวิทยาลัยเจ้อเจียงใช้ผลิตแนวทางปฏิบัติทั่วไปสำหรับภูมิภาค .
2.2 . เมล็ดเก็บเกี่ยว
โดยปกติมันใช้เวลา 30 – 40 วัน เมล็ดข้าวโพดอ่อนหวาน

อย่างผู้ใหญ่ แต่การงอกของเมล็ดได้ 14 วัน หลังการผสมเกสร
( เคา et al . , 2008b ) อ่อนหวานข้าวโพดหู
เก็บเกี่ยวที่ระยะพัฒนาการต่าง ๆ จาก 14 42 วัน ( ในช่วง 4 วัน ) หลังจากการผสมเกสร ( DAP ) ในการเก็บเกี่ยวแต่ละพืช 10 สุ่มเลือกและหูครั้งแรกจากด้านบนของพืชที่ถูกเก็บเกี่ยวด้วยมือเมล็ดพันธุ์จากส่วนกลางอ่อนหวานหูข้าวโพดนวดข้าวด้วยมือและยกต่อไปทดสอบ

2.3
การทดสอบความงอกของเมล็ด 3 ซ้ำ 50 สำหรับการเก็บเกี่ยวแต่ละแบบแต่ละ
50 เมล็ดอยู่ใน 12 ซม. 18 ซม. มีกล่อง
ที่มีทรายเปียก แล้วเมล็ดถูกเก็บไว้ในการงอก
ห้องที่ 25 8C กับวงจรใน 12 ชั่วโมงและ 12 ชั่วโมงของแสง
ความมืดเป็นเวลา 7 วันถือว่าเป็นเมล็ดงอกเมื่อ
1 มม. ความยาวรากโดยมีผ่านเยื่อหุ้มเมล็ด . หมายเลข
ของเมล็ดงอกถูกนับทุกวัน พลังงาน และความงอกได้งอก
หลังจาก 4 และ 7 วัน ตามลำดับ ดัชนีการงอก ( GI = S ( GT tt1
) ) ที่คำนวณโดยวิธีการของ Zhang et al . ( 2007 ) ที่ GT เป็นหมายเลข
ของเมล็ดในวันและเวลาเดียวกัน
TT มีการ GT ( วัน ) พลังงานของการงอกของเมล็ดมีเปอร์เซ็นต์ 4 วัน หลังปลูกเมื่อเทียบกับจำนวนเมล็ดทดสอบ
.
2.4 . การวัดของสรีรวิทยา
เม็ด ความยาว ความกว้าง และความหนาของ 30 เมล็ดในแต่ละเก็บเกี่ยวด้วยตนเอง
วัดด้วยไม้บรรทัด สดและ
น้ำหนักแห้ง 100 เมล็ดที่ถูกบันทึกไว้ในแต่ละเก็บเกี่ยว น้ำหนักแห้ง
ถูกบันทึกไว้หลังจาก 24 ชั่วโมงในเตาอบที่อุณหภูมิ 80 8C ( เคา et al . ,

2008a ) การประเมินคุณภาพทางโภชนาการเมล็ดได้ด้วย 3
ซ้ำ 20 เมล็ดในการเก็บเกี่ยว ปริมาณโปรตีนที่สกัดได้จากเมล็ดและ

) กำหนดโดย 7.4 กับเหล่านี้น่าจะเป็น g250 สีฟ้าสดใส ( Li , 2000 ) ความเข้มข้นของ
น้ำตาลที่ละลายน้ำได้ทั้งหมดถูกกำหนดโดยวิธีกรด
3,5-dinitrosalicylic ( เจียง , 1999 ) มาลอนไดอัลดีไฮด์ ( MDA ) สมาธิตั้งใจ
โดยใช้กรดเท่ากับ ( TBA ) ปฏิกิริยาตามที่อธิบายไว้โดย
Zhang et al . ( 2007 ) สั้น ๆ , 0.3 กรัมน้ำหนักสด ( FW ) ของเมล็ดข้าวโพด
แต่ละซ้ำจำนวน 14 , 18 , 22 , 26 , 30 ,
34 , 38 และ 42 วัน หลังการผสมเกสร และบด 3 ml
5 % กรดไตรคลอโรอะซิติก ( TCA ) โดยแยกเป็นระดับที่ 3600 กรัมต่อ 10 นาที 2 มิลลิลิตรมีค่า 0.67 % เพิ่ม 2 ml ของน่าน . ส่วนผสมจะถูกความร้อนที่ 100 8C เป็นเวลา 30 นาที เย็นที่อุณหภูมิห้อง แล้วที่ระดับ 1 , 800 กรัม เป็นเวลา 5 นาที ความหนาแน่นของแสงสูง
เป็นวัดที่ 450 นาโนเมตร 532 nm และ 600 นาโนเมตร การออกซิเดชั่น
ความเข้มข้นที่คำนวณตามตามสูตรเคมี : C ( mmol L1 ) = 6.45 ( a532 a600 ) 0.56a450 แล้ว ( สมาธิ ( nmol G1 FW ) คือค่า

อิเล็กโทรไลต์เยื่อซึมรั่วเป็นวัดถูกกำหนดตามวิธีการของ Liu et al . ( 2543 ) . เมล็ดสดที่ถูกตัดเป็นส่วน ประมาณ 5 มิลลิเมตร ตามลำดับ แต่ละเนื้อเยื่อ ( 02 g FW ) ลงในหลอดทดลองที่มี 10 น้ำคล้ายเนื้อเยื่อประสาน ml และปกคลุมด้วยปลั๊ก หลังจากบ่มที่อุณหภูมิ 25 8C 6 H , อิเล็กโทรไลต์การรั่วไหลของเนื้อเยื่อถูกวัดโดยใช้เครื่องวัดค่า (
dds-11a ทำในเซี่ยงไฮ้ , จีน ) , ค่า
ชื่อ E1 ต่อมาหลอดทดลองที่ถูกเก็บไว้ในน้ำที่
100 8C สำหรับ 30 นาทีแล้วเย็น 25 8C ,
อิเล็กโทรไลต์วินาทีการรั่วไหลถูกวัดเป็น E2 . การรั่วซึมของน้ำอิเล็กโทรไลต์คล้ายเนื้อเยื่อประสาน
ชื่อ E0 . การรั่วไหลของอิเล็กโทรไลต์แบบสัมพัทธ์ ( rel ) คำนวณได้ดังนี้

¼ E1 E2 rel E0

p
% E0 100 เปอร์ออกซิเดส ( ฝัก ) และ Catalase ( แมว ) กิจกรรมจากเมล็ดของ
การเก็บเกี่ยวแต่ละวัด . เมล็ด ( 0.5 g FW ) เก็บ
โฮโม 10 มิลลิลิตร 50 มม. ( ฟอสเฟตบัฟเฟอร์พีเอช 7.8 )
) 01 mM EDTA และ บัตรแข็ง 2 มิลลิเมตร โดยแยกเป็นระดับที่ 10 , 000 กรัมเป็นเวลา 15 นาที และน่าน
ใช้วิธีเอนไซม์และทั้งหมดของการสกัดก้าว
ศึกษาที่ 1 – 4 8C ( เทรเวอร์และเฟลทเชอร์ , 1994 ) .
กิจกรรมฝักได้ตามวิธีของคู et al .
( 2005 ) วิเคราะห์ส่วนผสมประกอบด้วย 3 ml
50 มม. ( ฟอสเฟตบัฟเฟอร์ pH 7.0 ) , ค่าร้อยละ 1 0แบตเตอรี่ 4 % และเอนไซม์ สารสกัด
เพิ่มการดูดกลืนแสงเนื่องจากการเกิดออกซิเดชันของค่าวัด
ที่ 470 นาโนเมตร กิจกรรมของเอนไซม์ถูกคำนวณในแง่ของมิลลิโมลของไดออกซิไดซ์ min1 G1
น้ำหนักสดที่ 37 8C , และจะแสดงเป็นคุณ FW min1 G1
กิจกรรมแมววัดที่
37 8C ตาม Trevor และเฟลทเชอร์ ( 1994 ) เอนไซม์ (
ที่มีอยู่ 50 mm ( ฟอสเฟตบัฟเฟอร์ pH 7.0 ) , H2O2 0.4% และ
สารสกัดเอนไซม์ในปริมาณรวม 4 กิจกรรม คือ แมว มล.
ประมาณโดยลดลงในการดูดกลืนแสงของ H2O2 ที่ 240 nm และ
U G1 จะแสดงเป็น FW min1

ทั้งฝักและแมวมีกำหนดสามซ้ำ


2.5 แหลมเหนือ ( PAS ) และวัดความเข้มข้น

2 ตามวิธีของแกลสเติ้น ฟลอเรส ( 1982 ) และมีการปรับเปลี่ยนเล็กน้อย
03 g FW ของเมล็ดแต่ละเก็บเกี่ยวถูกบด 3 ml 5 %
( w / v ) กรด perchloric เย็นหนาวใช้ครกและสาก
homogenates ถูกเก็บไว้ในน้ำแข็งอาบน้ำเป็นเวลา 1 ชั่วโมง และจากนั้น
ระดับที่ 23 , 000 G สำหรับ 30 นาทีที่ 4 8C ; น่านคือ
ย้ายท่อ หอยโข่งใหม่และเก็บรักษาที่อุณหภูมิ 70 8C สำหรับ
ปริมาณของ PAS . สารสกัดจากเมล็ด เป็น benzoylated .
หนึ่งมิลลิลิตร2 mol L1 โซดาไฟผสมกับ 500 ml สูง . หลังจากเพิ่มของเบนโซอิลคลอไรด์
10 มิลลิลิตร จำนวน
vortexed 20 S แล้วบ่มนาน 20 นาที ที่ 37 8C ดังต่อไปนี้
บ่มที่อุณหภูมิสูง , 2 ml เกลืออิ่มตัวคือ
เพิ่ม เบนโซอิล polyamines สกัด 2 มล อีเทอร์ และ vortexed
10 . หลังการปั่นเหวี่ยงที่ 1500 กรัมเป็นเวลา 5 นาที
ที่ 4 8C ,1 มิลลิลิตรของอีเทอร์ระยะรวบรวม , ระเหยแห้งภายใต้กระแส

อากาศอบอุ่น และ redissolved 100 ml

ส่วนสกัดเมทานอล benzoylated ถูกกรองผ่านเยื่อกรอง 0.22 มม.
แล้วตัวอย่างที่อุณหภูมิห้องผ่าน
6.0 มม. 150 มม. 5 มม. ขนาดอนุภาค ( กลับเฟส c18 ) คอลัมน์
( clc-ods แพ็คชิม ) ปาส ยอดถูกตรวจพบโดยการ spd-20a
( Shimadzu ) ค่าตรวจที่ 254 นาโนเมตร ระยะเคลื่อนที่
ประกอบด้วยเมทานอล : น้ำ ( 64:36 ) ที่อัตราการไหล 1.0 มล. min1
.
มาตรฐานแหลมเหนือสาม ( Sigma Chemical Co . )
ใส่และเตรียมส่งเสริม , SPD ที่ความเข้มข้นต่างๆ สำหรับการพัฒนาของเส้นโค้งมาตรฐาน
.
2.6 สถิติวิเคราะห์
สถิติวิเคราะห์โดยซอฟต์แวร์3 ซ้ำการทดลองสำหรับพารามิเตอร์วัด ments . โดยค่าร้อยละ arcsine แปลง
ก่อนการวิเคราะห์ทางสถิติ การใช้สมการถดถอยระหว่างปริมาณโพลีเอมีนในระหว่างการพัฒนาและสรีรวิทยาเมล็ดพันธุ์ได้